吲哚菁绿清除试验在干细胞移植患者肝脏储备功能评估中的应用价值

黄丽雯，刘 黎，周 健

武汉科技大学附属天佑医院感染科，湖北武汉 430064

吲哚菁绿清除试验在干细胞移植患者肝脏储备功能评估中的应用价值

黄丽雯，刘 黎，周 健

武汉科技大学附属天佑医院感染科，湖北武汉 430064

目的探讨吲哚菁绿清除试验在干细胞移植患者肝脏储备功能评估中的应用价值，并观察干细胞移植对终末期肝病患者肝脏储备功能的影响。方法31例终末期肝病患者随机分为两组，对照组(14例)采用常规方法治疗，治疗组(17例)在常规治疗基础上行干细胞移植。移植后应用吲哚菁绿清除试验检测肝脏储备功能，比较两组患者移植前与移植后肝脏储备功能、肝脏合成功能及健康状况量化评分的变化。结果移植3个月后治疗组肝脏储备功能指标如ICGK和ICGR15均优于治疗前(P＜0.05)，与对照组比较，肝脏储备功能变化无差异性(P＞0.05)，两组EHBF值在治疗前后均无明显变化(P＞0.05);移植3个月后治疗组白蛋白、胆碱酯酶、凝血酶原时间等均优于治疗前(P＜0.05)，与对照组比较，白蛋白升高更为明显(P＜0.05)，两组胆碱酯酶与凝血酶原时间变化无差异性(P＞0.05);治疗组自理能力及健康状况均优于干细胞移植前(P＜0.05)，也优于对照组(P＜0.05)。结论吲哚菁绿清除试验可用于干细胞移植患者肝脏储备功能的评估，安全可靠;干细胞移植能在一定程度上改善患者肝脏储备功能、合成功能和近期预后，值得临床推广应用。

吲哚菁绿清除试验;干细胞;移植;终末期肝病

随着细胞生物工程和技术的发展，干细胞的可塑性用于细胞的替代治疗研究成为热点。多项通过干细胞移植治疗终末期肝病和难治性肝病患者的研究表明，干细胞移植后患者症状缓解，肝功能和凝血功能明显好转，治疗时间缩短，改善预后，且无严重并发症出现［1-3］，但应用吲哚菁绿(ICG)清除试验评估干细胞移植前后肝脏储备功能的变化，报道甚少。我院感染科自2009年开展干细胞移植治疗终末期肝病，观察和随访100多例患者，其中75%的患者临床症状和相关检查指标均有不同程度的改善，近期应用ICG清除试验检测ICG排泄快慢程度评估肝细胞功能及肝细胞受体的量，从而评价干细胞移植前后的肝脏储备功能，现报道如下:

1 资料与方法

1.1 一般资料 治疗组与对照组为2011年5月－2012年3月期间收治的终末期肝病患者共31例，诊断均符合病毒性肝炎防治方案诊断标准［4］;其中治疗组17例，男13例，女4例，年龄37～71岁，中位年龄47岁，14例为乙肝肝硬化，2例为酒精性肝硬化，1例为原发性胆汁性肝硬化，Child－Pugh分级为A级3例，B级10例，C级4例;对照组14例，男12例，女2例，年龄40～67岁，中位年龄49岁，12例为乙肝肝硬化，2例为酒精性肝硬化，Child－Pugh分级为A级2例，B级7例，C级5例。两组治疗前在年龄、性别、肝肾功能、肝脏储备功能等方面具有可比性(P＞0.05)。

1.2 治疗方法

1.2.1 常规治疗:两组患者均采用常规护肝、利尿、预防各类终末期肝病并发症及对症支持治疗(乙肝患者常规抗病毒)，治疗组在常规治疗的基础上行干细胞移植术(自体骨髓或脐血)。

1.2.2 术前准备:所有治疗措施在患者知情同意情况下进行，签署《干细胞移植知情同意书》。自体骨髓干细胞移植患者移植前连续2 d给予患者集落细胞刺激因子100 ug皮下注射(脐血干细胞移植患者无需注射)术前1 d行碘过敏实验，双侧腹股沟备皮，术前4 h禁食禁水，移植当日对患者进行隔离，骨髓穿刺术前5～10 h进行房间消毒。

