聚丙烯酰胺凝胶电泳法对导入后代重组个体的检测

刘云霞

（锦州市农产品质量检验检测中心，辽宁 锦州 121017）

组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，应用于验证和检测试材的DNA导入情况，通过观察导入后代与供体DNA的共同和差异谱带，来筛选含供体特异DNA谱带的导入后代。这项技术的研究是外源遗传物质导入育种技术不可缺少的一部分。

1 试材

锦269麦、95109麦、340玉米。

2 方法

实验采用无水乙酸钠—冰乙酸系统进行电泳。

2.1 制样

将试材种子浸泡2～4 h，按质量体积比1：2加入样品提取液研磨，然后4000 r/min离心15 min，取上清液，100℃水浴3 min，置冰箱中备用。

2.2 制备胶液

2.2.1分离胶：18.6%Acr——Bis胶液3.0 mL；pH 3.0的 82%乙酸盐缓冲溶液 9.0 mL；1%AP1.5 mL；0.5%VC-FeSO4溶液1.5 mL。

2.2.2浓缩胶：18.6%Acr——Bis胶液3.0 mL；pH 5.0的 82%乙酸盐缓冲溶液 6.5 mL；10%AP 1.0 mL；TEMED 40.0 mL；水 5.5 mL。

2.3 点样

用微量注射器每槽加入20 μL预冷样品液，加入适量甲基绿溶液作为前沿指示剂，上加20 μL40%蔗糖溶液。

2.4 电泳

采用0.3%甘氨酸—乙酸缓冲液，20 mA电流下电泳3 h。

2.5 染色

将凝胶在 200 μL、10%三氯乙酸染色液和 10 μL、1%考马斯亮兰R250染色剂中染色3 h以上。

3 结果

将凝胶置清水中浸泡，背景漂白后观察蓝色谱带。通过观察谱带，发现锦269麦谱带中确有几条特异性条带出现，并且其位点及分布与340玉米的谱带相同，证明锦269麦中确有340玉米基因导入。

综上所述，组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法是外源DNA导入技术的间接验证方法。它应用于导入后代重组个体的检测，具有直观、清晰、准确的特点。