江苏省东台地区猪圆环病毒病的流行病学调查

徐 鑫 徐罗康 季爱芳 赵海坤

（1.江苏省东台市农产品质量检测中心，东台 224200；2.江苏省常州市生态技术应用研究所，常州 213131）

猪圆环病毒2型是近几年来发现的一种单链环状DNA病毒，该病与猪的多种疾病综合征有关，该病毒主要引起断奶猪多系统衰竭综合征，导致猪体免疫抑制，从而继发或并发其他疾病。猪圆环病毒最早于1991年在加拿大发现，而后迅速蔓延到世界各地。国外资料显示，绝大多数猪群呈血清学阳性[1]。目前，由圆环病毒引发猪的多种综合征已成为导致养猪场经济损失的主要原因之一，是养猪业面临的杀手。东台地区自2006年以来，一直连续发生“生猪高热病”，给东台养猪业造成了巨大的经济损失，疫情严重的乡镇猪的存栏量减少了60%以上，不少中小型猪场因此而倒闭[2]。本次流行病学调查旨在通过对东台地区猪血清样本进行检测，系统分析PCV2在猪群中的感染及流行规律，为PCV2的防治提供科学依据，为制定科学防控措施提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

6.4 μg/ml重组蛋白抗原；标准小牛血清为杭州四季青生物制品公司产品；羊抗猪IgG酶标抗体（HRP）为Rockland公司产品（使用前1∶5000稀释）；低分子量蛋白标样为Fermentas公司产品；牛血清白蛋白（BSA）购自华美生物工程公司

分析纯级国产化学试剂：包被缓冲液（0.05M，Na2CO3/ NaH CO3，pH9.6）、PBS（每1 000 ml去离子水中NaCl 8 g，KCl 0.2 g，Na2HPO41.44 g，KH2PO40.24 g，pH7.4）、PBST（0.01 mol/L，pH7.4，PBS+0.5% Tween-20）、底物溶液（24.3 ml 0.1mol/L柠檬酸、25.7 ml 0.2mol/L 、Na2HPO4、50 mlDDW）、2 mol/L H2SO4；

实验室保存的PCV2阳性血清、PCV2阴性血清。

1.1.2 待检样品的来源与处理

被检血清样本采自东台市东蹲片、东南片、安梁富片、堤西片、市区（屠宰场）5个不同地区，采集范围覆盖全市24个镇、区计50个猪场、1个屠宰场。除经产母猪采用耳静脉采血外，其余猪全部采用前腔静脉采血法无菌采血，3～5 ml/头，以4 000 r/min的速度离心5 min后共获得血清249份，－20℃保存备用。采样猪包括经产母猪、屠宰猪、中等大育肥猪、断奶仔猪及哺乳仔猪，所有采样猪均为未免疫猪。

1.2 方法

1.2.1 试验方法

采用已建立的间接 ELISA检测法。

1.2.2 试验步骤

在聚苯乙稀微孔酶标板上，先用纯化好的重组蛋白在最适包被条件下包被酶标板，封板膜封板4 ℃过夜；再在96孔U形底聚丙微量板上用PBS分别将待检血清作1∶40稀释；将包被好的酶标板倾去孔内液体，用PBST（0.01 mol/L，pH7.3，PBS+0.5% Tween-20）洗涤3次，5 min/次，在吸水纸上拍干，加入5%牛血清封闭液，200 μL/孔，37 ℃反应3 h；封闭后，与前面一样进行洗涤，分别加入稀释好的待检血清100 μL/孔加入酶联反应板，同时作PCV2阳性血清和阴性血清对照，37 ℃反应2 h；洗涤后，加入1∶5 000稀释的HRP-羊抗猪IgG二抗，100 μL/孔，在37 ℃反应2 h；洗涤后每孔加入新鲜配制的底物溶液100 μL，37 ℃显色15 min，加2 mol/L H2SO4100 μL终止液终止反应，在酶联检测仪上读处OD490值，进行结果判定。

