乳腺浸润性导管癌的超声造影增强参数与微血管密度相关性研究

谭旭艳， 王奕萍，武心萍

目前普遍认为乳腺肿瘤的发生、发展和转移呈明显的血管依赖性［1］，却鲜见有关乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma，IDC)病理分化程度与免疫组化微血管密度(microvessel density，MVD)相关性的研究报道，而IDC患者超声造影增强参数与MVD的关系亦无报道。本研究通过对52例不同分化程度的IDC患者超声造影增强参数进行分析，并与免疫组化的MVD检测结果对比，探讨超声动态增强在评价IDC血管生成变化中的应用价值，为IDC分化程度的判定寻求帮助。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2010年8月至2011年10月我院收治IDC患者52例，均为女性。年龄24～78岁，平均44岁，病灶大小8～32 mm。均经手术或超声引导穿刺活检病理确诊。

1.2 仪器与方法

1.2.1 超声造影 使用百胜Technos DU8彩色多普勒超声诊断仪，LA532E变频线阵探头，频率4.5～7.5MHz。机内置实时造影匹配成像技术(contrast-tuned imaging，CnTI)及声学定量时间－强度曲线分析软件。首先对病灶进行常规二维超声检查，然后选取彩色多普勒显示血管最丰富切面，启动CnTI，机械指数＜0.1。超声造影剂采用Sono Vue，每次剂量3.5 mL，经肘静脉团注;同时启动TimeInt按扭，以相同大小的圆形取样框选取病灶内造影剂灌注最强区域为感兴趣区，机器自动绘制时间－强度曲线，获取造影开始增强时间，峰值时间，峰值强度和曲线下面积等参数。每个病灶在不同部位分析3次，取均值。

1.2.2 病理及MVD检测 52例患者的病理标本经10% 甲醛固定，常规石蜡包埋，HE染色，肿瘤病理分级按WHO标准分为高分化级及低分化级。兔抗人CD34单克隆抗体(购自福州迈新生物技术开发有限公司)，按SP试剂盒说明书操作。结果由两名有临床经验的医师双盲进行结果统计。CD34阳性结果判断以细胞浆或细胞膜出现棕色颗粒为阳性细胞判断标准。MVD测定参照Weidner计数法［2］:首先在低倍镜(40倍)下确定3个着色最密集的区域，然后在200倍光镜下计数3个视野内的血管数，计算其平均值作为该病灶的MVD。

1.3 统计学方法

所有资料分析均应用SPSS12.0统计软件统计分析完成。计量资料用表示，组间均数比较采用χ2分析，组间多重比较采用LSD-t检验，两变量资料相关分析用Pearson积差相关分析方法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理及MVD检测结果

HE染色证实，52例IDC中，高分化组25例，低分化组 27例。IDC低分化组 MVD为(4.32±1.07)%，高分化组 MVD 为(2.87 ±0.97)%(见表1);经方差分析，IDC的高分化组与低分化组的MVD差异有统计学意义(P＜0.001)。

表1 52例不同分化组IDC的MVD比较(n=3)

2.2 超声造影增强结果

由表2可见，IDC低分化组的峰值强度、曲线下面积均显著大于高分化组的相应参数，差异有统计学意义(P＜0.01);而两组间开始增强时间、峰值时间虽无统计学意义(P＞0.05)，但低分化组低于高分化组。

表2 52例IDC超声造影增强参数比较(n=3，x±s)

2.3 超声造影增强参数与MVD的相关性

超声造影增强参数中的峰值强度、曲线下面积与MVD显著性相关(P＜0.001)，其中曲线下面积与MVD相关性最好(r=0.89，P ＜0.001);开始增强时间、峰值时间与MVD则无明显的相关性(P＞0.05)，详见表3。

表3 超声造影增强参数与MVD表达相关性

3 讨论

IDC分化程度的高低直接影响其诊断、病理分级、复发及转移等预后的判定。不同分化程度肿瘤血供的差异性不仅表现在血流有无或多少，也直接影响着肿瘤分化和生成的微血管构筑的形态学变化即MVD［3］。超声造影增强参数可以进一步定量分析肿瘤内部微血管灌注的功能学变化特征及差异［4］，因此用超声造影增强参数探讨和评判IDC的分化程度与微血管密度相关性研究临床意义重大。

研究肿瘤血管生成最直接的方法就是对肿瘤标本行血管数量测量［2］。CD34抗体被认为是恶性肿瘤血管内皮细胞具有较高敏感性和特异性的标志物，其表达与肿瘤内皮细胞增殖、移行有关，CD34表达显示的MVD目前已成为评价肿瘤血管生成的金标准［3］。本组结果显示IDC低分化组的MVD显著高于IDC高分化组的MVD(P＜0.001)，两组比较有统计学差异。在乳腺癌组织或有恶变趋势的组织中MVD较高，而正常组织或良性肿瘤MVD较低，即IDC的分化程度与MVD存在一定的关系。随着肿瘤病灶中MVD增加，其发生和发展为恶性肿瘤的危险性也显著增加［5］，提示病理的分化呈降低趋势，肿瘤的恶性程度升高，预后差。

