甘宁颗粒对慢性乙型病毒性肝炎患者血清IFN-γ影响的研究*

张随涛， 李 明

(黑龙江中医药大学第一附属医院， 黑龙江 哈尔滨 150040)

慢性乙型病毒性肝炎(Chronic hepatitis B，CHB)为世界性传染病，慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染后临床表现多样，从几乎无临床表现的轻症患者到肝硬化甚至肝细胞癌(HCC)。每年有超过100万人死于HBV感染，慢性乙型病毒性肝炎给社会及病人家庭带来了沉重的负担[1]。研究表明γ-干扰素(Interferon γ，IFN-γ)是细胞免疫重要的效应分子，人感染HBV后的临床表现、转归与机体的细胞免疫反应密切相关[2]。因此IFN-γ与慢性乙型病毒性肝炎的关系显得更加重要。本研究通过动态观察接受甘宁颗粒治疗的慢性乙型肝炎患者血清中IFN-γ含量的变化，并与反应甘宁颗粒疗效的指标：血清肝脏生化功能(ALT、AST)、血清病毒学标志(HBV DNA)作相关性分析，以探讨甘宁颗粒对CHB血清水平IFN-γ的影响及其与疗效的关系。

1 临床资料

1.1 诊断标准

1.1.1 西医诊断标准 参照2005年《病毒性肝炎防治方案》制定的慢性乙型肝炎诊断标准。

1.1.2 中医肝郁脾虚挟湿热证辨证标准 参照国家药品监督管理局2002年5月颁发的《中药新药临床研究指导原则(试行)》的标准制定。

1.2 纳入标准 符合上述中医辨证标准和西医诊断标准的慢性乙型病毒性肝炎者；年龄18～60岁。

1.3 排除标准 合并有其他病毒感染、自身免疫性肝病、酒精性肝病、药物性肝损害以及遗传代谢肝病的患者；有心、脑、肾等重要器官疾病的患者；精神病，妊娠和哺乳期患者；年龄小于18岁，大于60岁的患者；过敏体质，或对多种药物过敏者。

1.4 剔除标准 不能坚持治疗者；出现严重不良反应者；试验过程中出现严重并发症者；在试验期间合用其他可能影响试验药物者；中途自行退出试验者。

1.5 一般资料 本研究共采用60例病例，所有病例均来源于黑龙江中医药大学附属第一医院消化内科病房。采用随机数字表法将其随机分为治疗组与对照组。治疗组30例，其中男10例，女20例；年龄25～35岁8例，36～45岁12例，46～60岁10例。对照组30例，其中男12例，女18例；年龄25～35岁7例，36～45岁12例，46～60岁11例；2组患者性别、年龄、情况经统计学处理差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

2 治疗方法

2.1 治疗组 在保肝降酶治疗的基础上，予甘宁颗粒(柴胡、黄芪、焦术、垂盆草、连翘、板蓝根等组成，由黑龙江中医药大学药厂生产，每袋10 g)治疗，每次1袋，每天3次口服。8周为1个疗程，共3个疗程。

2.2 对照组 只给予保肝降酶的基础治疗，疗程同上。

2组患者在治疗期间均停用一切影响该项研究的药物，嘱其忌食生冷、油腻、辛辣、烧烤等食物，不吸烟及少饮酒。

3 观察指标与统计学方法

3.1 观察指标

3.1.1 症状、体征观察 治疗前和治疗后每周记录1次症状、体征的改变情况，并据2002年《中药新药治疗乙型病毒性肝炎临床研究指导原则》将症状由无、轻、中、重分别按0、1、2、3分进行积分。

3.1.2 血清肝脏生化功能ALT、AST及HBV DNA 治疗前及治疗结束后2周以内检查血清肝脏生化功能ALT、AST及HBV DNA，观察血清肝脏生化功能ALT、AST及HBV DNA等情况并作详细记录，观察用药前后的变化情况。

3.1.3 血清IFN-γ水平的检测 所有患者在治疗前与治疗结束后于清晨采空腹静脉血5 mL，2h内分离血清，采用双抗体夹心ELISA法检测IFN-γ，试剂盒购自法国Diaclone research 公司，全自动酶标分析仪读取450 nmA值，并根据标准曲线计算IFN-γ浓度。测定方法按试剂盒说明书严格操作。

3.2 统计学方法 采用SPSS 13.0软件分析，计量资料均采用表示，2组间比较用采用t检验，抗体滴度的比较采用秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

4 疗效标准与治疗结果

4.1 疗效标准 参照《中药新药治疗乙型病毒性肝炎的临床研究指导原则》2002版。中医证候疗效评定标准：证候疗效指数([(治疗前积分-治疗后积分)/治疗前积分]×100%。根据积分情况进行疗效对比分析：症状、体征消失或基本消失，疗效指数≥90%，为临床痊愈；症状、体征明显改善，70%≥疗效指数<90%，为显效；症状、体征均有好转，30%≥疗效指数<70%，为有效；症状、体征均无明显改善，甚或加重，疗效指数<30%，为无效。

