丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤保护作用的研究

曾晓艳 ，廖亮英 ，姜 帆 ，谭朝阳 ，杨先国 ，陈贵海 *

（1.广西中医学院，广西 南宁 530001；2.湖南中医药大学附属第一医院，湖南 长沙 410007；3.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤保护作用的研究

曾晓艳1，廖亮英2，姜 帆2，谭朝阳3，杨先国3，陈贵海2*

（1.广西中医学院，广西 南宁 530001；2.湖南中医药大学附属第一医院，湖南 长沙 410007；3.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

目的 探讨丹栀逍遥散对D-氨基半乳糖（D-GaIN）所致大鼠急性肝损伤的保护作用机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为空白组，模型组，联苯双酯组，丹栀逍遥散高、中、低剂量组，每组10只。连续灌胃给药7 d后，除空白组腹腔注射等体积生理盐水外，其余大鼠均腹腔注射D-GaIN。24 h后，检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肝匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）的含量。结果 丹栀逍遥散能明显抑制由D-GaIN所致的血清中ALT、AST以及肝匀浆中MDA含量的升高，并提高肝匀浆中SOD和GSH-PX的含量，其中大部分差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丹栀逍遥散对D-GaIN所致的大鼠急性肝损伤具有保护作用。

丹栀逍遥散；急性肝损伤；D-氨基半乳糖；大鼠；牡丹皮；栀子；当归

肝损伤是由各种肝脏疾病所产生的病变结果。临床上造成急性肝损伤的原因主要有病毒感染、服用药物不当、食物添加剂、乙醇摄入过量、误服有毒食物、放射线损伤等，其长期存在往往是导致肝纤维化，甚至肝硬化、肝癌发生的重要因素。近年来，对急性肝损伤的防治已成为国内外学者纷纷研究的一个重要课题。丹栀逍遥散出自薛己的《内科摘要》，又名八味逍遥散、加味逍遥散，是在逍遥散基础上加牡丹皮、栀子组成，具有疏肝健脾、清热活血的功效，适用于肝郁血虚生热诸症。本方广泛运用于临床各科疾病，在保肝护肝方面已被证实有较好的疗效[1]。本实验通过建立动物模型，对其作用机制进行探讨，现将实验方法及结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康SD雄性大鼠，体质量180～200 g，由上海西普尔-必凯实验有限公司提供，室温18～20℃，湿度为65%～70%，合格证号：2008001606577。

1.1.2 药物 丹栀逍遥散由牡丹皮、栀子、当归、芍药等8味中药组成，中药饮片购自湖南老百姓大药房，煎成汤剂，浓缩备用，其生药浓度为2 g/mL。联苯双酯滴丸（1.5 mg/粒，浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：090604），试验前用蒸馏水配成所需浓度，供动物灌胃用。

1.1.3 试剂 D-氨基半乳糖，美国sigma公司产品，批号：70M1194V。天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）中生北控生物科技股份有限公司产品，批号分别为：100741.201010、101521.201011。丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号分别为：20101206、20101129、20101222。

1.1.4 仪器 AF-100制冰机，意大利斯科茨曼（Scotsman）公司；Allegra 25R台式高速冷冻离心机，美国贝克曼库尔特公司；AY-120电子分析天平，日本岛津；DJ-10002电子天平，福州华志科学仪器有限公司；XHF-D高速分散器（内切式匀浆机），宁波新芝生物科技股份有限公司；RT-1904C型半自动生化分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司；UV-1800紫外分光光度计，日本岛津。

1.2 方法

1.2.1 动物模型制备 将D-氨基半乳糖（D-GaIN）用无菌生理盐水配成10%的溶液，并用1 mmol/LNaOH将pH值调至7.0，末次给药后1h，将模型组、各给药组大鼠腹腔内一次性注射D-GaIN（预实验确定剂量为800 mg/kg），制备急性肝损伤大鼠模型。

