暹罗斗鱼胚胎发育的观察

张 希，黄 海，杨 宁

（三亚市南繁科学技术研究院，海南 三亚 572000）

暹罗斗鱼（Betta splendens Regan），又称泰国斗鱼、五彩搏鱼、彩雀等，隶属鲈形目（Perciformes）、攀鲈亚目（Anabantoidei）、斗鱼科（Belontiidae）[1]。其原产地在泰国、马来西亚等国家。经过人工选育后，暹罗斗鱼的品种丰富、颜色漂亮，是达可参赛级别的观赏鱼鱼种之一，极具市场前景。国内外对于暹罗斗鱼的研究较多，欧美学者对于暹罗斗鱼的行为学进行了详细和深入的研究，原产地国家研究并掌握了暹罗斗鱼的人工繁殖技术[1-2]。我国关于叉尾斗鱼的胚胎和幼鱼发育的研究已有报道[2]。目前，未见有关暹罗斗鱼胚胎发育方面的研究报道。笔者进行了暹罗斗鱼的人工增养殖试验，观察胚胎发育各阶段的特征，以期为国内进行暹罗斗鱼人工增养殖提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验在三亚市南繁科学技术研究院热带海洋生物技术实验室进行。试验亲鱼为海南省三亚市福联养殖公司在吉阳镇人工繁殖的5月龄马尾斗鱼。亲鱼配对（雌鱼全长7 cm，雄鱼全长4 cm）后在水族箱中自行产卵[2]，受精卵取自泡沫巢中，在水族箱中孵化，水深15 cm。产卵时间为2011年4月9日，孵化期间最低水温25.2℃，最高水温27.0℃。

1.2 试验设备

显微镜 Nikon eclifse 50i，相机 Canon A720，体视显微镜specturum technologies Inc，捕捞工具。

1.3 试验方法

暹罗斗鱼产卵之前，先将雄鱼放入准备好的繁殖缸，再把雌鱼装入塑料杯，一并放入繁殖缸内，雄鱼泡巢筑好后，将雌鱼放出[3]。雌雄鱼发生繁殖行为，即时观察到受精卵的时间记录为产卵时间，实时测量水温，在胚胎发育早期的受精卵至卵裂期10min在显微镜下观察记录1次，囊胚期至原肠胚期30min在显微镜下观察记录1次，每次记录10枚胚胎，胚体期至孵化期每1h观察记录1次，每次记录20枚胚胎[4-5]。胚胎发育各时期时间点的确认以镜检约50%的胚胎出现相应分期特征为标准，各发育时期的划分参考莫根永等[6]。观察胚胎发育过程中进行显微摄影并描绘其形态特征。

2 结果与分析

2.1 产卵行为观察

2011年4月8日下午将土耳其绿色的雄鱼放入水族箱中（T=25.5℃），将雌鱼放入，发情的雌鱼见到雄鱼会出现竖状的深色“婚姻纹”，雄鱼则开始建筑泡巢；4月9日8∶10泡巢建好，将烧杯中的雌鱼放出，雄鱼便开始向雌鱼展示鳍只，之后追咬雌鱼，雌鱼主动游到泡巢下摆动身体，雄鱼此时围绕雌鱼游动，9∶47在泡巢下用身体呈“U”型缠绕住雌鱼的身体，生殖孔相对，同时排放出卵子和精子，之后受精卵下沉。排卵结束，雄鱼将下沉的卵衔入泡巢，而雌鱼仍呈现出暂时性昏迷状态。当亲鱼把卵安置好后，9∶50进行第二次交配产卵，经19次交配产卵后繁殖结束，平均每次10～15粒受精卵，共252粒，受精率85.6%。

2.2 胚胎发育的特征和时间的划分

2.2.1 受精卵的形态特征 受精卵呈不透明的乳白色，圆形光滑，外被透明卵膜，卵膜吸水膨胀后直径为1.000～1.202mm，平均卵径1.116mm；卵黄直径0.762～0.8915mm；受精卵为沉性卵（见图1-1）。在水温25.3℃下，28min后受精卵的细胞质向动物极集中，隆起形成胚盘，此阶段为胚盘形成期。