1.2.3 干细胞采集及分离:自体骨髓干细胞移植术取患者两侧髂后上棘为穿刺点，局部麻醉消毒，在无菌条件下，以18号骨髓穿刺针穿刺，抽取骨髓200 mL，以2 500 U枸橼酸钠抗凝;脐血干细胞移植术选择无乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒以及其他传染性疾病的健康产妇，胎儿娩出并断脐后，消毒采血部位，用装一次性采血袋以封闭式采血法采血，每袋采脐血约80～120 mL，然后在本院干细胞实验室采用密度离心法进行骨髓干细胞的体外分离及纯化，得到细胞计数为6.4×109/mL～3.7×1010/mL，4℃冰箱存放，保存时间不超过3 h。

1.2.4 干细胞移植:在DSA下经股动脉穿刺插管，置管于肝固有动脉，注射造影剂，观察肝内血管情况及有无占位性病变。将待用的细胞悬液10 mL于0.5 h内经左右肝动脉缓慢注入，术毕拔管，穿刺点加压包扎后返回病房，穿刺侧下肢制动24 h。

1.3 观察方法

1.3.1 肝脏储备功能指标检测:两组在治疗前及治疗后3个月进行评估，包括ICG血浆清除率(ICGK)、ICG15 min滞留率(ICGR15)、有效肝脏血流量(EHBF)等肝脏储备功能指标。

1.3.2 肝脏合成功能指标检测:两组在治疗前及治疗后3个月进行评估，包括血白蛋白(ALB)、胆碱酯酶(CHE)、凝血酶原时间(PT)等肝脏合成功能指标。

1.3.3 健康状况量化评分:两组在治疗前及治疗后3个月，根据卡诺夫斯基健康状况量表(Karnofsky performance scale，KPS)进行评分(见表1)，评估患者治疗前后的健康状况及生活质量。

表1 卡诺夫斯基健康状况量表Tab 1 Karnofsky performance scale，KPS

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行统计，计量资料以± s表示，两组之间的差别进行 t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝脏储备功能指标变化 治疗组的ICGK和ICGR15较治疗前好转(P＜0.05)，EHBF变化不明显;对照组较治疗前无变化(P＞0.05);治疗组与对照组比较，各指标均无差异性(P＞0.05，见表2)。

2.2 肝脏合成功能指标变化 治疗组的肝脏合成功能，包括ALB、CHE和 PT较治疗前恢复(P＜0.05)，对照组较治疗前无变化(P＞0.05);治疗组与对照组比较，肝脏合成功能指标中，治疗组ALB好转优于对照组(P＜0.05)，但CHE和PT的变化，两组比较差异无统计学意义(P＞0.05，见表3)。

表2 两组患者治疗前后肝脏储备功能指标变化Tab 2 Changes of liver reserve function before and after treatment in 2 groups

表3 两组患者治疗前后肝脏合成功能指标变化Tab 3 Changes of hepatic synthetic function before and after treatment in 2 groups

2.3 健康状况量化评分

治疗组的健康状况较治疗前好转(P＜0.05)，对照组较治疗前无明显好转(P＞0.05);治疗组在治疗后健康状况的好转优于对照组(P＜0.05，见表4)。

表4 两组患者治疗前后健康状况量化评分Tab 4 Health status scores before and after treatment in 2 groups

3 讨论

干细胞是一种未分化细胞，是一类具有自我更新、多向分化和高度增殖功能的细胞，其在体内外均有极强的向肝细胞分化的能力［5-7］，通过移植具有分化增殖能力的干细胞，使其在体内分化成肝细胞，可以代偿部分肝功能。研究发现，采用不同方法建立肝损伤动物模型，对成模动物以不同途径进行不同种类的干细胞移植实验，移植后行肝脏组织学检查及检测转氨酶和白蛋白等肝功能指标，结果显示干细胞移植能够改善肝功能，修复肝脏组织结构，减轻肝脏损伤［8-10］。多项临床研究显示，干细胞移植后患者症状缓解，肝功能明显好转，且无严重并发症出现。

肝脏储备功能是指所有健康的肝实质细胞功能的总和，选择合适的方法，正确有效的评估干细胞移植前后患者肝脏储备功能的变化，对干细胞治疗的病例选择、手术前后肝脏功能监测、治疗及评估预后均有重要意义。ICG清除试验通过检测ICG排泄快慢程度评估肝细胞功能、肝细胞受体的量和肝脏有效循环血流量，从而评价肝脏的储备功能。ICG是一种深蓝色红外感光的水溶性染料，对人体无毒性，注入血管后迅速而完全的与血浆白蛋白结合，高选择性的被肝细胞迅速摄取。其特点在于ICG在肝内不与谷胱甘肽结合，直接以游离形式从胆汁排出，胆汁中的回收率可达100%，且无肝肠循环，即使在溶血时测定结果亦不受影响，并且没有肝外清除现象，故可利用排泄快慢指标ICGK值、吲哚菁绿平均滞留率指标ICGRl5值和有效循环血流量EHBF值评价肝脏的储备功能。

