胃实热证大鼠模型舌象诊断的建立及评价*

官宗华 宋捷民 张世亮 丁晓越

（浙江中医药大学，浙江 杭州 310053）

胃实热证是中医临床常见证型，临床表现为胃脘灼痛，拒按，渴喜冷饮，或消谷善饥，或见口臭，或牙龈肿痛溃烂，牙齿出血，大便秘结，小便短黄，舌红苔黄，脉滑数。此证多因过食辛辣温燥之品，以致胃火过旺而成。本研究应用病证结合理论，将胃实热证的病与代表性病因嗜食辛辣相结合进行模型的实验研究，依据舌象在胃实热证诊断中占有十分重要的地位这一特点，参照相关研究进展［1-4］设定相关检测指标，建立和评价胃实热证大鼠病理模型及舌象诊断。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级wistar大鼠，20只，体质量220～240 g，雌性，由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号SYXK（浙）2008-0115。

1.2 药物与试剂 吲哚美辛，石药集团，批号：20120328；水合氯醛，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20101218；干辣椒粉；白酒（体积分数 50%）；白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）、内皮素－1（ET-1）、环磷酸腺苷（cAMP）、前列腺素 E2（PGE2）酶联免疫试剂盒均购于杭州弘健生物科技有限公司，批号：201203。

1.3 仪器 HC-3018型高速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；MK3型酶标仪，塞默尔飞世尔仪器有限公司。

1.4 造模方法 将大鼠随机分为空白组、胃实热组，每组10只。胃实热组大鼠腹腔注射吲哚美辛（溶于5%NaHCO3液中），10 mg/kg；给予辣椒、白酒混合液10 mL/kg（干辣椒粉0.1 g/mL，白酒0.1 mL/mL）灌胃，每日2次。空白组灌胃等量的生理盐水。连续1周。

1.5 标本采集与检测

1.5.1 舌象取材方法 在足够光照强度的固定光源下，固定拍摄环境、光照强度，固定焦距，尽量减少人为因素对照片色差的干扰。按50 mg/kg腹腔注射10%水合氯醛，待大鼠麻醉后，用镊子轻轻夹住大鼠舌尖从左轻轻拉出，露出舌根部，使整个舌体与大鼠躯干成直线或小于15°的夹角。用photoshop图片处理软件，将大鼠舌象照片裁剪成980×490 px大小图片，分别设置10条水平与垂直参考线，随机选取6个x与y坐标交点记录该点红色、绿色、蓝色成分数值。

1.5.2 酶联免疫法检测血清中 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1、cAMP、PGE2含量 麻醉大鼠后，腹主动脉取血，分离血清待测。参照试剂盒说明，利用双抗体夹心法，往抗体包被微孔板中加入待测样品或标准品，与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度，通过标准曲线计算样品中各个含量。

1.6 统计学处理 所有数据通过SPSS17.0软件包用单因素方差分析LSD或S-N-K法进行比较检验，用（±s）表示。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般状态 见表1。胃实热证大鼠与空白组大鼠比较口唇、耳朵、尾巴逐渐变红，呼吸逐渐变快，毛色不荣、背毛无光泽，分散，反应先过敏后迟钝，活动先活跃后静卧不动，活动量减少，体质量逐渐减轻，消瘦明显，口鼻干燥，分泌物减少，食量减少，便质黑干硬。

表1 胃实热证大鼠体质量变化（g，±s）

表1 胃实热证大鼠体质量变化（g，±s）

与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。 下同。

第5日 第7日胃实热组 209.83±12.30* 208.83±16.70*第1日 第3日227.70±17.63 215.44±13.51*空白组 10 229.13±11.05 229.00±11.36 228.63±11.66 229.00±11.81组 别n 10

2.2 舌象变化 见表2。与空白组相比，胃实热证大鼠舌色呈红色至绛红色，部分大鼠舌体干燥，稍缺弹性，部分大鼠舌表面无苔。在舌象分析图片中，胃实热证组大鼠与空白组相比舌质多红，暗。通过图片分析软件对其色差进行统计分析发现，胃实热证大鼠的舌象与空白组大鼠的舌象在红色、绿色、蓝色成分上有明显差异（P＜0.05），特别是红色成分差别更加显著，差异有统计学意义（P＜0.01）。

