贞芪酪蛋白肽复合物对Lew is肺癌荷瘤小鼠抗瘤作用及对IL-2、TNF的影响

吴建军，金玉，张延英，刘润，李海龙，吴红彦，李应东，刘凯

(1.甘肃中医学院，甘肃兰州730000;2.兰州大学基础医学院中西医结合研究所，甘肃兰州730000)

国外酪蛋白多肽在保健品、医药等多领域广泛使用。酪蛋白是乳中含量最高的蛋白质，目前主要作为食品原料或微生物培养基使用，利用蛋白质酶促水解技术制得的酪蛋白磷酸肽具有防止矿物质流失、预防龋齿，防治骨质疏松与佝偻病，调节血压，治疗缺铁性贫血、缺镁性神经炎等多种生理功效［1－2］。贞芪酪蛋白肽是根据祖国医学“扶正培本、扶正驱邪”的理论，以黄芪、女贞子及酪蛋白按照一定比例的复合多肽组方，经特定制剂工艺研制而成的。贞芪酪蛋白肽复合物药物血清具有对肝癌肺癌等肿瘤细胞的抑制作用［3－4］，具有提高大鼠机体的免疫力，保护骨髓和肾上腺皮质功能的作用［5－6］。贞芪酪蛋白肽复合物在体抗肿瘤及对荷瘤鼠血清细胞因子调节作用需要进一步明确，白细胞介素－2(interleukin－2，IL－2)是T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子、肿瘤坏死因子－α(Tumor Necrosis Factor，TNF)是一种能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子［7］。本研究利用Lewis肺癌荷瘤鼠模型对贞芪酪蛋白肽复合物抗肿瘤进行研究，并试图从体内揭示贞芪酪蛋白肽复合物对荷瘤鼠免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 动物模型与瘤株SPF级8周龄昆明种小鼠72只，雌性，体质量18～24 g，由甘肃中医学院动物实验中心提供，选用培养的Lewis肺癌细胞，按1∶3比例制成瘤细胞悬液，常规接种在小鼠右前肢腋窝下，每只接种0.2 mL(瘤细胞数量为106个/mL)。Lewis肺癌由中国医科大学肿瘤研究所提供，甘肃中医学院长期移植传代。

1.2 药物配制与试剂贞芪酪蛋白复合肽，由甘肃中医学院科研中心制备，为棕褐色颗粒状。α肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor－α，TNF－α)、白细胞介素2(Interleukin－2，IL－2)多重抗体试剂购于美国BD公司，其余试剂为国产分析纯。

1.3 给药方法与分组将72只小鼠除随机抽取12只作为阴性对照组之外，其余接种后24 h移植瘤小鼠随机分为5组，分别模型组，阳性对照组，贞芪酪蛋白肽复合物1.5、3.1、3.5 g/kg 3个剂量组，阳性药物采用金复康口服液(江中集团一村制药有限责任公司生产，批号101208，给药剂量0.1 mL/10 g);连续灌胃给药10 d，第11天小鼠眼球放血后脱颈处死，2 000 r/min离心制备小鼠血清，利用美国BD公司液相多重检测细胞因子过程说明在流式细胞仪上对IL－2和TNF进行检测，剥离并摘除荷瘤鼠实体瘤、胸腺及脾脏称质量。

1.4 统计方法瘤质量、脾脏指数、胸腺指数及IL－2和TNF计量资料用±s表示，服从正态分布采用单因素方差分析，两两之间比较采用q检验，对计量资料不服从正态分布采用秩和检验;所有数据均用SPSS13.0软件分析，用P≤0.05做为检验水准。

抑制率(%)=［(模型对照组瘤质量－实验组瘤质量)/模型对照组瘤质量］×100%

2 结果

2.1 对荷瘤小鼠实体瘤瘤质量的影响给药10 d后处死小鼠剥离实体瘤，对实体瘤采用同样方法剥离，剥离后瘤质量马上称质量，贞芪酪蛋白多肽复合物高剂量组瘤质量与模型组比较有统计学意义(P＜0.05)。具体数据见表1。