4.2 治疗结果

4.2.1 2组证候疗效比较 见表1。

表1 2组证候疗效比较

从表1可见：治疗6个月后，治疗组总有效率为76.7%，对照组总有效率为43.3%，均显著改善了患者的临床症状。2组比较有显著性统计学差异(P<0.05)。

4.2.2 2组血清IFN-γ、ALT、AST的水平变化比较 见表2。

表2 2组患者治疗后血清IFN-γ、ALT、AST变化比较

结果表明：治疗后血清IFN-γ水平明显升高(P<0.01)，血清肝脏生化功能ALT、AST指标明显好转(P<0.01)，治疗前后2组比较有统计学意义(P<0.05)，治疗组提高血清IFN-γ水平更显著，改善血清肝脏生化功能ALT、AST较明显。

4.2.3 2组血清HBV DNA的滴度比较 甘宁颗粒治疗组血清HBV DNA的滴度下降(1.15±0.53)Log10，对照组下降(0.58±0.13)Log10，2组比较差异有统计学意义(μ=6.579，P<0.005)，说明甘宁颗粒可以明显改善慢乙肝患者的HBVDNA的活动。

5 讨论

目前认为在HBV感染中，乙肝病毒本身并不直接引起肝损伤，而是与HBV介导的免疫损伤有关，病毒的清除主要靠CTL和CTL的非特异性炎症细胞及其所释放的细胞因子[3]，在此过程中Th1/Th2细胞起着重要的作用[4]。研究发现Th1/Th2细胞比例的失调是导致HBV感染慢性化的重要原因之一。IFN-γ是Thl的特征性细胞因子，它能诱发细胞免疫反应杀伤胞内病原体(包括病毒、细菌、寄生虫等)，增强CTL和巨噬细胞的活性，增强CD8+的活性，从而有利于清除细胞内病毒，同时加重肝细胞的损伤[5]。因此如果能提高机体IFN-γ的表达，可能为慢性乙性肝炎的治疗和病毒进一步清除提供新的手段。

以上临床研究发现，治疗前患者血清中IFN-γ水平较低。导致了ThI/Th2类细胞因子功能的失衡，用甘宁颗粒治疗干预后，血清中IFN-γ水平明显增高(P<0.05)，有利于Thl/Th2细胞功能平衡的恢复。祖国医学认为慢性乙型病毒性肝炎归属于“胁痛”、“黄疽”、“鼓胀”等范畴。病因病机为正虚邪侵，肝郁脾虚，湿热蕴结。该病早期病位在肝，中期多影响脾胃，后期涉及肾，临床表现复杂多变。总病机为内因正气亏虚，外因多由感受湿热疫毒，而内外二因又相互联系，正虚是发病的基础，湿热疫毒是致病的条件，两者相得，病乃滋生。因此本院谢晶日教授针对慢性乙型病毒性肝炎病机“正气亏虚，肝郁脾虚，湿热蕴结”的特点，采用扶正祛邪，疏肝理气，清热解毒，健脾胃的治疗大纲，辨证施治创立了甘宁颗粒。在临床治疗慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虚挟湿热证中疗效显著。

本研究通过观察接受甘宁颗粒治疗的慢性乙型肝炎患者血清中IFN-γ的含量变化，并与反应甘宁颗粒疗效的指标：血清肝脏生化功能(ALT、AST)、血清病毒学标志(HBV DNA)作相关性分析发现，甘宁颗粒可以提升CHB患者血清IFN-γ水平，而且血清肝脏生化功能(ALT、AST)明显好转，血清病毒学活动减轻，为临床应用甘宁颗粒治疗CHB提供理论依据。

[1]中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[S].2005.

[2]周晖，李琴，吴长有，等.慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞特异产生γ-干扰素的研究[J].实用医学杂志，2009，25(24)：4223～4225.

[3]赖娅芳，杨岩，盛慧萍.慢性乙型肝炎患者血清中IFN-γ、IL-10、TGF-β1水平与HBV—DNA载量的关系[J].宁夏医科大学学报，2010，32(2)：211～213.

[4]Pei J，Tang Z，Zang G，et al.Blockage of Notch1 signaling modulates the T-helper(Th)1/Th2 cell balance in chronic hepatitis B patients[J].Hepatol Res，2010，40(8)：799～805.

[5]Kimura K，Kakimi K，Wieland S，et al.Interleukin-18 inhibits hepatitis Bvirus replication in the livers of transgenicmice[J].J Virol，2007，76(21)：10702.