浅析无偿献血血液检测结果的影响因素及对策

林江红 武培彪

(巴彦淖尔市中心血站 内蒙古巴彦淖尔 015000)

为了保障临床用血安全,我国的法律法规明确规定献血者血液样本必须进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等项目的检测,只有阴性的血液才能允许用于临床。我们用ELISA检测方法对巴彦淖尔地区无偿献血者血清样本进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP项目的检测,在实际操作中常可见到检测结果为假阳性或假阴性的错误结果。为了避免或减少ELISA检测实际操作中的影响因素,我们对2010年至2011年巴彦淖尔地区2万余份无偿献血者血液样本检测,就影响检测结果比较常见的因素进行了初浅的分析和探讨,报道如下。

1 材料与方法

(1)样本。

巴彦淖尔地区无偿献血者血液样本。

(2)仪器STAR全自动加样器,FAME全自动酶免分析系统;Wellscan MK3酶标仪,Wellscan 4MK2洗板机。

(3)试剂方法ELLSA诊断试剂盒由金豪制药股份有限公司、万泰生物药业股份有限公司、英科(厦门)科技有限公司提供,严格按照各厂家提供的ELISA试剂说明书,对所有被检血液样本进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP项目的检验操作。

2 结果

ELISA试验检测工作中会出现假阳性或假阴性的错误结果。

3 分析

3.1 试剂的影响因素

在对无偿献血者血清样本检测时我们遵照《血站管理办法》的规定,每一份样本都用ELISA法进行HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP等项目的初、复检验,初、复检均选用有批准文号、批批检定报告、防伪标签的2个不同厂家的试剂盒进行筛检,常会遇到同一份样本同一检测项目在相同条件下检测,一家试剂检测阴性,另一家试剂检测阳性,这是因为不同厂家的试剂抗体、抗原组合不同,来源和用量方面也有差异,造成我们在筛检献血员时,容易发生漏检。因此,试剂的选择是保证ELISA试验测质量的关键要素。我们在试验前一定要对购进ELISA试剂进行血清盘的检测。试验前将试剂盒从冰箱中取出后,需要在与室温平衡再进行测定,目的是能使反应微孔的温度较快地达到所需的温度,以满足测定需求。不同批号、不同厂家的试剂,不能混合使用。对于超过有效期的试剂则严禁使用。

4 操作中的影响因素

ELISA试验操作过程有加样、温育、洗板、显色、结果判定5个步骤。加样时间过长会导致孔间差异加大,更不可先把阴阳性及质控血清加好后长时间等待样品;加酶试剂及样品,要加在孔底,不能加在孔壁上,加入量不准,导致试验结果不准确;温育对于ELISA检测是最关键的因素,根据试剂盒的说明书选择温育的时间和温度,加完样本或试剂后将微孔板从室温放入水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃需要一定时间,如果是将微孔板放入温箱即开始计时,这样就容易造成实际测定中温育时间不够,易致弱阳性样本测不出来;洗板的关键是洗板次数选择。洗板次数较少,造成残留,可引起假阳性结果。洗板次数过多,可造成抗原抗体结合物洗脱,造成假阴性结果;在实际的操作中,往往对于显色的时间不够重视,显色时间过短容易造成弱阳性样本的漏检。显色时间过长会使质控值偏高,影响质控图的绘制;读取结果可定性分析也能定量分析,但要在15～30min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10～15cm;定量测定时用酶标仪读取结果,需先预热15～30min再进行测定。

5 样本质量的影响因素

样本质量的好坏直接影响ELISA检测的结果。样本溶血、被细菌污染、样本贮存时间过长反复冻融、样本凝固不全,这些因素均可导致ELISA检测献血者血液样本时,造成假阳性或假阴性的错误结果。样本乳糜的血清中有大量的脂肪颗粒,将其加入微孔中易粘附于微孔内壁,洗板时不易洗去,干扰ELISA检测结果。

样本采集时必须注意避免人为因素引起的溶血和细菌污染;检测的血清样本不能立即检测时,5d内检测的样本可存放于4℃冰箱,1周后检测的样本应低温保存,冻存后融解的样本,应轻柔的充分混匀后再检测;采集血清样本时用带分离胶的采血试管或在采血试管中加入适量的促凝剂,避免样本凝固不全。大力宣传无偿献血相关知识,加强献血者献血前的问诊,防止采集到乳糜的血液,确保血液检测质量。

综上所述,ELISA检测已广泛应用于血站对无偿献血者的筛检和血液的检测工作中。在实际工作中,ELISA试验影响测定结果的因素较多,应采取相应措施,避免或减少影响因素,才能保证血液检测质量,为临床提供合格安全的血液。

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