自制糖化血红蛋白质控品及其性能评价

袁学进，李全双，邓演超（.江苏省海安县中医院检验科 6600；.江苏省徐州市医学科学研究所 006）

目前临床上测定糖化血红蛋白（Hb Alc）的方法有很多，其中乳胶增强免疫比浊法可以在全自动生化分析仪上简便、快速操作，准确性和精密度良好，受干扰因素少，与参考方法高效液相色谱法（HPLC）进行结果比对的相关性良好，能满足临床应用，该法已被很多医院检验科使用［1-5］。但是由于不同生产厂家试剂质量不一，且开瓶后试剂的稳定性不一，因此可靠的检验结果必须有严格的室内质量控制作为基础［6］。然而目前国内并未有统一的质控品生产销售，而进口的质控品价格昂贵，不利于临床工作的开展［7］。为了保证检验质量，降低运行成本，本实验室自制溶血液作为Hb Alc室内质控品，对其性能进行评价。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器 试剂盒和定标液均购自浙江东瓯诊断产品有限公司，生产批号201008004。HbA1c质控品购自Roche公司。仪器为HITACHI－7180全自动生化分析仪。

1.2 检测方法 肝素抗凝标本1 000 r／min离心，吸取红细胞层10μL与溶血液1 000μL按1∶100比例制备待测溶血液。检测原理是用抗原抗体反应直接测定Hb Alc的百分含量。按照试剂盒说明书操作，多点定标曲线，由SPLINE处理，以测定管ΔA的变化值求得Hb Alc含量。

1.3 方法

1.3.1 低值、高值两个水平溶血液的制备［8］

1.3.1.1 低值溶血液的制备 选 HbA1c在5.0%～6.0%的1份糖尿病患者肝素抗凝全血2 mL，无细菌污染，乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒阴性，无溶血、黄疸、脂浊，按试剂操作说明书比例制备测定用溶血液50 mL，充分溶解后，用一次性0.5 mL带盖塑料离心管分装，每支约0.30 mL溶血液，标注批号为当天日期20110103，置－20℃存贮备用。

1.3.1.2 高值溶血液的制备 参照1.3.1.1制备方法，选HbA1c在9.0～10.0的1份糖尿病患者肝素抗凝血2 mL。

1.3.2 溶血液的使用方法 取出低值和高值两个水平溶血液各1支放置37℃水浴中，溶解后轻轻摇动，然后和当天标本一起检测，用后丢弃。

1.3.3 性能评价方法 测试均是在仪器维护保养后，质控品质控良好情况下测定HbA1c。

1.3.3.1 不精密度测定 批内不精密度测定：在1 d内，对两个水平的溶血液连续测定20次，分别计算平均值（）、标准差（s）、变异系数（CV）。批内天间不精密度测定：对两水平的溶血液每天各测定1次，连续测定20 d，分别计算、s、CV。

1.3.3.2 稳定性试验 每个工作日测定溶血液1次，连续测定3个月，分别统计每个月的、s。

1.3.3.3 瓶间差异处理 随机各取两水平溶血液10支，每支检测3次，分别计算、s、CV。

1.4 统计学分析 采用SPSS 13.0统计软件包进行分析。多组比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

溶血液低值为5.73%±0.10%，高值为9.45%±0.15%，低、高值两个标本批内不精密度分别是1.75%、1.59%，均小于2.5%。溶血液天间低值为 5.75%±0.25%，高值为9.47%±0.40%，天间批内不精密度分别是4.35%、4.22%，均小于5%，符合检验要求。－20℃保存稳定期可以达到3个月，每个月之间差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。溶血液瓶间低值为5.70%±0.09%，高值为9.47%±0.14%，瓶间变异系数较小，分别为1.58%和1.48%，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 溶血液保存3个月的稳定性分析（，%）

表1 溶血液保存3个月的稳定性分析（，%）

保存时间 低值 高值第1个月5.68±0.23 9.48±0.38第2个月 5.72±0.26 9.47±0.41第3个月5.70±0.24 9.51±0.39

3 讨 论

Hb Alc是国际公认的糖尿病监控“金标准”，能反映糖尿病患者2～3个月内糖代谢状况，不受饮食、抽血时间、胰岛素使用等因素影响。目前，我国糖尿病的发病率逐年升高，HbA1c的检测质量在糖尿病的诊治中起着举足轻重的作用，而我国Hb Alc检测工作还处于起步阶段［9］。有资料显示，同一方法实验室间的变异系数在10%甚至20%以上，距离国际上5%的标准还有很大的差距，使得Hb Alc作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效检测及预防慢性并发症的绝对指标大打折扣［10］。2007年上海地区第1次调查结果显示临床实验室HbA1c的检测，情况令人担忧［11］。HbA1c的检测质量对于糖尿病的管理有重要影响，故HbA1c的实验室室内质量控制显得尤为重要，而好的室内质控需要质优价廉的质控品。好的Hb Alc质控品应满足：（1）消除质控品的基质效应问题选择近似人血基质的样本；（2）至少有正常和异常2个水平的浓度；（3）为消除瓶间差，尽量选择液体质控品，也方便操作者使用；（4）质控品的稳定期要较长；（5）无传染性［9］。

实验室应用胶乳增强免疫比浊法测定Hb Alc时，须将标本红细胞做预处理，即加溶血剂使红细胞彻底溶解，制成要求比例的溶血液，再上机检测。本文探讨用临床标本自制溶血液作为该法的室内质控品；评价低值和高值两个水平溶血液的不精密度、稳定性及瓶间差异。低、高值两个水批内不精密度分别是1.75%、1.59%，均小于2.5%，天间批内不精密度分别是4.35%、4.22%，均小于5%，符合检验要求［12］。－20 ℃保存稳定期可以达到3个月（P＞0.05）。同时本研究结果还显示，瓶间变异系数较小，差异无统计学意义。自制两个水平值的溶血液作为Hb Alc的室内质控品是可行的，能够满足实验室的室内质控要求。另外，自制溶血液也可以应用于使用该检测方法的实验室室间现场质量监测。

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［5］王瑶，谭炜.分析前标本不同处理方式对糖化血红蛋白检测结果的影响［J］.检验医学与临床，2010，7（20）：2216－2218.

［6］居漪.糖化血红蛋白检测技术和质量控制［J］.检验医学，2010，25（11）：914－917.

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［8］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京：东南大学出版社，2006：82－87.

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［10］王冬环，张传宝，陈文祥，等.应重视糖化血红蛋白测定技术及量值溯源［J］.中华检验医学杂志，2008，31（9）：965－968.

［11］居漪.糖化血红蛋白检测技术和质量控制［J］.检验医学，2010，25（11）：914－917.

［12］冯仁丰.临床检验质量管理技术基础［M］.2版.上海：上海科学技术文献出版社，2007：85－111.