图1 暹罗斗鱼的胚胎发育

2.2.2 卵裂期 暹罗斗鱼受精后1 h 2min开始第一次卵裂，将胚盘分割成均等的两个细胞，第二次卵裂后细胞数目为4（见图1-2、图1-3）；受精后1 h 38min，出现第三次卵裂，产生的8细胞两排分布；胚盘细胞经过数次分裂后，约在受精2 h 43min，进入多细胞期，细胞数目成倍递增，卵裂细胞的排列变得不规则，且细胞大小不一（见图1-5）。受精后约4 h 13min，由于胚盘细胞的持续分裂，细胞数量不断增多，体积进一步变小，似桑葚球状，此时进入桑椹期（见图1-6）。

2.2.3 囊胚期 胚盘细胞继续分裂，细胞数目不断增加，细胞不断堆积，胚盘与卵黄之间形成囊胚腔，受精后5 h 15min，隆起的囊胚在卵黄上呈高帽状，此时进入高囊胚期，又称初期囊胚（见图1-7）；之后囊胚高度逐渐变低，细胞进一步增加、变小，进入囊胚中期；受精后6 h 53min。囊胚变得更加扁平，此时进入低囊胚期，又称囊胚晚期（见图1-8）。

2.2.4 原肠期 囊胚边缘细胞开始增多，并沿卵黄外围向植物极方向移动，即胚盘细胞延伸和下包，胚胎进入原肠期。原肠期分为原肠早期、原肠中期、原肠晚期。受精后8 h 45min，胚层细胞缓慢下包约1/2，即进入原肠早期（见图1-9）；受精后10 h 14min，胚层下包卵黄囊约2/3，进入原肠中期（见图1-10）；受精后12 h 24min，胚盾开始显现，胚层下包卵黄囊约3/4，进入原肠晚期（见图1-11）。

2.2.5 神经胚期 水温26.4℃，受精后17 h 34min，胚层下包4/5，收缩成胚孔，胚体背部增厚并形成一条神经索，标志着进入神经胚期，此时脑的原基初现（见图1-12）；受精后17 h 34min，胚层全部包围卵黄囊，称之为胚孔封闭期（见图1-13）。

2.2.6 器官形成期 此时胚体的主要器官开始逐渐显现，在25.8℃，受精后21 h 43min，胚胎头部明显增大，两侧出现一对较大的视泡，即视泡形成期（见图1-14），此时可以分辨头尾；在受精后23 h 43min，胚胎拥有5～6对肌节，尾末端伸长并游离于卵黄囊，即进入尾芽期（见图1-15）；受精后27 h 19min，进入晶体形成期，此时的视泡膨大，视泡中央的晶体轮廓清晰，胚体肌节8～10对（见图1-16）；胚体继续发育，头部变大，尾芽伸长，晶状体更加清晰，体节增多，受精后30 h 54min，胚体出现间接性扭动，此时为肌肉效应期（见图1-17）。

2.2.7 心跳期 胚体尾芽继续伸长，心脏开始轻微跳动，受精后34 h 37min，心脏节律性跳动且跳动加快，可见血液循环流动，即心跳期（见图1-18）。

2.2.8 孵化期 随着胚体的发育，受精后36 h 54min，心跳加快，胚体扭动剧烈，不断强烈的摆尾，由于尾不断拍击卵膜，使得卵膜变形且变薄，继而鱼苗由头至尾逐渐脱离卵膜，刚孵出的仔鱼全身透明，带椭圆形卵黄囊，卵黄囊上的星状色素清晰可见（见图 1-19、1-20）。

表1是暹罗斗鱼胚胎发育的分期及各时期的主要形态特征。

表1 暹罗斗鱼胚胎发育分期

3 讨论

暹罗斗鱼的胚胎发育经过了卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、器官形成期、心跳期和孵化期共7个阶段，与其他鱼类胚胎发育的特点是一致的，且符合硬骨鱼类胚胎发育的一般规律[7-9]。相较于同科的叉尾斗鱼和圆尾斗鱼，受精卵的特性和大小存在差异，暹罗斗鱼的受精卵呈不透明的乳白色，沉性卵，明显区别于叉尾斗鱼和圆尾斗鱼的透明浮性受精卵。暹罗斗鱼的卵径为1.000～1.202mm，叉尾斗鱼的卵径为 0.611 2～0.688 0mm[10]，圆尾斗鱼为1.142～1.237mm[11]，对比三组数据不难发现，叉尾斗鱼的受精卵卵径略小于暹罗斗鱼和圆尾斗鱼。胚胎发育过程中，眼囊期的圆尾斗鱼在胚体的卵黄囊上出现了色素，距受精时间为22 h 15min，而同科的叉尾斗鱼在出膜后12 h小时才出现色素[10]，本研究结果中，暹罗斗鱼在受精后21 h 43min见星状色素体。从胚胎发育的整个过程看，亲缘关系较近的这三种斗鱼的发育过程存在极大的相似性，且形态变化基本相同。

