不同中医治法对豚鼠亚急性-慢性湿疹模型疗效实验研究

江雪，钱思宇，张钟，刘毅，李敏，刁庆春

（重庆市中医院，重庆 400011）

不同中医治法对豚鼠亚急性-慢性湿疹模型疗效实验研究

江雪，钱思宇，张钟，刘毅，李敏，刁庆春

（重庆市中医院，重庆 400011）

目的观察6种中医治法对豚鼠亚急性-慢性湿疹的疗效，探讨其可能的作用机制，为临床中医治疗湿疹提供可靠的理论依据。方法采用2,4-二硝基氯苯（2，4-dinitro-1-chlorobenzene，DNCB）诱导豚鼠耳廓亚急性-慢性湿疹模型，以祛风止痒-清热燥湿解毒法（A）、清热解毒法（B）、祛风止痒法（C）、清热燥湿法（D）、清热燥湿解毒法（E）、收敛解毒法（F）6种治法的中药制剂皮肤给药2次/d，连续2周，并与生理盐水（normalsaline，NS）组对照。结果与NS组比A组减轻豚鼠耳廓肿胀最为明显，C组最低；A组脾脏系数和胸腺系数与NS组相比有明显降低（P<0.05）；各组组织切片真皮炎性细胞计数，与NS组相比均降低（P<0.05），其中以E组最低，A组其次。结论祛风止痒、清热燥湿解毒法(A)能明显减轻豚鼠湿疹模型耳廓炎症肿胀、减少真皮炎细胞浸润、降低免疫器官比重系数，该治法可作为临床治疗亚急性-慢性湿疹的基本治法；其机制可能与抗迟发型变态反应、抗炎、免疫调节等作用有关。

中医治法；湿疹；外治

湿疹是由多种内、外因素引起的真气浅层及表皮炎症。临床上具有发病率高，皮疹多形性，易复发等特点。根据我科“古现代湿疹中医外治处方数据库”统计结果发现湿疹外治法主要以清热、燥湿、祛风为主[1]。根据临床实际及近年来文献报道，将3种治法相互组合总结出祛风止痒、清热燥湿解毒法（A），清热解毒法（B），祛风止痒法（C），清热燥湿法（D），清热燥湿解毒法（E），收敛解毒法（F）6种不同治法。并以我院院内制剂肤光洗液中药物为基础。观察6种不同治法对豚鼠亚急性-慢性湿疹模型的疗效，为外治法的选择提供更加可靠的依据，并探讨其可能的作用机制。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 普通级豚鼠，4~5周龄，体质量（200±25）g，共100只。由第三军医大学第三附属医院动物实验中心提供。豚鼠用劝架颗粒饲料辅以青菜喂养。饲养环境复合豚鼠饲养标准。

1.2 观察药物 生理盐水（西南药业股份有限公司太极集团，批号10081054）。

本实验所用药物洗液由重庆市第一人民医院药剂科提供。A组由野菊花、蒲公英、白鲜皮、苦参、地肤子、蛇床子等组成；B组由野菊花、蒲公英等组成；C组由地肤子、蛇床子等组成；D组由白鲜皮、苦参等组成；E组由野菊花、蒲公英、白鲜皮、苦参等组成；F组由野菊花、蒲公英、儿茶（3%浓度）等组成。制备流程：按6种治法所组处方药物比例加水浸泡30min，煎煮3次，分别加8倍量水、6倍量水、6倍量水，煎煮时间分别为2 h、1.5 h、1 h。滤过，合并滤液，浓度为0.05 g/mL。

1.3 试剂 2，4-二硝基氯苯 （2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB）：生工生物工程（上海）有限公司，批号0168B383。丙酮：成都市科龙化工试剂厂，批号20090721。实验前以丙酮分别配成5%、0.1%DNCB丙酮溶液。甲醛：重庆川东化工（有限公司化学试剂厂），批号20100201。实验前以蒸馏水稀释配成10%福尔马林液（4%甲醛溶液）。

1.4 仪器 本实验中所用仪器有：测量豚鼠耳厚度所用的外径千分尺（螺旋测微仪，0~25mm，上海九量五金工具有限公司），打耳片（8mm打孔器：购于重庆市科达实验设备成套有限公司），称量豚鼠体质量（0.1 g电子天平：ACS~1.5Be，成都市汇通实业有限责任公司），称量豚鼠耳片质量（0.001 g电子天平：BSA223S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司），称量豚鼠胸腺和脾脏（0.000 01 g电子天平：BT25S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司），观察组织切片炎性细胞浸润（光学显微镜：LEICA，DM500）

