野鸦椿果实水提物对急性酒精性肝损伤的保护作用

钟 飞, 高 辉

(吉首大学1.医学院生物化学教研室; 2.医学院药理教研室, 湖南吉首 416000)

野鸦椿(euscaphis japoneca)为省沽油科野鸦椿属落叶小乔木,湘西地区分布广泛,果实主要含异槲皮苷、矢车菊素-3-木糖-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰酚-3-葡萄糖苷及槲皮素-3-葡萄糖苷等[1].临床以其果实治疗肝炎、肝硬化取得了较好的效果.我们前期的研究也证实,野鸦椿提取物对大鼠慢性肝纤维化具有较好的保护和治疗作用.基于以上临床资料和动物实验的证据,我们推测其对酒精性肝损伤也可能具有保护作用,因此本研究采用大鼠急性酒精性肝损伤模型,研究其肝保护作用.

1 材料及方法

1.1 动物 雄性SD大鼠40只,体重220±20 g,清洁级,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,许可证号：SCXK(湘)2011-0003.

1.2 药品及试剂 野鸦椿成熟果实采集自湖南吉首地区,由吉首大学医学院吕江明老师鉴定,制成每毫升含生药1 g的水提物;谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶 (AST)、总胆红素 (TBIL)、直接胆红素 (DBIL)及甘油三酯 (TG)试剂盒均购自南京建成生物有限公司.

1.3 仪器 TG L-16G低温高速离心机,上海医用分析仪器厂;BS-300全自动生化分析仪,深圳迈瑞公司.

1.4 动物分组及处理 40只雄性SD大鼠随机分成5组,每组8只,分别是正常组、模型组、野鸦椿高(野鸦椿水提物9 ml/kg,下同)、中 (3 ml/kg)、低剂量组 (1 ml/kg),野鸦椿处理各组每天给予相应剂量的野鸦椿水提物,正常组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,连续7天.此外,除正常组外其余各组每天上午8时灌胃给予体积浓度50%酒精10 ml/kg,连续7天[2].

1.5 指标检测 各组动物末次给药后2 h 3%的戊巴比妥钠1 ml/kg麻醉,腹主动脉取血,离心取血清,检测ALT、AST、TBIL及DBIL;同时剪取肝右叶10%甲醛固定,行HE染色,检查肝组织病理变化.

2 结果

2.1 一般情况 模型组大鼠活跃程度、进食量均明显 减少,毛色暗淡,体重有所减轻;野鸦椿给药各组以 上情况均有不同程度改善,尤其高剂量组在进食量和活跃程度上与正常组差距已不太明显,只是毛色光泽 仍稍差.

2.2 肝脏生化指标及组织学检查 模型组AST、ALT、TBIL、DBIL以及TG均明显高于正常组,尤其是AST升高程度明显超过了ALT,而野鸦椿给药各组除低剂量组TBIL与模型组差异不显著之外,其余均明显低于模型组;而且以上各项指标随着给药剂量的增加降低的程度也更加明显,表现出一定的量效关系.(表1)

表1 野鸦椿对急性酒精性肝损伤大鼠肝功能的影响 (±s,n=8)

表1 野鸦椿对急性酒精性肝损伤大鼠肝功能的影响 (±s,n=8)

注：与正常组比较,＊＊P＜0.01;与模型组比较,▲P＜0.05,▲▲P＜0.01.

images/BZ_125_176_606_2205_681.png正常组 67±13 49±8 9.6±1.2 5.2±0.9 0.53±0.09模型组 672±125＊＊ 313±48＊＊ 56.7±7.9＊＊ 33.6±5.3＊＊ 0.95±0.13＊＊低剂量组 513±124▲ 252±37▲ 48.8±7.3 25.8±4.1▲ 0.81±0.12▲中剂量组 476±86▲▲ 175±25▲▲ 37.5±6.4▲▲ 18.7±3.7▲▲ 0.71±0.11▲▲高剂量组 358±75▲▲ 128±22▲▲ 22.9±5.1▲▲ 13.6±3.2▲▲ 0.65±0.12▲▲

肝组织学检查显示,正常肝细胞呈多边形,单行排列,胞质均匀红染 (图1A);而模型组肝细胞增大、明显肿胀,肝板界限不清,胞质疏松、淡染,部分肝细胞肿胀呈气球样变,并见明显脂肪变性 (图1B);低剂量组肝细胞中度肿胀,部分肝细胞质高度疏松呈空泡状,脂肪变性较模型组稍有减轻 (图1C);中剂量组部分肝细胞轻度肿胀,胞质稍疏松 (图1D);高剂量组肝细胞轻度肿胀,部分肝细胞质呈红染细颗粒状 (图1E).

图1 大鼠肝组织病理变化 (HE染色×100),说明见正文

3 讨论

长期酗酒可导致慢性酒精性肝病,而短期大量摄入则可导致急性肝损害,甚至酒精性肝炎.本研究显示野鸦椿水提物高、中、低剂量组均可明显降低急性酒精性肝损害大鼠的AST、ALT水平,发挥肝保护作用;也能够降低TBIL、DBIL,起到消除黄疸作用,对于酒精性肝损害发生时的TG升高,也能够起到抑制作用,从而改善酒精性肝损害发生时的脂代谢紊乱.病理组织学也同样显示野鸦椿各剂量组肝细胞肿胀、气球样变、脂肪变性等均较模型组为轻.生化指标的改善和病理损害的减轻都说明,野鸦椿水提物对大鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用.

野鸦椿成熟果实含有丰富的黄酮类物质,其中异槲皮苷是其主要有效成分,也是田基黄治疗肝炎的重要物质基础,异槲皮苷对四氯化碳和D-氨基半乳糖胺导致的大鼠急性肝损伤均有很好的保肝作用[3],野鸦椿果实中槲皮素-3-葡萄糖苷、山柰酚-3-葡萄糖苷体内外实验也均表明具有保肝作用[3-7];此外,矢车菊素-3-木糖-葡萄糖苷能够促进肝脏X受体α和β、过氧化物酶体增殖剂激活受体等多种与脂代谢有关的核转录因子的表达[8],可能是其改善酒精性肝损害时脂代谢紊乱的重要机制.异槲皮苷、矢车菊素-3-木糖-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰酚-3-葡萄糖苷及槲皮素-3-葡萄糖苷等黄酮成分均有很强抗氧化作用[9,10],能够有效清除酒精代谢过程中产生的大量活性氧,保护肝细胞;这些黄酮类物质可能也能够抑制肝损害时的肝内血管收缩,增加肝内血流、改善血流动力学紊乱,增加氧供等,改善肝组织代谢,达到保护肝细胞的作用.因此,野鸦椿的保肝作用是多种成分、多种机制共同作用的结果,对于其不同成分之间的相互影响还需深入研究.

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