HPLC法测定宫颈炎康栓的含量

凌朝珍 唐 新 梁 燕

1.广西南宁市邕宁区蒲庙镇卫生院,广西南宁 530200；2.广西康华药业有限责任公司，广西南宁 530003

HPLC法测定宫颈炎康栓的含量

凌朝珍1唐 新2梁 燕2

1.广西南宁市邕宁区蒲庙镇卫生院,广西南宁 530200；2.广西康华药业有限责任公司，广西南宁 530003

目的建立高效液相色谱法测定宫颈炎康栓中苦参碱的含量。方法采用Diamonsil C18（2）（5μm，4.6 mm×250mm）色谱柱，乙腈-水相（0.1%磷酸+0.4%三乙胺，pH7.0）（30：70）为流动相，流速为 1.0ml·min-1，检测波长为220nm。结果苦参碱在0.0620-0.620mg/mL范围内线性关系良好，r=0.99991，平均回收99.56%，RSD=0.64%。结论该法简便、快速、专属性好，结果准确、可靠。

苦参碱；宫颈炎康栓；高效液相色谱法

宫颈炎康栓系广西康华药业有限责任公司拳头产品，为原中药三类新药，于2001年5月获得新药证书及生产批件，自正式投产以来，立即以其疗效确切、使用方便、毒副作用少等特点深受千百万妇女宫颈炎患者的好评。该中药主要成份为苦参、枯矾、苦杏仁、冰片等，其中苦参碱含量测定在原标准。本文为此具体探讨了HPLC法测定宫颈炎康栓的含量方法与效果。

1 仪器与试药

安捷伦1100高效液相色谱仪（VWD检测器），美国安捷伦科技公司。Diamonsil C18（2）色谱柱，5μm，4.6mm ×250mm。

苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110805-200507，供含量测定用）。宫颈炎康栓及缺苦参的阴性对照样品为广西康华药业有限责任公司自制样品。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

以十八烷基硅烷化键和硅胶为填料；乙腈-水相为流动相；检测波长220nm；流速为1.0mL/min；柱温为室温。

2.2 测定方法

精密称取苦参碱对照品适量，加高纯水溶解并定量稀释制成1mL约含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；另取本品10粒，切碎并混匀，精密称取约1g，置50mL锥形瓶中，精密加入氯仿15mL，置水浴锅回流提取1h，取出，过滤，挥干溶剂，加甲醇适量溶解残渣，并转移至50mL量瓶中，定容，摇匀，静置，取上清液用0.22um微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。取2种溶液各10μL，用外标法以主峰面积定量。

2.3 色谱效果

图 1 对照品（A）、样品（B）、阴性对照品（C）色谱图

以高纯水为溶剂，制备对照品溶液，在上述色谱条件下，取10μl，注入液相色谱仪。色谱图见图1。

2.4 线性关系精精密吸取以上对照品溶液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别置10ml量瓶中，加高纯水稀释至刻度，摇匀，进样测定。则回归方程为：Y＝1.4539×104X+37.5798，r=0.99991，表明苦参碱在0.0620～0.620mg/mL范围内时，进样量10μL与苦参碱峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

取对照品溶液重复进样5次，每次10 μL，测得苦参碱的峰面积的RSD为0.65%。

2.6 重复性实验

对同一批供试品，按正文拟订的方法平行测定6份，结果苦参碱的平均值为2.50mg/g。

2.7 稳定性实验

取同一供试品溶液在室温下立即测定，放置 4、12、20、24h 重新测定，结果峰面积测得值分别为 942.1、938.1、944.5、929.3 平均值 为 938.37，RSD 为0.55%，峰面积基本一致。

2.8 回收率实验

取已知含量 （苦参碱的含量为2.50mg/g）的供试品（100510 批）约 1.0g，共9份，精密称定，置50mL锥形瓶中，加入氯仿15mL，精密称取苦参碱对照品2.4、2.4、2.4、3.0、3.0、3.0、3.6、3.6、3.6， 分别加入以上三角瓶中，拌匀，置水浴锅回流提取1h，取出，过滤，挥干溶剂，加甲醇适量溶解残渣，并转移至50mL量瓶中，定容，按外标法计算平均回收率为99.56%，RSD为0.64%。

表1 回收率试验结果表

2.9 样品测定

精密称取苦参碱，加高纯水进行溶解稀释，制成 1mL约含0.15 mg的溶液，将此溶液作为对照品溶液；另取本品10粒，精密称取约1g，置50mL锥形瓶中，精密加入氯仿15mL，置水浴锅回流提取1h，取出，过滤，挥干溶剂，加甲醇适量溶解残渣，并转移至50mL量瓶中，定容，摇匀，静置，取上清液用0.22um微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。取2种溶液各10μL，用外标法以主峰面积定量。结果表明，高效液相色谱法测定结果较为准确、可靠，专属性强，可作为本品的含测方法，见表2。

表2 含量测定结果(mg/g，n=2)

2.10 苦参碱含量限度确定

10批样品中苦参碱含量最低的为101202批，含量是2.145mg/g，含量最高的为 100902批，含量是 3.009mg/g，而本品规格为每粒1.2g，即 1.7mg×1.2＝2.04mg/粒，故拟定宫颈炎康栓每粒含苦参碱（C15H24N2O）不得少于 2.0mg。

3 讨论

现代研究发现，苦参的主要成分包括生物碱和黄酮类化合物等，现代药理学研究发现苦参碱类生物碱具有镇痛，强心、抗心律失常，抗病毒，抗炎等作用。本文采用 Diamonsil C18②（5μm，4.6 mm×250mm）色谱柱，乙腈-水相（0.1%磷酸+0.4%三乙胺，pH7.0）（30：70） 为流动相，流速为 1.0ml·min-1，检测波长为 220nm。显示苦参碱在0.0620－0.620mg/mL范围内线性关系良好，r＝0.99991，平均回收99.56%，RSD＝0.64%。表明该法简便、快速、专属性好，结果准确、可靠。

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1672-5654（2012）04（c）-0119-02

2012-04-11）