乳腺浸润性导管癌组织中CAS蛋白表达的临床病理意义

徐 军 胡 勇 王 健 章太平 余宏宇

乳腺浸润性导管癌组织中CAS蛋白表达的临床病理意义

徐 军1胡 勇1王 健1章太平1余宏宇2

（1中国人民解放军第一零五医院病理科，合肥230031；2第二军医大学长征医院病理科，上海200003）

目的 研究乳腺浸润性导管癌组织中细胞凋亡易感蛋白（CAS）表达的临床病理意义。方法 选取乳腺浸润性导管癌53例、普通导管增生20例、异型导管增生20例、导管原位癌10例、正常乳腺组织14例，应用免疫组化方法观察CAS蛋白的表达，并探讨CAS与乳腺癌临床病理因素的关系，分析CAS和HER2、ER、PR以及ki-67指数的关系。结果 CAS在正常乳腺、普通导管增生、异型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌中的阳性率逐渐升高，分别为14.3%、25.0%、40.0%、60%、75.5%（P＝0.000），CAS、HER2均与乳腺癌组织学分级、核分裂像、淋巴结转移有关；CAS评分与ki-67指数（r＝0.439，P＝0.003）和 HER2评分（r＝0.598，P＝0.000）正相关。结论 CAS与乳腺癌的发生、发展、增殖、淋巴结转移有关，可能作为反映乳腺癌生物学行为的肿瘤标记物，CAS蛋白的表达和HER2有一定的相关性。

乳腺肿瘤；细胞凋亡易感蛋白；免疫组织化学

细胞凋亡易感基因 （cellular apoptosis susceptibility gene，CAS）位于染色体的20q13区域，与酵母染色体分离基因 （CSE1）同源，CAS蛋白是一种核转运因子，与细胞增生和凋亡有关［1］，在很多肿瘤中表达，如恶性黑色素瘤、淋巴瘤、肝癌、卵巢癌、子宫内膜癌等［2-5］。但CAS在乳腺癌组织中的表达研究较少，本实验观察CAS蛋白在乳腺良恶性病变及乳腺癌淋巴结转移灶中的表达，探讨其临床病理意义，分析CAS和HER2、ER、PR以及乳腺癌ki-67指数的关系。

材料和方法

1.临床资料 选取2007年1月-2010年1月在本院确诊为女性乳腺浸润性导管癌的根治切除手术标本的存档蜡块53例，患者年龄为33-76岁，平均52.5岁，术前均未做化疗和放疗，普通导管增生（UDH）20例、异型导管增生（ADH）20例、导管原位癌（DCIS）10例，正常乳腺组织14例做对照观察。全部标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片。

2.免疫组织化学 兔抗人CAS单克隆抗体购自美国BIOTECH公司，即用型鼠抗人HER2、ER、PR、ki-67单克隆抗体和Elivisionplus试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。所有抗体预先采用柠檬酸高温高压抗原修复，CAS抗体工作浓度1：400。分别按试剂说明设立阳性对照、阴性对照和空白对照。

3.结果判定 CAS以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数0%为0分，＜10%为1分，10%-50%为2分，51%-80%为3分，＞80%为4分；阳性强度分为弱（1分）、中等（2分）、强（3分），两者相乘得出总分值（0-12），分值0-1为-，2-6为＋，8-12为＋＋。HER2评分参考《乳腺癌HER2检测指南（2009版）》：完全没有着色或＜10%的肿瘤细胞有细胞膜着色（0分）；＜10%的肿瘤细胞呈现微弱、不完整的细胞膜着色（1分）；＞10%的肿瘤细胞呈现弱至中度完整的细胞膜着色和＜30%的肿瘤细胞呈现强的、完整的细胞膜着色（2分），＞30%的肿瘤细胞呈现强的、完整的细胞膜着色（3分），分值0-1为-，2为＋，3为＋＋。ER、PR、ki-67以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，随机计数10个高倍镜视野（×400），每个视野计数100个细胞，共计数1000个肿瘤细胞染色阳性细胞所占百分比分别作为ER、PR、ki-67指数。