对17例终末期肝病患者治疗后发现，干细胞移植能在一定程度上改善患者的肝脏储备功能、合成功能和近期预后。治疗组在移植后3个月，肝脏储备功能好转，ICGK和ICGR15指标均优于治疗前(P＜0.05)，但与对照组比较，肝脏储备功能变化无差异性(P＞0.05)，两组的 EHBF值在治疗前后均无明显变化(P＞0.05);治疗组的肝脏合成功能在移植后3个月均有好转，白蛋白、胆碱酯酶，凝血酶原时间指标优于治疗前(P＜0.05)，与对照组比较，白蛋白的生长优于对照组(P＜0.05)，但胆碱酯酶与凝血酶原时间的变化两组无差异性;运用KPS评分，评估患者治疗后3个月健康状况，治疗组自理能力及健康状况优于干细胞移植前(P ＜0.05)，也优于对照组(P ＜0.05)。ICG清除试验安全易操作，无不良反应发生。

我国是各种肝病尤其是肝炎肝硬化的高发区，终末期肝病患者人数众多，干细胞移植技术风险小、价格低廉、初步疗效确切、无免疫排斥反应，为终末期肝病的治疗提供了一个新思路。由于肝细胞具有很强的再生能力，故目前临床上常用的肝功能生化检查大多不能准确地反映肝脏的损害程度和储备功能，常常代偿期肝硬化查不出，失代偿期肝硬化预测不准。本研究选择的病例中，有5例患者Child－Pugh分级为A级，其中3例患者的血清肝功能指标除白蛋白外其他项目基本正常，但ICG清除试验检测的ICGK值和ICGR15值明显异常，因此，选择常规与动态检测肝脏储备功能指标相结合的方式，更准确的观察终末期肝病患者干细胞移植前后肝细胞储备功能的变化，为干细胞治疗的病例选择，治疗及预后提供更详尽的临床资料。本研究的不足之处在于，初步将ICG清除试验应用于干细胞移植疗效的临床观察，例数较少，其与Child－Pugh分级评估肝脏储备功能的相关性研究，均需要通过分析大样本量来完善。

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The application value of indocyanine green clearance test in assessment of liver reserve function for patients with stem cell transplantation

HUANG Liwen，LIU Li，ZHOU Jian
Department of Infectious Disease，the Hospital of Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430064，China

ObjectiveTo discuss the application value of indocyanine green clearance test in assessment of hepatic reserve function for patients with stem cell transplantation，and to observe the influence of stem cell transplantation on hepatic reserve function for patients with end-stage liver disease.Methods31 patients with end-stage liver disease were randomly divided into 2 groups.Control group(14 cases)was treated with routine methods，and treatment group(17 cases)was treated with stem cell transplantation on base of routine methods.Liver reserve function of all patients was detected by indocyanine green clearance test after transplantation.The changes of liver reserve function，hepatic synthetic function and quantified score of health status in 2 groups were compared before and after transplantation.ResultsThe indicators of liver reserve function，such as ICGK and ICGR15，in treatment group three months after transplantation were better than before treatment(P ＜0.05)，compared with the control group，the changes of liver reserve function in treatment group had no difference(P ＞0.05)，the value of EHBF in 2 groups had no significant change before and after the treatment(P ＞0.05);The cholinesterase，albumin，prothrombin time indicators in treatment group 3 months after transplantation were better than before treatment(P ＜ 0.05)，compared with the control group，serum albumin increased more than those in the control group(P ＜0.05)，the changes of cholinesterase and prothrombin time in the 2 groups had no difference(P ＞0.05);The self-care ability and health status in treatment group 3 months after treatment were better than before stem cell transplantation(P ＜0.05)，but also better than the control group(P ＜0.05).ConclusionIndocyanine green clearance test can be used in assessment of hepatic reserve function for patients with stem cell transplantation，safe and reliable;Liver reserve function，synthetic function and short-term prognosis of patients with end-stage liver disease can be improved by stem cell transplantation.It should be worthy of clinical application.

Indocyanine green clearance test;Stem cells;Transplantation;End-stage liver disease

R737.9

A

1006－5709(2012)11－1047－04

2012-05-20

10.3969/j.issn.1006-5709.2012.11.017

吴阶平医学基金会肝病医学部2011－2012年度肝功能评价方法研究基金资助项目(LDWMF-PJ-2011A002)

刘黎，主任医师，教授，研究方向:感染性疾病及终末期肝病的诊治。E-mail:llgfyy@yahoo.com.cn

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