本研究应用SonoVue结合CnTI技术，通过超声造影对时间－强度曲线分析获得增强参数，结果显示IDC低分化组峰值强度、曲线下面积两项参数均高于IDC高分化组(P＜0.01)。病理佐证乳腺癌间质中弥漫分布粗细不均的新生血管，结构不完整，平滑肌及神经支配缺乏，血管舒缩成份缺如，异常扩张的大血管和裂隙状新生血管并存等特点［6］，导致IDC尤其是分化差的IDC血液灌注及血流量明显增加。部分学者观察到低分化的肿瘤在组织学上表现为窦状血管腔较分化好的肿瘤明显扩张，IDC在血管生成因子的诱导下产生大量的畸变血管，合并动静脉瘘，因此低分化IDC的血管构筑模式造成造影时具有更快更强更多的灌注特征［7-8］。IDC低分化组增强时间、峰值时间均小于高分化组的相应参数，但统计学比较无差异。可能与样本量较小，在非典型增生及部分纤维腺瘤合并时血管增多，血管扩张导致早期灌注增加等因素有关。利用超声造影增强参数研究IDC的分化程度及相应的时间鉴别点还有待继续积累临床病例及深入研究IDC造影剂增强参数特征。

峰值强度反映了病灶血管床内造影剂微泡总量，与病灶组织的血流灌注量有关;曲线下面积反映了造影剂流量随时间的变化，是流速、流量和时间三者的全面评估，综合反映肿瘤的血管床，因此峰值强度及曲线下面积是与MVD相关性最高的重要参素［9］。本组研究结果显示峰值强度、曲线下面积与MVD显著相关(P＜0.001)，其中曲线下面积与MVD相关性最好(r=0.89，P＜0.001)。结果间接提示了IDC的MVD值的增高预示着瘤体生长速度加快，转移可能性增加和患者生存期缩短，对于帮助判定IDC的分化程度具有一定的应用价值，此与方华等［10］的研究结论相似。

既往研究肿瘤的血管生存最直接的方法是对肿瘤手术后标本进行血管数量的测量，方法滞后，不能在手术前和放疗前做出实时无创的评价，难以满足新近提倡的新辅助化疗的临床要求。血管生存尤其是MVD的研究对IDC的分化程度及发生发展起重要作用。超声造影定量参数在病理分化程度不一的IDC中有显著差异，与病理MVD间有良好的相关性，是术前无创性评估肿瘤血管生存、评价预后的实用性影像技术。

［1］张渊，江泉，陈剑，等.乳腺肿瘤超声造影与微血管密度及血管内皮生长因子的相关性研究［J］.中华超声影像学杂志，2012，21(1):52-55.

［2］Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer［J］.Am J Pathol，1995，147(1):9-19.

［3］李颖嘉，张云昆，周晏梅.超声造影微血管成像对乳腺良恶性肿瘤微血管构筑的评价［J］.中国超声医学杂志，2009，25(6):559-563.

［4］Kettenbach J，Hellbich TH，Huber S，et al.Computer-assisted quantitative assessment of power Doppler US:effects of microbubble contrast agent in the differentiation of breast tumors［J］.Eur J Radiol，2005，53(2):238-244.

［5］Guine bretiere JM，Le Monique G，Gavoille A，et al.Angiogenesis and risk of breast cancer in women with fibrocystic disease［J］.J Natl Cancer Inst，1994，86(8):635-636.

［6］Senger DR，Van de Water L，Brown LF，et al.Vascular permeability factor(VPF，VEGF)in tumor biology［J］.Cancer Metastasis Rev，1993，12(3-4):303-324.

［7］Yamashita Y，Fan ZM，Yamamoto H，et al.Spin-echo and dynamic gaclolinium-enhanced FLASH MR imaging of hepatocellular carcinoma:correlation with histopathologic findings［J］.J Magn Reson Imagine，1994，4(1):83-90.

［8］Du J，Li FH，Fang H，et al.Correlation of real-time gray scale contrast-enhanced ultrasonography with microvessel density and vascular endothelial growth factor expression for assessment of angiogenesis in breast lesions［J］.J Ultrasound Med，2008，27(6):821-831.

［9］Lim AK，Patel N，Eckersley RJ，et al.Hepatic vein transit time of SonoVue:a comparative study with Levovist［J］.Radiology，2006，240(1):130-135.

［10］方华，李凤华，杜晶，等.乳腺肿瘤实时灰阶超声造影与微血管密度相关性研究［J］.中国超声医学杂志，2009，25(6):555-558.