一般而言，同种鱼类的受精卵在不同温度条件下，胚胎发育所需的时间存在一定的差异，通常温度越高孵化时间越短[12-15]。本研究中暹罗斗鱼的受精卵在25.2℃～27.0℃的水温条件下，受精卵发育至出膜历时36 h 54min，此时，已有超过50%的仔鱼出膜[16]，其孵化时间与斗鱼属的其他种类比较接近，如周洁等[11]报道，同属的圆尾斗鱼（Macropodus chinennsis），在水温 21.5℃～23.5℃的条件下，从受精卵到孵化出膜需要42 h 30min；郑文彪[10]研究叉尾斗鱼（Macropodus opcrcularis）的胚胎发育时，发现在水温24.5-25.5℃的条件下，从受精到孵化历经38 h，可见孵化温度和胚胎发育所需要的时间可能存在一定的联系，但还需进一步研究和验证。

目前，暹罗斗鱼的人工繁殖基本解决，但是产卵量和孵化率的高低受亲鱼和人工繁殖条件的影响较大[17-18]，故还需深入的研究，加强亲鱼的鱼种培育，改善育苗的人工环境，提高受精卵的质量和稳定性，扩大暹罗斗鱼的苗种规模，推进暹罗斗鱼在中国的发展。

[1]林旭吟，黄立华.暹罗斗鱼的养殖技术[J].现代农业科学，2009，16（5）：204-205.

[2]张爱良.斗鱼及其养殖[J].特种经济动植物，2003，（8）：15.

[3]陈思行，李励年.暹罗斗鱼的饲养与繁殖 [J].水产科技情报，2006，33（2）：87-89.

[4]林 彬，黄宗文，骆 剑.棕点石斑鱼胚胎发育的观察[J].海南师范大学学报，2010，23（1）：87-92.

[5]王永波，陈国华，林 彬，等.豹纹鳃棘鲈胚胎发育的初步观察[J].海洋科学，2009，33（3）：21-26.

[6]莫根永，胡庚东，周彦锋.暗纹东方鲀胚胎发育的观察[J].淡水渔业，2009，39（6）：22-27.

[7]谢增兰，胡锦矗，郭延蜀，等.叉尾斗鱼繁殖行为的观察[J].动物学杂志，2006，41（5）：7-13.

[8]张 玮.圆尾斗鱼养殖技术[J].水产养殖，2007，28（4）：22-23.

[9]刘 笃.养殖鱼类繁殖生理学[M].北京：中国农业出版社，1993.23-32.

[10]郑文彪.叉尾斗鱼的胚胎和幼鱼发育的研究 [J].动物学研究，1984，5（3）：261-268.

[11]周 洁，周 玉，郭先武.圆尾斗鱼的胚胎和仔鱼发育的研究[J].海洋湖沼通报，1995，（2）：30-36.

[12]Sundararaj B，Vasal S.Photoperiod and temperature control in the regulation of reproduction in the female catfish[J].Fish Res Board Can，1976，33：959-973.

[13]林 鼎，林浩然.鳗鲡繁殖生物学研究：鳗鲡性腺发育组织学和细胞学研究[J].水生生物学集刊，1984，8（2）：157-170.

[14]解 涵，唐作鹏，解玉浩，等.大丰水库大银鱼的繁殖生物学[J].大连水产学院学报，2001，16（2）：79-87.

[15]何文辉，张美琼，鲍宝龙.七彩神仙鱼人工繁殖主要水质条件的探讨[J].上海水产大学学报，2001，（10）：22-25.

[16]朱国平，许柳雄.印度洋中西部大眼金枪鱼繁殖生物学的初步研究[J].水产科学，2006，25（7）：364-366.

[17]丁庆秋，万成炎，易继舫，等.匙吻鲟亲鱼培育及规模化人工繁殖技术[J].水生态学杂志，2010，3（6）：133-135.

[18]凌去非，乔德亮，姚 化，等.河鲈人工繁育技术[J].科学养鱼，2002，12：11.