粘鱼须威灵仙棉团铁线莲对非特异性免疫的影响比较*

石强

(德州学院药品研究开发中心，山东德州 253023)

威灵仙是中医临床常用祛风湿药物，用于治疗风寒湿痹、关节不利、四肢麻木，并有治疗骨鲠病症之功效［1］。威灵仙在全国应用的品种很多，据调查有四科十多种［2］。《中华人民共和国药典》(2005年版)收载威灵仙系毛茛科铁线莲属植物威灵仙(Clematis chinensis Osbeck.)、棉团铁线莲(C．hexapetala Pall.)、东北铁线莲(C．manshurica Rupr.)的干燥根及根茎。而我国北方诸省长期以百合科植物粘鱼须(又名华东菝葜Smilax sieboldii Miq.)的干燥根及根茎作为威灵仙使用［3］。毛茛科铁线莲属植物和粘鱼须作为威灵仙入药均有本草依据［4］，但科属不同，药理作用是否一致，笔者未见报道。笔者研究证实，粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲三药具有相似的镇痛、抗炎、抑制T细胞功能，抑制小鼠细胞免疫的作用，对体液免疫无明显影响［5］。根据现代医学的观点，风湿病属于变态反应性疾病，祛风湿与影响机体的免疫功能有关。因此，笔者从影响非特异性免疫功能方面再对粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲进行比较，为粘鱼须能否作为威灵仙入药提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 药材的来源与鉴定 粘鱼须(Smilax sieboldi i Miq.)采自青岛市崂山，威灵仙(Clematis chinensis Osbeck.)采自江苏省江浦县，棉团铁线莲(C．hexapetala Pall.)购自德州市药材站。以上药材经山东省德州市药品检验所鉴定为正品，阴干备用。

1.2 药材水煎液的制备 称取粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲干燥粉末各100 g，用水煎醇沉法制得提取液，浓缩至100 mL得质量分数为100%水煎液备用。取100%粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲水煎液各50 mL，分别加入纯化水50 mL，混匀得质量分数为50%水煎液备用［6］。

1.3 药品与仪器 氢化可的松注射液(秦皇岛制药有限公司生产，批号:040615)，地塞米松磷酸钠注射液(山东瑞阳制药有限公司生产，批号:050203)。Olympus双目显微镜(日本生产)，752型紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司生产)。印度墨汁、鸡红细胞悬液(由济南市卫生防疫站提供)。

1.4 实验动物 昆明种小鼠，普通级，健康，体质量18～22 g，山东中医药大学实验动物中心提供。

1.5 实验方法

1.5.1 小鼠碳粒廓清实验 参照文献［7］。取小鼠80只，雌雄兼用，随机分成8组，每组10只。其中6组灌胃给予受试药物，阳性对照组灌胃给予氢化可的松溶液，空白对照组灌胃给予0.9%氯化钠溶液。剂量见表1，qd，连续7 d(氢化可的松组连续5 d)。末次给药后次日，每鼠尾静脉注射印度墨汁0.05 mL·(10 g)-1。注射后1 min(t1)和5 min(t5)，用吸管分别从眼眶静脉丛取血20μL，溶于0.1%碳酸钠溶液2 mL中摇匀，在680 nm波长下比色，测定吸光度(A值)，分别用A1和A5表示1和5 min所取血样的A值，计算K值。K=lg(A1/A5)/(t5-t1)，然后把小鼠脱臼致死，取肝和脾脏分别称质量，求α值。α=体质量/(肝质量+脾质量)×K。

1.5.2 对腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验 参照文献［7］。取小鼠80只，雌雄兼用，随机分成8组，每组10只。其中6组灌胃给予受试药物，阳性对照组灌胃给予地塞米松，空白对照组灌胃给予0.9%氯化钠溶液。剂量见表2，qd，连续7 d(地塞米松组连续5 d)。给药第3天，每只鼠腹腔注射0.5%淀粉0.9%氯化钠溶液(腹腔巨噬细胞诱导剂)0.5 mL。末次给药的当日每鼠腹腔注射2%鸡红细胞悬液1mL，处死小鼠，经腹膜注入0.9%氯化钠溶液2 mL，转动鼠板1 min，吸出腹腔洗液1 mL，滴于载玻片上，37℃温孵30 min，用0.9%氯化钠溶液冲去未贴壁细胞，甲醇固定，姬-瑞氏混合液染色。镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞×100%。吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞。

1.6 统计学方法 采用SPSS13.0软件统计，数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠碳粒廓清的影响 结果见表1。由表1可知，粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲大剂量组的K值和α值均低于空白对照组，均差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);3种药物的小剂量组与空白对照组比较，差异无统计学意义，但也呈现出降低K值和α值的趋势，提示3种药物有相似的降低K值和α值的作用。3种药物相应剂量组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验 结果见表2。由表2可知，粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲2个剂量组的吞噬百分率和吞噬指数均低于空白对照组，均差异有统计学意义(均P＜0.01)，提示三种药有相似的降低吞噬百分率和吞噬指数的作用。三种药相应剂量组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对小鼠单核巨噬细胞吞噬能力的影响Tab．1 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．and C．hexapetela Pall on mononuclear macrophage phagocytosis ofm ice ±s

