COX-2、CD4及CD8在胃癌组织中的表达及其意义

周 玮 魏海云 牛佳木

目前研究发现COX-2在多种肿瘤组织及细胞中存在过度表达，与肿瘤的发生、发展过程密切相关，已成为肿瘤诊断及治疗的1个新靶点[1]。有关胃癌COX-2表达与CD4、CD8相关性研究尚未见报道。本研究检测胃腺癌、癌旁异型增生及正常胃黏膜组织中的COX-2、CD4及CD8表达及其与临床病理特征的关系，探讨COX-2促进肿瘤发生的新的分子机制。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集江西省肿瘤医院2008年1月至2008年12月间胃癌手术切除并经病理诊断证实的胃腺癌标本62例。其中男性39例，女性23例，年龄30～79岁，中位年龄54岁；高分化腺癌5例，中分化腺癌14例，低分化腺癌27例，印戒细胞癌11例，黏液腺癌5例。临床分期依据1997年国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准，Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ 39例；淋巴结转移27例，无淋巴结转移35例。所有患者术前均未接受化疗、放疗及其他治疗。同时在标本中取胃腺上皮不典型增生22例，正常胃组织20例。

1.2 方法

所有标本均经过10%甲醛固定，石蜡包埋，制成4 μm厚的切片，采用免疫组化SP法进行COX-2、CD4及CD8染色。兔抗人COX-2多克隆抗体、MAB-0021鼠抗人CD8单克隆抗体、Rev 021602 鼠抗人CD4单克隆抗体，封闭用正常山羊血清工作液、生物素标记二抗工作液、过氧化物酶标记链霉素卵白素工作液。抗体均为美国Santa Cruz公司产品，购自北京中杉京桥生物技术有限公司。免疫组化染色按SP试剂盒操作说明进行，工作液浓度均为1∶150。

1.3 结果判定

COX-2、CD4、CD8均以细胞质出现棕黄色细胞颗粒为阳性细胞。按阳性细胞比例，组织蛋白表达强度分级：0个细胞着色为(-)；阳性细胞数<25%为(+)；阳性细胞数25%～50%为(++)；阳性细胞数>50%为(+++)。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 胃不同病变组织COX-2 、CD4、CD8蛋白的表达

腺癌组织与腺上皮异型增生组织的COX-2表达高于正常胃上皮组织，差异有统计学意义(P<0.05)。胃腺上皮异型增生组织中COX-2表达随分化程度加重逐渐升高，而高分化、中分化腺癌的COX-2表达显著高于低分化腺癌(P<0.05)；腺癌组与非典型增生组间COX-2表达差异无统计学意义(P>0.05)。腺癌组织与腺上皮异性增生组织的CD4、CD8表达低于正常胃上皮组织，差异具有显著意义(P<0.05)，见表1。

表1 COX-2、CD4及CD8在不同胃组织中的阳性表达

2.2 胃癌中COX-2，CD4及CD8表达与临床病理特征的关系

有淋巴结转移者较无淋巴结转移者COX-2表达低(P<0.05)。COX-2的表达随着浸润深度的增加而逐渐降低，但组间差异无统计学意义(P>0.05)。不同临床病理特征的胃癌组织中CD4、CD8表达的差异无统计学意义，见表2。

2.3 胃癌中COX-2，CD4及CD8表达的相关性分析

在胃腺上皮、非典型增生及腺癌中COX-2表达逐渐增高，而CD4、CD8表达逐渐降低，两者之间呈负相关，其相关性有统计学意义(γ=0.73，P<0.05)。

表2 COX-2，CD4及CD8表达与胃癌临床病理特征的关系

3 讨论

环氧化酶(cyclooxgenease，COX)，是前列腺素(PGs)合成过程中的1个主要限速酶，可将花生四烯酸(AA)代谢成各种前列腺素产物，从而参与机体多种病理生理过程，如炎症、发热、凝血机制等。近年来国内外研究发现，许多癌前病变和恶性肿瘤中COX-2高表达，如胃肠上皮化生、胃癌、结肠癌、乳腺癌、食管癌和肺癌等，与正常组织相比有显著性差异。

有关胃不同病变组织中COX-2表达的临床生物学意义研究结果不一。Sung等[2]的研究结果表明胃癌中的COX-2表达与临床病理特征无关。Zaridze等[3]研究则认为COX-2高表达者组织学分化差且更具有侵袭性。此外，Akre等[4]的研究提示分化型胃癌的COX-2表达高于低分化者。COX-2高表达在不典型增生阶段即已存在，且与正常组织相比，其表达差异有统计学意义，因此，COX-2高表达可能是胃癌发生的早期标志。本研究采用免疫组化SP法对胃不同病变组织中COX-2的表达进行检测，结果显示，COX-2在胃腺癌和腺上皮不典型增生中的表达显著高于胃正常黏膜上皮，提示COX-2可能在胃腺癌发生中起作用，COX-2表达增高有可能是胃癌变的早期标志物。我们研究发现，高分化及中分化腺癌的COX-2表达显著高于低分化腺癌，淋巴结转移阴性组的COX-2表达显著高于淋巴结转移阳性组，提示在胃腺癌中，COX-2表达越低，其生物学行为越差，与Akre等的研究结果一致，这可能是由于分化差的腺癌细胞部分已去分化，导致COX-2抗议的表达降低。因此，COX-2表达增高可能是胃黏膜上皮癌变的早期事件。

机体主要通过细胞免疫机制在发挥抗肿瘤免疫效应。细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)是机体细胞免疫中重要的效应细胞，参与机体的抗瘤效应。CTL主要是CD8T淋巴细胞，其主要功能是特异性杀伤靶细胞，细胞毒T淋巴细胞TCR特异性识别肿瘤细胞表面的抗原肽-MHC-I类分子复合物，被激活后增殖分化为具有特异性杀伤活性的CTL，介导肿瘤细胞坏死或凋亡。另外，CD4T淋巴细胞有着较强的分泌细胞因子的功能，能分泌IL-2、IL-3、IFNγ、TNF-α、 GM-CSI 等，参与对机体免疫反应的调节及一些免疫病理过程，其中TNF-α等可直接杀伤靶细胞；而其他一些细胞因子可通过促进CD4T细胞增殖、分化和激活而间接地影响其靶细胞的杀伤[5～7]。我们的研究发现胃腺癌组织与腺上皮异型增生组织的CD4、CD8表达低于正常胃上皮组织，差异具有显著意义(P<0.05)。在胃癌中COX-2，CD4及CD8表达的相关性分析证实在胃腺上皮、非典型增生及腺癌中COX-2表达逐渐增高，而CD4、CD8表达逐渐降低，两者之间呈负相关，其相关性有统计学意义。通过以上研究结果，在胃黏膜上皮癌变过程中，COX-2表达逐渐增高，而CD4、CD8表达逐渐降低，两者表达呈负相关，可以认为COX-2是通过抑制CD4T、CD8T细胞的细胞毒反应来抑制机体的免疫反应。亦可以认为抑制机体的免疫反应是COX-2促进肿瘤发生的又一分子机制。

综上所述，COX-2高表达可能是胃癌变过程中的早期事件。COX-2与CD4及CD8的表达呈负相关，COX-2抑制机体CD4及CD8表达的具体机制有待于进一步研究。

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