表2 胃实热证大鼠舌象变化（±s）

表2 胃实热证大鼠舌象变化（±s）

组 别 绿色 蓝色胃实热组 83.23±1.57* 89.24±19.56*空白组 89.82±3.95 99.95±3.84红色10 105.59±8.32**10 115.06±3.02 n

2.3 血清生化指标的改变 见表3～表4。胃实热证大鼠血清IL-6、IL-8、IL-10 与空白组相比含量明显增加，cAMP、PGE2的含量减少，差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。

表 3 胃实热证大鼠血清 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1 含量变化（ng/L，±s）

表 3 胃实热证大鼠血清 IL-6、IL-8、IL-10、ET-1 含量变化（ng/L，±s）

IL-10 ET-1胃实热组 16.33±1.17** 51.30±3.18**IL-6 IL-8 77.29±3.43* 368.15±33.33*空白组 10 72.98±1.94 280.65±39.13 14.64±0.41 46.31±0.95组 别n 10

表4 胃实热证大鼠血清cAMP、PGE2含量变化（±s）

表4 胃实热证大鼠血清cAMP、PGE2含量变化（±s）

PGE2（ng/L）胃实热组 62.50±10.63**空白组 103.19±28.57组 别cAMP（nmol/L）10 3.74±0.18**10 4.10±0.16 n

3 讨 论

中医动物模型必须符合中医特色。中医通过望、闻、问、切四诊分析疾病，一般认为动物与小儿一样，同为哑科，以观为主，所以在建立模型时参考并移用中兽医的诊断技术，尽可能对大鼠的呼吸、闻叫、体温、大小便、皮毛、舌象进行观察。舌诊是观察患者舌质和舌苔的变化以诊察疾病的方法，是望诊的重要内容。临床实践证明，在疾病的发展过程中，舌的变化迅速而又鲜明，凡脏腑的虚实、气血的盛衰、津液的盈亏、病情的浅深、预后的好坏，都能较为客观地从舌象上反映出来［5］。本实验发现胃实热证大鼠的舌象与空白组大鼠的舌象比较在红色、绿色、蓝色成分有明显差异，而红色成分差异更加显著。胃实热证大鼠舌象较正常红，符合中医诊断学中红舌主实热的临床意义，病机是由于血得热循行加速，舌体脉络充盈；或因阴液亏乏，虚火上炎，故舌色鲜红。而绿色、蓝色成分出现明显差异，使舌象略微呈现暗红色，成绛舌，绛舌多由红舌进一步发展而成。绛舌主里热亢盛，阴虚火旺。本实验则因久食辛辣之物，使胃有实热及伤其阴血而致，所以除绛舌外，舌头稍缺弹性，部分舌体表面无苔。

由此可见本实验舌象诊断是符合《中医诊断学》［5］舌象特征与临床意义。大鼠其他相应的体征变化，如口渴、口鼻干燥，分泌物减少，便质黑干硬。口唇、耳朵、尾巴逐渐变红，呼吸逐渐变快，毛发稀疏凌乱、喜欢仰卧，个体分散，躁动、兴奋等也较符合热证的诊断依据。

本研究应用“病证结合”理论，采用腹腔注射吲哚美辛与灌胃辣椒白酒相结合建立胃实热证大鼠模型。吲哚美辛和白酒均可抑制胃黏膜环氧化酶，使前列腺素合成减少，致胃黏膜细胞屏障机能减弱，胃酸增高而诱发溃疡［6-7］。辣椒和白酒都属辛热之品，且胃实热证的产生也与长期食用二者关系密切，《症因脉治·胃脘痛》云“饮食不节，伤其胃口……血分素热，又喜辛辣之物，以伤其阴血，则停积于中，而成死血之痛”；有学者［8］认为食用花椒、辣椒、生葱、生蒜、芥末等香料及调味品，刺激胃黏膜，形成急性或慢性损伤。炎性相关生化指标IL-6、IL-8、IL-10及血管内皮损伤因子ET-1含量明显增加，神经内分泌激素cAMP及前列腺物质PGE2含量减少，符合胃实热证胃黏膜主要以黏膜充血、溃疡形成、炎性损伤的特征。因此本实验采用热因素结合腹腔注射吲哚美辛成功建立大鼠胃实热证病理模型。

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