表1 贞芪酪蛋白多肽复合物对荷瘤鼠瘤质量的影响Tab.1 Effects of Zhenqi Casein Peptide Complexes on the tumor-bearing m ice tumor weight

2.2 对荷瘤鼠胸腺指数和脾脏指数的影响贞芪酪蛋白多肽复合物高、中剂量组荷瘤小鼠胸腺指数与模型组比较，均有统计学意义(P＜0.05)，低剂量组无统计学意义(P＞0.05)。贞芪酪蛋白多肽复合物高剂量组荷瘤小鼠脾脏指数与模型组比较，有统计学意义(P＜0.05)，中、低剂量组无统计学意义(P＞0.05)，结果见图1。

2.3 对荷瘤鼠细胞因子IL－2、TNF的影响贞芪酪蛋白各剂量组荷瘤小鼠血清IL－2、TNF水平呈剂量依赖性升高，贞芪酪蛋白高、中剂量组荷瘤小鼠血清IL－2水平与模型组比较均有统计学意义(P＜0.01)，贞芪酪蛋白高剂量组荷瘤小鼠血清TNF水平与模型组比较均有统计学意义(P＜0.05)，结果见表2。

图1 贞芪酪蛋白多肽复合物对荷瘤小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响Fig.1 Effects of Zhenqi Casein Peptide Com plexes on the tumor-bearing m ice thymus index and spleen index

表2 贞芪酪蛋白多肽复合物对荷瘤小鼠血清IL-2，TNF的影响Tab.2 Effects of Zhenqi Casein Peptide Complexes on the tumor-bearing m ice serum IL-2 and TNF

3 讨论

中医认为肿瘤的发生与转移是由于脏腑机能减退，阴阳气血失调，正气亏虚所致。肿瘤的发病原因比较复杂，早期的预防对肿瘤的防治极其重要，但现实是肿瘤病人大多会由于发现迟而失去手术根除的机会，所以对中、晚期肿瘤病人以提高病人的生存质量、延长存活时间作为临床的主要选择。目前，中西医治疗肿瘤是未来发展的主要方向，中药方剂治疗疾病的作用通常是多靶点、多途径、多层次的整体水平的调节作用，从整体上“扶正驱邪”，回复“正气”，提高人的抗病能力，达到“正气在内，邪不可干”的治疗效果。贞芪酪蛋白复合物是根据祖国医学“扶正培本、扶正驱邪”的理论研制而成，黄芪为补气升阳药物，具有很多功效，黄芪能增强单核巨噬细胞的活性，能促进T细胞，自然杀伤细胞(NK细胞)释放免疫活性物质如干扰素、白细胞介素等［8－9］;女贞子有滋补肝肾、明目乌发的功效，女贞子也是目前抗衰老、抗肿瘤方剂中的主要药物之一［10－11］。酪蛋白多肽(Casein peptides)能促进机体对微量元素的高效吸收，并调节机体免疫功能［12－13］。IL－2是T细胞和NK细胞发挥作用参与免疫反应的关键参与者，同样IL－2水平的升高是诱导肿瘤细胞凋亡的重要信号［14－15］。TNF是促进炎性反应的重要物质［16］，TNF能够有效的促进肿瘤组织坏死，其机理可能与T细胞参与的细胞凋亡有关［17］。文献报道的扶正抗瘤方与化疗药物合用具有增效减毒作用，主要通过提高机体免疫力，改善化疗药物对机体的损伤功效［18］。本研究显示，高剂量贞芪酪蛋白多肽复合物能明显抑制肿瘤生长，提示贞芪酪蛋白肽的抗肿瘤作用，贞芪酪蛋白复合物还能够调节血清IL－2和TNF水平，说明调节免疫功能是其抗肿瘤作用机制的途径之一。

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