1.2.2 动物分组及给药方法 实验动物适应性喂养5 d后，按体质量随机分为6组，即空白对照组、模型组、联苯双酯组、丹栀逍遥散高、中、低剂量组，每组10只大鼠。给药剂量均按60 kg成人体表面积换算，联苯双酯滴丸日给药量为13.5 mg/kg，丹栀逍遥散高、中、低剂量组日给药量为15.33、7.66、3.83 g/kg，大鼠灌药体积为10 mL/kg，空白组、模型组给予等体积生理盐水灌胃，所有大鼠连续灌胃7 d，1次/d，末次给药后1 h，模型组和各给药组大鼠按0.8 g/kg腹腔注射D-GaIN，空白组腹腔注射等体积生理盐水，24 h后，经腹腔注射10%水合氯醛麻醉，麻醉后腹主动脉取血，离心，取血清备检，处死大鼠后，迅速解剖并摘取一部分肝脏组织制备肝匀浆备检，按照试剂盒要求测定各项指标。

1.3 统计学分析

实验数据采用SPSS 15.0软件进行统计分析，计量资料以“”表示，各组间计量资料比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 丹栀逍遥散对D-GaIN致急性肝损伤大鼠血清AST、ALT含量的影响

与空白组比较，模型组大鼠血清AST与ALT均明显增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，丹栀逍遥散高、中、低剂量组大鼠血清AST、ALT活性均明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01），结果见表1。

表1 各组大鼠血清AST、ALT含量比较 （n=10，）

表1 各组大鼠血清AST、ALT含量比较 （n=10，）

注：与空白组比较**P＜0.01；与模型组比较##P＜0.01。

组 别 药物剂量（g/kg） AST(U/L) ALT(U/L)空白组 — 172.98±16.87 60.48±9.37模型组 — 12 079.42±582.72** 7 658.66±442.18**联苯双酯组 0.013 5 3 034.1±501.68## 2 253.18±301.06##丹栀高剂量组 15.33 3 457.07±349.40## 3 697.10±499.98##丹栀中剂量组 7.66 6 033.90±871.34## 4 130.62±445.88##丹栀低剂量组 3.83 7 118.2±1 101.12## 5 999.14±602.28##

2.2 丹栀逍遥散对D-GaIN致急性肝损伤大鼠肝匀浆中SOD、MDA、GSH-PX含量的影响

与空白组比较，模型组肝匀浆SOD与GSH-PX含量明显降低，MDA含量明显升高，差异有统计学意义（P<0.01）；与模型组比较，联苯双酯组、丹栀逍遥散高、中剂量组肝匀浆SOD与GSH-PX含量明显升高，MDA含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；低剂量组肝匀浆SOD含量升高，MDA含量降低，差异有统计学意义（P<0.01）；但GSH-PX含量升高不明显。结果见表2。

表2 各组大鼠肝匀浆中SOD、MDA、GSH-PX含量比较（n=10，）

表2 各组大鼠肝匀浆中SOD、MDA、GSH-PX含量比较（n=10，）

注：与空白组比较 **P＜0.01；与模型组比较 #P＜0.05，##P＜0.01。

组 别 SOD(U/mg) MDA（nmol/mL） GSH-PX（U/mL）空白组 0.42±0.01 13.58±1.65 101.56±24.97模型组 0.34±0.01** 50.04±14.39** 70.30±5.02**联苯双酯组 0.40±0.01## 15.49±3.74## 85.12±5.06##丹栀高剂量组 0.39±0.02## 15.11±3.04## 77.18±2.62##丹栀中剂量组 0.36±0.02## 16.08±3.74## 74.22±2.77#丹栀低剂量组 0.36±0.02## 20.79±3.94## 71.12±1.44

3 讨论

D-GaIN致肝损伤模型是经典的动物模型之一，较四氯化碳（CCl4）方便，且可逆性和重复性较好，与人类病毒性肝炎的病理机制十分相似，是目前公认的比较好的实验动物模型。

D-GaIN不是直接杀死肝细胞的原浆毒，而是间接作用的肝毒剂。对肝脏的损伤主要是通过肝细胞内尿苷二磷酸（UDP）夺获，影响肝细胞的能量代谢及DNA、RNA和蛋白质合成；与肝实质细胞膜特异性结合，影响其完整性，增加细胞内钙离子浓度；引起谷胱苷肽耗竭；释放肿瘤坏死因子TNF-α，引起细胞凋亡来实现的[2]。更多的研究表明，D-GalN还通过产生自由基及其启动的脂质过氧化连锁反应进一步加剧肝细胞的损伤[3]。