表1 粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对小鼠单核巨噬细胞吞噬能力的影响Tab．1 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．and C．hexapetela Pall on mononuclear macrophage phagocytosis ofm ice ±s

与空白对照组比较，*1 P＜0.05，*2 P＜0.01Compared with the blank control group，*1 P ＜0.05，*2 P ＜0.01

组别 药物 剂量/(g·kg-1) 小鼠/只 K值 α值粘鱼须小剂量组 50%粘鱼须水煎液 10 10 0.068±0.020 6.703±0.912大剂量组 100%粘鱼须水煎液 20 10 0.060±0.011*1 6.621±0.705*1威灵仙小剂量组 50%威灵仙水煎液 10 10 0.062±0.026 7.426±0.716大剂量组 100%威灵仙水煎液 20 10 0.047±0.013*2 6.422±0.461*2棉团铁线莲小剂量组 50%棉团铁线莲水煎液 10 10 0.069±0.030 6.997±0.522大剂量组 100%棉团铁线莲水煎液 20 10 0.059±0.013*1 6.695±0.539*1阳性对照组 氢化可的松 0.066 10 0.031±0.006*2 5.591±0.834*2空白对照组 0.9%氯化钠溶液 …10 0.075±0.018 7.434±0.812

表2 粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响Tab．2 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．and C．hexapetela Pall on peritonealmacrophage phagocytosis ofm ice ±s

表2 粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响Tab．2 The effects of Sm ilax sieboldii M iq．，Clematis chinensis Osbeck．and C．hexapetela Pall on peritonealmacrophage phagocytosis ofm ice ±s

与空白对照组比较*1 P＜0.01Compared with the blank control group，*1 P ＜0.01

组别 药物 剂量/(g·kg-1) 小鼠/只 吞噬百分率/%吞噬指数粘鱼须小剂量组 50%粘鱼须水煎液 10 10 18.2±8.3*1 0.29±0.14*1大剂量组 100%粘鱼须水煎液 20 10 15.4±6.8*1 0.26±0.16*1威灵仙小剂量组 50%威灵仙水煎液 10 10 15.7±4.2*1 0.30±0.14*1大剂量组 100%威灵仙水煎液 20 10 14.5±2.5*1 0.25±0.09*1棉团铁线莲小剂量组 50%棉团铁线莲水煎液 10 10 22.1±8.6*1 0.33±0.13*1大剂量组 100%棉团铁线莲水煎液 20 10 15.1±3.2*1 0.25±0.13*1阳性对照组 地塞米松 0.040 10 11.4±3.3*1 0.11±0.03*1空白对照组 0.9%氯化钠溶液 …10 32.3±6.5 0.47±0.07

3 讨论

巨噬细胞是机体免疫系统中对抗原最先产生反应的细胞之一，在对抗原的摄取、处理、传递以及免疫的启动和调节控制方面都起重要作用。

把定量的印度墨汁静脉注入小鼠血液循环后，迅速被单核巨噬细胞所清除，主要被定居在肝和脾脏的巨噬细胞所吞噬。在一定范围内，颗粒的清除速率与颗粒剂量呈指数函数关系，即吞噬速度与血中颗粒浓度呈正比，而与已吞噬的颗粒量成反比。如以不同时间测得的血中颗粒浓度之对数值为纵坐标，时间为横坐标作图，则两者呈直线关系。此直线斜率即为K，因动物肝、脾重量可影响K值，故再可计算校正的α值。通过K值和α值即可反映出药物对单核巨噬细胞吞噬功能的影响。

根据本研究结果，笔者认为:粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲都能降低碳粒K值和α值，降低腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数，并且三种药相应剂量组间比较差异无统计学意义，提示三种药具有相似的降低小鼠单核巨噬细胞和腹腔巨噬细胞吞噬能力，抑制机体非特异性免疫的作用。

根据药效学研究结果，笔者认为:粘鱼须与威灵仙、棉团铁线莲有相似的镇痛、抗炎、细胞免疫和非特异性免疫抑制作用，故粘鱼须可以作为祛风湿药威灵仙使用;至于粘鱼须免疫抑制作用的有效成分为何物，以及粘鱼须与毛茛科铁线莲属植物威灵仙、棉团铁线莲的药动学和临床疗效有何差异，则有待于进一步的药理研究和临床观察。

［1］ 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编［M］.北京:人民卫生出版社，1975:614-615.

［2］ 李家实，肖培根，楼之岑.中药威灵仙的原植物和生药学研究［J］. 药学学报，1980，15(5):288-297.

［3］ 谢宗万.中药品种理论研究［M］.北京:中国中医药出版社，1991:49-59.

［4］ 谢宗万.中药材品种论述(上册)［M］.上海:上海科学技术出版社，1964:95-96.

［5］ 石强.粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对细胞免疫与体液免疫的影响比较［J］.医药导报，2011，30(2):163-166.

［6］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2006:68-69.

［7］ 李仪奎.中药药理实验方法学［M］.2版.上海:上海科学技术出版社，2006:722-724.