4.统计方法 所有数据均用SPSS13.0软件处理，CAS蛋白、HER2与乳腺癌临床病理特征的关系选择χ2检验，CAS、HER2表达评分和ER、PR以及ki-67指数之间的关系采用Spearman等级资料相关分析，P＜0.05为有统计学意义。

结 果

1.CAS蛋白在乳腺良恶性疾病中的表达

CAS在胞浆中呈弥漫、均质阳性（图1），CAS在正常乳腺、普通导管增生、异型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌中的阳性率逐渐升高，分别为14.3%（2例＋）、25.0%（4例＋，1例＋＋）、40%（4例＋，4例 ＋ ＋）、60%（2例 ＋，4 例 ＋ ＋）、75.5%（19例＋，21例＋＋）（χ2＝29.382，P＝0.000）；HER2阳 性 率 分 别 为 0%、10%、20%、60%、35.8%，其中正常乳腺、UDH 、ADH 和DCIS比较P＜0.01；正常乳腺、UDH 、ADH 和IDC比较P＜0.05。2.CAS、HER2蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系

图1 乳腺癌组织CAS呈强阳表达×200图2 癌细胞ki-67阳性，核棕黄色×200图3 乳腺癌中HER2胞膜阳性；×200图4、5 乳腺癌中ER、PR胞核阳性Elivision法×200Fig.1 IDC showing strong positive cytoplasma staining of CAS（×200）；Fig.2 Strong positive nuclear staining of ki-67in IDC（×200）；Fig.3 Strong positive me mbrane staining of HER2in IDC（×200）；Fig.4 and Fig.5Strong positive nuclear staining of ER，PR in IDC（×200）.

表1所示，CAS、HER2均与乳腺癌组织学分级、核分裂像、淋巴结转移有关；组织学分级以及核分裂指数越高，CAS评分越高；有淋巴结转移组CAS评分高于无淋巴结转移组。CAS的表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分期无明显关系，Spearman等级相关分析结果表明，CAS评分与ki-67指数（r＝0.439，P＝0.003）和 HER2评分（r＝0.598，P＝0.000）正相关，HER2与ER呈负相关（r＝-0.412，P＝0.002）。

表1 CAS、HER2蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系Table 1 The relationship among the expression of CAS，HER2protein and clinical paramieters in IDC

讨 论

CAS是与微管、有丝分裂纺锤丝有关的蛋白质，参与转运因子α从胞核到胞浆的再循环过程，它作用于细胞周期的G1检测点，保证同源染色体精确分离，在正常细胞中CAS的功能像个闸门，决定细胞是增生还是凋亡。CAS在睾丸、胚胎肝脏以及包含有分裂活跃细胞的组织 （如淋巴组织 ）中表达明显增强，正常状态下发生凋亡的组织（如前列腺和乳腺）也有CAS弱表达。CAS过度表达或缺失都可诱发肿瘤的形成，其功能在多种器官恶性肿瘤形成过程中是紊乱的，在肿瘤发病机制中发挥重要的作用［6，10，11］。我们观察到 CAS同核分裂像数、ki-67指数正相关，并且随着组织学分级的升高而升高，证实了CAS在细胞增生中起着重要的作用。CAS在正常乳腺、普通导管增生、异型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌中的阳性率呈逐渐升高趋势，并且随着乳腺癌组织学分级的升高、CAS的表达逐渐增强，说明CAS在乳腺导管上皮病变发生、发展、增殖过程中起着重要作用。在恶性黑色素瘤中CAS蛋白与肿瘤分期有关，主要在晚期有转移的肿瘤组织中高表达，与以往研究结果不同，CAS蛋白与乳腺浸润性导管癌的临床分期无关，可能原因是我们研究的Ⅲ到Ⅴ期的病例数目过少。CAS蛋白的表达可能是由于CAS基因的扩增，CAS基因定位于染色体的20q13，该区域在乳腺癌等恶性肿瘤中常见扩增，与肿瘤基因不稳定性高度相关［6，7］。有学者认为CAS蛋白高表达可作为检测卵巢癌中基因不稳定性的标记物［5］，在乳腺癌中，引起CAS蛋白过表达的确切原因还需深入研究。

