益气方对化疗所致小鼠免疫功能影响的实验研究

苏 颖，郭 焱，刘 智，朱 娜，李春子，顾红缨

（长春中医药大学基础医学院，吉林长春130117）

肿瘤患者术后放化疗造成的毒副作用严重影响术后治疗与康复，特别是对机体免疫机能产生严重影响，因此，采取有效措施防治放化疗的毒副反应，越来越引起关注。中药能够提高放化疗患者机体免疫力，其研究已受到医学界的重视。本研究基于当今临床发病实际，采用来自临床的调节放化疗所致免疫功能低下的验方益气方，通过对小鼠细胞因子IL-2水平检测和小鼠血清免疫球蛋白指标观察益气方对经环磷酰胺抑制的免疫功能低下小鼠所具有的免疫重建作用，证明中药制剂增强机体免疫功能的正向调节作用，并进一步筛选益气方最佳剂量［2］。

1 材料与方法

1.1 实验材料 实验动物取CAR小鼠，体质量18～22g，SPF级，雌雄各半。由长春中医药大学基础实验中心提供。益气方根据药典配方调配，按汤剂常规煎药、过滤。各饮片由长春中医药大学附属医院提供。环磷酰胺（cyclophosphamide，CY）：每支200mg，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号04090321。IL-2与IgG试剂盒：美国BD公司产品。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 取CAR小鼠50只，随机分为模型组，空白对照组，益气方高、中、低剂量治疗组，每组10只，雌雄各半。动物室室温19～21℃，相对湿度40％～60％，每日光照12h，实验期间动物可自由进食饮水，实验环境条件符合GB1495-94国家标准。

1.2.2 模型建立 给药第8天开始对模型组，益气方高、中、低剂量治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体质量，连续3d［3］。

1.2.3 分组给药 给药组小鼠按剂量分别灌胃给药，各组给药剂量均按小鼠临床等效量计算所得。空白对照组与模型组小鼠同时灌服等容量生理盐水，连续15d，给药体积为30mL/kg体质量，每日给药1次。从第8天起模型组与给药组小鼠腹腔注射环磷酰胺80mg/kg体质量，连续3d，正常组小鼠同时注射等体积生理盐水。

1.2.4 小鼠外周血IL-2、IgG水平测定 用ELISA法检测小鼠外周血IL-2、IgG水平，小鼠眼球取血0.6mL，3 000r/min，离心30min分离血清，放置-20℃冰箱保存［4］。

1.2.5 统计学分析 实验数据用SPSS软件进行方差分析两两比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 益气方对细胞因子IL-2的影响 见图1。

2.2 益气方对小鼠血清免疫球蛋白（IgG）的影响 见图2。

图1 益气方对化疗小鼠细胞因子IL-2水平的影响

图2 益气方对化疗小鼠血清免疫球蛋白（IgG）水平的影响

3 讨论

CY是临床治疗肿瘤的最常用药物之一，人和动物具有较高相似的毒性反应，对药物反应具有一致性，并且重复性较好，故本实验采用CY化疗制备引起免疫力下降的模型［5］。CY具有细胞毒性，能抑制细胞分裂，致骨髓造血功能损坏，引发多系血细胞数量减少。

本实验选用环磷酰胺造小鼠实验模型，注射环磷酰胺后，小鼠的细胞因子IL-2、IgG的水平指标均显著低于正常小鼠，表明其处于免疫抑制状态。注射环磷酰胺并灌服益气方的小鼠外周血象较模型组小鼠有明显提高，说明灌服中药益气方能恢复或改善机体免疫功能。尤以给予益气方中剂量治疗后，上述各项指标显著增高，且达到正常对照水平。IgG在机体免疫中起主要保护作用，IL-2有多种免疫增强效应，在众多的细胞因子网络中起重要作用。本实验结果提示益气方可以抵消环磷酞胺引起的机体免疫损伤，对机体低下的细胞免疫具有一定的恢复作用［6］。

益气方汤剂的主要成分为黄芪、当归、阿胶、川芎、芍药，具有补气固表、补血活血作用。方中黄芪含有多种生物活性成分，其中含量最多的为黄芪多糖（APS），其对机体特异性和非特异性免疫有广泛的影响，能明显增加正常小鼠的脾脏重量，能显著对抗CY使动物脾脏重量下降的作用，增加小鼠脾脏重量、脾细胞数及抗体生成量［7］；当归及其提取物阿魏酸钠和当归多糖对单核巨噬细胞系统有明显的刺激作用，对免疫功能低下的机体也有免疫调节和恢复作用。研究表明，由当归提取物制成的当归注射液，每毫升相当于含原生药0.05g，化学成分主要为丁苯酞，能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能，并能拮抗环磷酰胺对巨噬细胞的抑制作用；阿胶可明显提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，能增强小鼠自然杀伤细胞活性，并能促进健康人淋巴细胞转化，通过补血，提高体弱人群的免疫力，迅速补充疾病过程中消耗气血阴液，保证一定免疫力，避免其他疾病的再次发生，是易伤阴液的流行疾病中后期不可缺少的治疗药物。总之，本实验研究结果表明，益气方剂［8］对环磷酞胺所致的免疫损伤小鼠的免疫功能具有一定的恢复或增强作用。提示益气加减方可作为各种免疫功能低下疾病或肿瘤放疗、化疗患者的辅助治疗药物，对该药的临床应用有一定的参考价值。其中，中剂量治疗组效果最为显著，高剂量治疗组次之，低剂量治疗组效果不明显。其有关机制需进一步研究阐明。

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［6］石景森，刘刚，于跃利，等.原发性胆囊癌患者手术前后NK细胞活性及T细胞亚群的改变［J］.中国现代医学杂志，1999，9（4）：1-2.

［7］张均田.现代药理实验方法［M］.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998：743.

［8］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：750-751.