2实验方法

2.1 模型制备 领取实验动物，称重分笼饲养。致敏前1 d在豚鼠颈背部剃毛3 cm×3 cm大小。致敏当天用5%DNCB丙酮溶液25μL外涂抹剃毛区。2周后用0.1%DNCB丙酮溶液100μL外涂于豚鼠右耳廓内侧激发，1次/周，连续4周。

2.2 实验分组及给药 按体质量、性别将豚鼠分为正常组、模型组、生理盐水（normalsaline,NS）组、综合治法（祛风止痒、清热燥湿解毒法）组、清热解毒法组、祛风止痒法组、清热燥湿法组、清热燥湿解毒法组、收敛解毒法组，共9组，每组10只。造模成功24 h后，于右耳廓内侧经皮给药，2次/d，持续2周。以右耳内侧充分浸润为宜。

2.3 观察指标

2.3.1 耳厚度差 于造模前、造模后（末次激发72 h后-用药前）、用药1周后、用药2周后用螺旋测微仪分别测量豚鼠左、右耳中部厚度，计算耳厚度差：右耳厚度-左耳厚度=左右耳厚度差。

2.3.2 耳质量差 模型组于造模后（末次激发24 h后）处死，其余组于用药2周后处死，处死后缘耳廓基线剪下豚鼠左右耳廓，对齐，用8mm打孔器打下左右耳中部相同部位等面积耳片，电子天平称质量，计算耳质量差：右耳质量-左耳质量=左右耳质量差。

2.3.3 真皮炎细胞数 各组处死后，右耳片予福尔马林液固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，各组处死后，右耳片予福尔马林液固定，石蜡包埋切片，将切片移入苏木素中，浸染8～15min后移入水中，洗去苏木素和浮色，再放入分化液（1%盐酸乙醇）中，分化几秒至30 s，使切片褪色至淡兰红色。流水中洗涤30～60min，使组织呈鲜蓝色或天蓝色。放入伊红液中，浸染2～5min。洗去伊红浮液，并用纱布擦净玻片上的多余染料。在光学显微镜下观察病理组织学变化，观察5个高倍镜下真皮炎细胞浸润数，计算平均值。比较组间平均值变化。

2.3.4 脾脏、胸腺系数 各组处死后，解剖并采出脾脏、胸腺，电子天平称重，计算脾脏、胸腺系数：脏器质量/体质量×100%=脏器系数。

2.4 统计学处理

3 实验结果

3.1 湿疹模型结果

3.1.1 耳厚度差 于造模前和造模后分别测量所有豚鼠左右耳厚度，比较耳厚度差（右耳耳厚度-左耳耳厚度）。造模后耳厚度差较造模前明显增大，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 造模前后耳厚度差比较 （±s,mm）

表1 造模前后耳厚度差比较 （±s,mm）

*表示造模后与造模前耳厚度差比较P<0.05，差异有统计学意义。

组别造模前造模后耳厚度差0.133±0.072 0.020±0.014*

3.1.2 病理组织学 模型组和正常组豚鼠右耳切片内炎性细胞浸润数比较。模型组较正常组明显增多，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表1 模型组与正常组右耳片炎性细胞浸润数（±s，个/HPF）

表1 模型组与正常组右耳片炎性细胞浸润数（±s，个/HPF）

*表示模型组与正常组比较P<0.05，差异有统计学意义。

组别正常组模型组真皮炎性细胞数7.73±1.25 38.66±2.32*

3.2 用药后实验结果

3.2.1 耳厚度差改变 各组豚鼠用药前左右耳厚度差比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。组内比较：用药1周后与用药前比较，祛风止痒、清热燥湿解毒法组耳厚度差减小，差异有统计学意义（P<0.05）；用药2周后，祛风止痒、清热燥湿解毒法组、清热燥湿解毒法组、收敛解毒法组与用药前比较，耳厚度差明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），其中以祛风止痒、清热燥湿解毒法组为最低。与生理盐水组比较，祛风止痒、清热燥湿解毒法组、清热燥湿解毒组、收敛解毒组用药1周及2周后均降低，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 各组用药前后耳厚度差比较 （±s,mm）

表3 各组用药前后耳厚度差比较 （±s,mm）

*表示各组与生理盐水组比较P<0.05，差异有统计学意义；△表示各组用药前后比较P<0.05，差异有统计学意义。

组别模型组生理盐水组A B C D E F用药前0.133±0.072 0.095±0.027 0.081±0.034 0.074±0.031 0.072±0.017 0.037±0.018 0.062±0.053 0.083±0.036用药1周后-0.084±0.031 0.56±0.033△* 0.061±0.021 0.066±0.0254 0.037±0.026 0.060±0.037* 0.081±0.052*用药2周后-0.078±0.022 0.044±0.038△* 0.020±0.015 0.053±0.035 0.035±0.019 0.053±0.038△* 0.074±0.022△*

