鹿茸多肽超声提取工艺研究
2012-01-25李洪江
才 凤,苗 翠,李洪江
鹿茸在我国已有几千年的历史,始载于《神农本草经》。《本草纲目》谓鹿茸能够“生精补髓,养血益阴,强筋健骨,治一切虚损、耳聋、目暗、眩晕虚痢”[1]。鹿茸中的多肽及蛋白质为其主要活性成分,而小分子多肽与大分子蛋白相比,具有活性强、抗原性小、易被人体吸收等优点。传统的提取方法,如加热水提、醇提等,或导致鹿茸多肽的失活,或使人体不能充分利用,造成鹿茸资源浪费。本实验采用超声裂解法破碎细胞,释放有效物质,最大限度地提高鹿茸的利用率。
1 药品、仪器与试剂
1.1 鹿茸药材 购于辽宁西丰。
1.2 仪器与试剂 U-2010紫外可见分光光度计,电热恒温水浴锅,牛血清白蛋白对照品(中国药品生物制品检定所)。所用试剂均为分析纯。试液均按《中国药典》[2]2005年版附录配制。
2 方法与结果
2.1 药材的鉴定与前处理 鹿茸为鹿科动物梅花鹿(Gervus nippon temminck)的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角,经检验,符合《中国药典》[2]鹿茸项下的有关规定。药材前处理:将鹿茸去毛皮,切成片,备用。
2.2 超声提取工艺正交试验设计 称取鹿茸片10 g,以水做溶剂进行超声提取,按L9(34)表进行正交实验,采用福林酚法测定鹿茸多肽含量,并以该含量为指标优选鹿茸多肽超声提取最佳工艺。因素水平见表1,试验结果见表2。
表1 鹿茸多肽L9(34)正交试验因素水平表
表2 正交试验结果
由表2可见,3个因素的极差大小顺序为A>C>B,各因素与水平的组合应为A1B1C3。进一步进行方差分析,结果见表3。
表3 方差分析表
查表得 F0.05(2.2)=19.00,F0.01(2.2)=99.00,经方差分析,发现A因素有显著意义,B因素无显著意义,C因素接近显著值,表明本试验设计较有意义。结合R水平,得出鹿茸多肽提取最佳加水量为10倍量,最佳提取时间为10 min,最佳提取次数为3次。即最佳提取工艺为A1B1C3。
2.3 最佳工艺确证 精密称取鹿茸10 g,按上述最佳提取工艺A1B1C3重复提取2次,测定并计算其鹿茸多肽的含量。见表4。
表4 验证试验表(g)
通过正交验证试验可知,验证试验的鹿茸多肽含量均高于正交试验结果。
3 讨论
通过单因素和正交试验,优化了超声提取鹿茸多肽的工艺条件,最终适宜参数:料液比为1∶10,提取次数为3次,提取时间为10 min。
该试验以水溶液为提取剂,成本低廉,工艺操作简单,而且提取过程中未加入任何有毒物质,因此,安全性较高,适于工业化生产。
[1] 张荣.鹿茸的加工工艺与研究述要[J].辽宁中医药大学学报,2007,9(3):59-60.
[2] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005:303.