乳腺癌的淋巴结转移情况是影响乳腺癌患者预后的主要因素，本实验观察了CAS的表达与淋巴结转移的关系，结果表明CAS与乳腺癌淋巴结转移有关。Liao CF等发现CAS可通过增加癌细胞基质金属蛋白酶2（MMP2）的分泌从而增强肿瘤的侵袭性，与肿瘤浸润、转移有关，将CAS视为预测肿瘤转移的标记物［2］。Tsao TY证实CAS的过表达可以促进结直肠癌细胞分泌CEA和cathepsin D，从而促进肿瘤转移，免疫组化证实结直肠癌转移灶中癌细胞CAS强表达［8］。Tung MC观察到癌转移灶中CAS定位于纤维间质和腺腔内，并且有转移的患者血清CAS水平高于无转移者［9］；有学者提出结直肠癌患者血清CAS蛋白水平可以作为预测肿瘤淋巴结转移的分子标记［13］，我们的研究结果与之一致，有淋巴结转移的乳腺癌CAS表达水平显著高于无淋巴结转移者，说明CAS不仅与乳腺癌的发生、发展、增殖有关，还可能成为预测乳腺癌淋巴结转移、预后的分子标记，因而可能作为反映乳腺癌生物学行为的肿瘤标记物。但探讨CAS对乳腺癌预后的意义还需积累更多的临床随访资料。

HER2扩增是乳腺癌中较为常见的基因改变，对于乳腺癌的预后评价及指导治疗有极其重要的价值，有淋巴结转移的乳腺癌HER2阳性者预后较差，已作为探讨乳腺癌预后分子指标的主要代表［12］。结果表明，正常乳腺、普通导管增生、异型导管增生、浸润性导管癌CAS和HER2阳性表达均逐渐增加，CAS和HER2表达量均和乳腺癌组织学分级、增殖指数、淋巴结转移有关；相关分析表明，CAS蛋白与HER2显著正相关，提示CAS和HER2在乳腺导管上皮病变发生、发展、增殖过程中可能有一定的协同作用。但二者相互作用的机制还需进一步研究。

［1］Liao CF，Luo SF，Shen TY，et al.CSE1L／CAS，a microtubule-associated protein，inhibits taxol（paclitaxel）-induced apoptosis but enhances cancer cell apoptosis in-duced by various chemotherapeutic drugs.BMB Rep，2008，41（3）：210-216

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［13］Stella Tsai CS，Chen HC，Tung JN，etal.Serum cellular apoptosis susceptibility protein is a potential prognostic marker for metastatic colorectal cancer.Am J Pathol，2010，176（4）：1619-1628

Expression of CAS protein and its clinical significance in the invasive ductal carcinoma of the breast

Xu Jun1，Hu Yong1，Wang Jian1，Zhang Taiping1，Yu Hongyu2（1Department of Pathology，105 Hospital of PLA，Hefei 230031；2Department of Pathology，Changzheng Hospital，Shanghai 200003，China）

Objective To investigate the expression of cellular apoptosis susceptibility（CAS）and its clinical significance in the invasive ductal carcinoma （IDC）of the breast.Methods Immunohistochemical method was used to observe the expression of CAS in 53cases of IDC，20usual ductal hyperplasia（UDH），20atypical ductal hyperplasia（ADH），10ductal carcinoma in situ （DCIS），and 14normal breast tissues.The correlations of CAS expression with HER2，ER，PR，and ki-67index were analyzed.Results The positive rates of the CAS protein in normal breast tissues，UDH，ADH，DCIS and IDC were 14.3%，25.0%，40%，60%，and 75.5%，respectively（P＜0.001）.The expressions of CAS and HER2were positively correlated with histologic grade，mitotic activity，and lymph node metastasis.The positive expression of CAS was correlated with ki-67index （r＝0.439，P＜0.01）and HER2 （r＝0.598，P＜0.001）.Conclusion High expression of CAS is closely correlated with the pathogenesis，progression and lymph node metastasis of breast carcinoma.CAS could be considered a marker of the biological behavior of breast carcinoma.Furthermore，CAS may be associated with HER2expression.

Breast tumor；Cellular apoptosis susceptibility；Immunohistochemistry

R737.9

A

10.3870／zgzzhx.2011.06.010

2011-04-15

2011-09-15

徐军，男（1975年），汉族，主治医师。