3.2.2 耳质量差改变 生理盐水组与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。祛风止痒、清热燥湿解毒法组、祛风止痒法组、清热燥湿法组与生理盐水组相比，耳质量差均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）其中以祛风止痒法组为最低。其余组较之生理盐水组无统计学差异，见表4。

表4 各组耳重量差比较 （±s,g）

表4 各组耳重量差比较 （±s,g）

*表示与生理盐水组比较P<0.05，差异有统计学意义。

组别模型组生理盐水组A B C D E F耳重量差0.003 41±0.000 54 0.001 69±0.000 35 0.000 89±0.001 13* 0.001 64±0.000 91 0.000 27±0.001 35* 0.000 53±0.000 52* 0.001 44±0.002 21 0.001 68±0.001 24

3.2.3 免疫脏器系数改变 模型组与生理盐水组相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。祛风止痒、清热燥湿解毒法组与生理盐水组相比，脾脏系数和胸腺系数均小于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。除祛风止痒、清热燥湿解毒法组外，其余各组脾脏系数和胸腺系数均小于模型组，部分小于生理盐水组，但差异无统计学意义（P>0.05），见表5。

表5 各组脾脏、胸腺系数比较 （±s,%）

表5 各组脾脏、胸腺系数比较 （±s,%）

*表示与生理盐水组比较P<0.05，差异有统计学意义。

组别模型组生理盐水组A B C D E F脾脏系数0.235 5±0.028 1 0.223 6±0.048 5 0.162 0±0.008 0* 0.177 9±0.016 8 0.201 2±0.026 7 0.204 1±0.015 6 0.177 0±0.025 7 0.171 2±0.020 2胸腺系数0.115 9±0.011 3 0.102 1±0.009 0 0.084 5±0.006 7* 0.109 2±0.012 3 0.086 0±0.006 3 0.098 0±0.011 7 0.107 0±0.014 5 0.093 3±0.008 1

3.2.4 耳廓组织病理学改变 各组用药2周后右耳组织切片内均可见不同程度炎性细胞的浸润。模型组与正常组比较，棘层明显增厚，大量炎性细胞浸润，差异有统计学意义（P<0.05）。模型组与生理盐水组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见图1。其余各组分别于生理盐水组比较，真皮炎性细胞数均有不同程度减少，差异有统计学意义（P<0.05），其中，以清热燥湿解毒法组最低，其次为祛风止痒、清热燥湿解毒法组。见表6。

表6 各组真皮炎细胞数比较 （±s,个/HPF）

表6 各组真皮炎细胞数比较 （±s,个/HPF）

*表示与生理盐水组比较P<0.05，差异有统计学意义；△表示与正常组比较P<0.05，差异有统计学意义。

组别模型组生理盐水组A B C D E F正常组真皮炎性细胞数38.66±2.23△23.69±2.88 8.90±0.53* 12.73±1.25* 12.28±1.00* 10.06±1.29* 8.63±1.54* 9.18±2.14* 7.73±1.25

4 讨论

湿疹是由多种内外因素引起的一种具有明显渗出倾向的皮肤炎症反应，皮疹多样性，慢性期则局限而有浸润和肥厚，瘙痒剧烈，易复发。本病病因复杂，是由各种内外因素相互作用引起的一种迟发型变态反应[2]。目前西医临床多以内服抗组胺药，外用糖皮质激素等对症治疗为主，但长期外用糖皮质激素不良反应明显，限制了其临床使用。中医治疗湿疹，临床应用广泛，疗效确切。由于湿疹病位在表，病灶外露，因此外治疗法在湿疹的治疗中占有独特的、重要的地位，不管是急性、亚急性、慢性湿疹均可使用外治法。

湿疹属中医“湿疮”范畴。本病由于先天禀赋不耐，饮食失节，或过食辛辣刺激荤腥动风之物，以致脾失健运，湿热内生，又兼外受风邪，内外两邪相搏，风湿热邪浸淫肌肤所致；在中医内治疗法辩证中多认为急性期以湿热为主，亚急性期以脾虚湿恋为主，慢性期则多因病久耗伤阴血，血虚风燥，肌肤失养而成；治疗时急性期以清热除湿止痒为主、亚急性期以健脾除湿止痒为主，慢性期以养血润肤、祛风止痒为主[3]。但通过我科“古现代湿疹中医外治处方数据库”，统计结果发现湿疹外治法与内治法存在明显的区别，外治法主要以清热、燥湿、祛风为主[1]。本研究结果证实在6种临床常用治法中，祛风止痒、清热燥湿解毒法比其他几种治法更能减轻豚鼠湿疹模型耳廓炎症肿胀、减少真皮炎细胞浸润、降低免疫器官比重系数。