SOD是超氧阴离子自由基的清除剂，可抑制自由基启动的脂质过氧化反应，对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，其活力的高低间接反应了机体清除自由基的能力[4]。MDA是脂质过氧化反应的产物之一，可严重破坏细胞膜的结构，导致细胞肿胀坏死，其含量的高低间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度[5]。二者联合检测可反映机体细胞受自由基攻击的严重程度。GSH-PX可以清除自由活性氧，保护细胞膜结构和功能的完整性。

丹栀逍遥散由柴胡、牡丹皮、炒山栀、当归、芍药、茯苓、炒白术、炙甘草组成，具有疏肝清热，养血健脾之功效。方中柴胡疏肝解郁，牡丹皮清血中之伏火，炒山栀清肝热并导热下行，当归养血和血，白芍养血敛阴，柔肝缓急，茯苓、白术、甘草益气健脾。单味药的研究结果表明[6-9]，柴胡对大鼠血清AST、ALT、ALP的升高和TP的降低有一定程度的抑制作用，能改善肝脏的纤维化程度；牡丹皮可显著降低D-GaIN诱导的急性化学性肝损伤大鼠血清AST、ALT、ALP含量，病理检查结果也显示其有明显的保肝作用；栀子提取物可使D-GaIN肝损伤模型小鼠血清AST、ALT活性下降，肝细胞坏死、肝细胞变性等明显改善；当归能明显提高大鼠肝细胞SOD活力，降低MDA含量，具有明显的抗肝损伤作用。

本实验结果表明，丹栀逍遥散能明显抑制DGaIN所致急性肝损伤大鼠血清ALT、AST的活性，升高肝匀浆中SOD、GSH-PX的含量，降低MDA含量，对受损肝脏的保护机制可能与保护肝细胞膜的完整性、增强机体清除自由基能力、减轻脂质过氧化反应有关，其作用机制还有待进一步研究。

[1]吴少东，何建萍.丹栀逍遥散的临床应用[J].陕西中医，2008，29(4)：494-495.

[2]李宏涛，陈国民.D-氨基半乳糖研究的回顾和展望 [J].肝脏，2004，9(3)：209-210.

[3]赵志泉，徐顺福，陈国兴，等.休克/再灌注肝损伤中氧自由基的作用[J].中华消化杂志，1994，14(2):82-85.

[4]陈雪龙.实验性肝损伤动物模型的研究进展[J].实验动物科学，2008，25(3):47.

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[8]陈金英，李向阳.丹皮总苷防治大鼠急性肝损伤的实验研究[J].中国热带医学，2009，9(3):64-66.

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[10]田红剑，陈 斌.当归对大鼠免疫性肝损伤的保护作用[J].中南药学，2003，1(5)：271.

（本文编辑 彭芝配）

Experimental study of protective effects of Danzhi Xiaoyao powder on acute liver injury caused by D-galactosamine in rats

ZENG Xiao-yan1， LIAO Liang-ying2， JIANG Fan2， TAN Zhao-yang3， YANG Xian-guo3，CHEN Gui-hai2
(1.TCM College of Guangxi， Nanning， Guangxi 530001， China;2.First Affiliated Hospital,TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China；3.TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)

Objective To investigate the protective effects of Danzhi Xiaoyao powder on acute liver injury caused by D-galactosamine in rats.Methods 60 male SD rats were randomly divided into control group，model group，bifendate group，and Danzhi Xiaoyao powder low，middle，high dosage group，10 rats in each group.Other rats were injected intraperitoneally with DGaIN except the control group with the same volume of saline after they were performed by gavage once a day and lasted for 7 days.After injected 24 hours，the contents of AST， ALT in serum and the contents of SOD，GSH-PX，MDA in liver tissue were measured.Results Danzhi Xiaoyao powder significantly inhibited the increasing ALT and AST contents in serum and MDA contents in liver tissues and improved the contents of SOD和GSH-PX in liver tissues caused by D-GaIN.Conclusion Danzhi Xiaoyao powder has protective effects on acute liver injury in rats caused by D-GaIN.

Danzhi Xiaoyao powder； acute liver injury； D-GaIN； rats

*陈贵海，男，副教授，硕士研究生导师，E-mali：cg98643@163.com。

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2012.05.007.032.03

2012－03－02

湖南省中医药管理局重点资助项目（201105）。

曾晓艳（1982-），女，湖南湘乡人，硕士研究生，研究方向：中医基础理论气化研究。