2 结果与分析

2.1 血清样品数量

共获得249份猪血清，其中经产母猪血清28份，屠宰猪血清21份，中猪血清100份，断奶仔猪血清60份，哺乳仔猪血清40份。

2.2 检测结果

按照研究已建立的间接ELISA检测方法及其阴阳性临界值的确定原则，即样本OD490≥0.4，判定为阳性，样本OD490＜0.4的判定为阴性。通过对249份猪血清的检测，共发现PCV2抗体阳性血清175份，其中经产母猪阳性血清26份，屠宰猪阳性血清17份，中猪阳性血清69份，断奶仔猪阳性血清34份及哺乳仔猪阳性血清29份；不同区域猪血清阳性率不相同，东蹲区80.88%，东南区70%，安梁富区65%，堤西区55%以及市区80.95%；这次试验所检测的猪血清样品采自于东台地区51个猪场（其中20个规模场、30个散养场、1个屠宰场），分布于东台5个区（东蹲区、东南区、安梁富区、堤西区、市区），共有阳性猪场51个，阳性猪场率为100%；经产母猪抗体阳性率92.86%，屠宰猪抗体阳性率80.95%，中猪抗体阳性率69%，断奶仔猪抗体阳性率56.67%及哺乳仔猪抗体阳性率72.5%，总平均阳性率为70.28%；不同养殖方式猪血清阳性率不同，规模场73.91%，散养场62.22%。

结果显示，不同生长阶段猪群和不同规模猪群的PCV2抗体均具有一定的差异性，具体分析可见后面讨论章节。

3 讨论

用已建立的ELISA方法初步进行了送检血清样品的检测，从检测的结果来看，目前我国的猪群中广泛存在PCV2的抗体，249份中175份呈阳性，阳性率达70.28%，这与临床上PCR检测PCV2核酸阳性率70.70%具有一定的相关性。

本试验血清是随机采样的，涉及东台不同类型的猪只包含了母猪、大猪、中猪、断奶仔猪及哺乳仔猪，因而具有一定的代表性。

以上数据都充分说明：PCV2已在东台地区猪群中普遍存在，并且感染严重。而我们知道东台地区近年饲养的猪多为自繁自养或本地区种猪场相互引进，这说明东台猪群至少在几年前就已经感染了PCV2，只是未引起注意和重视。不同区域猪群阳性率不同，不同养殖方式猪群阳性率不同。说明PCV2感染范围广之外还具有差异性，这与各地猪场猪群日龄的长短、饲养管理水平的高低、猪的营养状况、机体的免疫力有关外，与猪场所处地理位置、区域特性、养殖环境以及交通状况也有着不容忽视的影响：东南区域养殖场十分密集，一家紧靠一家，并且这种情况到处可见，同时东南区域又与南通地区的养殖大县海安接壤，其养殖环境、疫病状况就可想而知；东蹲线片区是著名乳猪生产之乡，母猪则成为地方特色产业的根本保证和重要资源，而母猪的免疫向来一直是防疫的漏洞，也是一直比较令人头疼的事情，PCV2感染当然在所难免，再加上母源抗体的垂直传播使得哺乳仔猪阳性率居高不下；安梁富片区位于204国道沿线，运输活畜及畜产品车辆众多且进出频繁，使得各种动物传染病广泛交叉传播成为可能，所以这3个片区的猪群PCV2感染阳性率相对偏高也就不难理解了。母猪抗体阳性率92.86%，屠宰猪80.95%，中猪69%，断奶仔猪56.67%中还可以看出PCV2抗体阳性率与猪的年龄有一定关系，是随着猪年龄增长而升高的，原因是饲养日龄的增长而感染的机率大增。唯一不同的是本试验中哺乳仔猪的抗体阳性率却远高于断奶仔猪，究其原因最大可能是哺乳仔猪样品血清采自于东蹲片区以及哺乳仔猪体内留有高母源抗体。

本试验中母猪和屠宰猪的阳性率最高。提示在生猪饲养、收购、运输、屠宰等环节均要重视该病防治。任何环节都可能成猪场内外圆环病毒的持续感染，大大增加疫情控制的难度。而且在今后很长时间内会影响东台地区的养猪生产，成为养猪发展的潜在威胁，应引起相关部门领导和养猪业者的高度重视。

我们要警惕“生猪高热病”，据了解有些地区的疫情形势仍十分严峻，即使在疫情初发地区，还有很多猪场不断暴发，发病猪表现出体温升高、皮肤发红，并有呼吸道症状以及消化道症状，发病率和死亡率均很高。要充分认识PCV2与“高热病”的关联性，对PCV2进行了科学防控。实践证明，可以降低生猪死亡率50%～60%。一旦发生PCV2尚无有效治疗方案。抗生素注射和良好的管理，有助于解决继发感染或并发感染。而本病的疫苗正处于试验阶段，控制本病只能采取综合性防制措施：

（1）加强饲养管理，降低饲养密度，减少应激因素。（2）实行严格的进出制度，减少和其他病原的感染。（3）搞好环境卫生消毒。（4）保证猪群的营养水平。（5）做好猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征和猪喘气病的疫苗接种工作。（6）做好猪群平时的药物预防，控制细菌性继发感染。（7）各职能管理部门加强生猪收购、运输、屠宰管理。