本实验根据祛风止痒、清热燥湿解毒法所选药物主要有地肤子、苦参、野菊花、白鲜皮、蛇床子等药物。方中地肤子苦寒，归肾、膀胱经，功善清热利湿，祛风止痒。苦参苦寒，归肝、胆、胃、大肠、膀胱经，功善清热燥湿、杀虫止痒。野菊花苦辛微寒，归肝、肺、心经，功善清热解毒。白鲜皮苦寒，归肝、胆、脾、胃、肺、膀胱经，功善清热燥湿、解毒祛风。《药性论》曰：“治一切热毒风、恶风、风疮、疥癣赤烂……劳黄等。”《滇南本草》曰：“利膀胱小便积热，洗皮肤之风……夫人湿热带下用之良。”蛇床子辛苦温，归肾经，外用功善燥湿杀虫止痒。《药性本草》曰：“主大风身痒，煎汤浴之差。”全方合用共奏祛风止痒，清热燥湿解毒之效。现代药理研究证实，苦参中的氧化苦参碱可阻止肥大细胞脱颗粒释放组胺，抑制巨噬细胞吞噬功能，并对Ⅰ-Ⅳ型变态反应有明显的抑制作用，可显著抑制皮肤过敏反应、Arthus反应及迟发性变态反应[4]。其余各药水提取物均有不同程度抗炎、抗过敏作用[5]。

综上，祛风止痒、清热燥湿解毒法可作为湿疹中医外治的根本大法，湿疹各期均可应用。值得进一步推广。

［1］赵辨.中国临床皮肤病学[M].南京：江苏科学技术出版社，2009: 725.

［2］李曰庆.中医外科学[M].北京：中国中医药出版社，2002：181.

［3］娄方璐，刁庆春，刘毅，等.湿疹中医外治处方用药规律分析[J].陕西中医，2012，33（1）：97-100.

［4］滕瑞芝，解信章，张丰森.氧化苦参碱注射液治疗慢性湿疹48例疗效观察[J].山东医药，2007，47（11）:79.

［5］张廷模.临床中药学[M].北京：中国中医药出版社，2004: 184，193，302，607.

Effectof Different TraditionalChineseM edicine Treatmenton Guinea PigsM odelsof Subacute-chronic Eczema

JIANGXue,QIANSiyu,ZHANGZhong,LIUYi,LIMin,DiaoQingchun
TraditionalChineseMedicalHospitalofChongqing,Chongqing400011,China

ObjectiveTo observe the curative effects and to explore the potentialmechanism of different traditional Chinese medicine treatment on subacute-chronic eczema in guinea pigs,and to provide evidence for traditional Chinese medicine treatmentofeczema in clinicalsettings.MethodsSubacute-chronic eczemamodelswere induced by 2,4-dinitrochlorobenzene（DNCB）,and then they were divided into six groups thatwere treated with themethod of wind-expelling, itching-alleviating,heat-clearing,danpness-drying and detoxication（A）;themethodof heat-clearing anddetoxication（B）;the method of expellingwind to arrest itching（C）;themethod of clearing heatand drying danpness（D）;themethod ofheatclearing,dampness-drying and detoxication（E）;and themethod of wet-removing,wound healing and detoxication（F）respectively.The curativeeffectsof traditionalChinesemedicineon swellingof theouterear,infiltration ofdermal inflammatory cells,and parameters of spleen and thymuswere observed and assessed.ResultsIn group A,E and F,the discrepancies of ear thicknesswere significantly decreased (P<0.05)after dose administration,especially in group A.Compared to normal saline（NS）group,the discrepancies of ear weight in group A,C and D were significantly decreased(P<0.05),especally in group C.The spleen factorand thymus factor in group A was significantly decreased compared with NSgroup(P<0.05).The counting ofhypodermic inflammatory cells in tissue slices ofeach group was significantly decreased compared with NSgroup (P<0.05).Cell counting in group E was the lowest.ConclusionThe swelling of the outer ear,infiltration of dermal inflammatory cells,and parameters of spleen and thymusare significantly reduced in group A,which should be considered as the preferred treatment of subacute-chronic eczema in clinical settings.Themechanism of group A in treatment of eczema may beassociated with its inhibitive role in delayed hypersensitivity and inflammation aswellas its regulatory role in immune system.

traditionalChinesemedicine;eczema;external treatment

R758.23

A

1672－0709（2012）05-0284－04

刁庆春，E-mail：qchdiao@vip.sina.com

2012-06-04）

·临床经验·