肉及肉制品中2，4－滴残留量的测定

何佳，吴延晖，张曼，许泓，林安清，张骏

（天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津 300458）

肉及肉制品中2，4－滴残留量的测定

何佳，吴延晖，张曼，许泓，林安清，张骏

（天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津 300458）

在酸性条件下，以二氯甲烷提取肉组织中残留的2，4－滴及其钠盐，并转移至碱液中。用有机溶剂洗涤后在将其酸化，2，4－滴再用二氯甲烷提取。去除溶剂后用甲醇溶解定容，供液相色谱-串联质谱测定。MS-MS采用电喷雾负离子化方式电离，多离子反应监测方式检测。优化了MS-MS参数和液相色谱条件，检测限可达0.005 mg/kg，回收率、精密度、线性均满足农药残留分析的规定。

液相色谱-质谱-质谱法；残留分析；2,4-滴

2，4-滴 （2,4-Dicholrophenoxyacetic acid；2,4-D；CAS No.94-75-7），又名 2，4-二氯苯氧基乙酸，因其用量少、成本低而一直是世界主要除草剂品种之一，在30 mg/L以下低浓度时可作为植物生长调节剂。各个国家都对该药作了严格的使用规定，国际农药残留量法典会议对2，4-D提出的最大残留限量：柑橘，2 mg/kg；谷类，0.2 mg/kg；小麦，0.5 mg/kg；蛋、肉、乳与乳制品，0.05 mg/kg。CAC和日本肯定列表规定2,4-D在各类商品中的最大残留限量（MRL）为0.01 mg/kg～5.0 mg/kg。对于肉类，各国MRL规定均在0.05 mg/kg～0.3 mg/kg[1]。

本研究以二氯甲烷提取组织中残留的2，4－滴及其钠盐，并转移至碱液中。用有机溶剂洗涤后在将其酸化，2，4－滴再用二氯甲烷提取。去除溶剂后用甲醇溶解定容，供液相色谱-串联质谱测定[2]，电喷雾负离子化方式（ESI-）电离，多反应监测（MRM）检测模式，对被测样品进行定性、定量分析，并且方法的准确度和灵敏度都满足残留测定的要求。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

HPLC-MS-MS联用仪：1100-API 4000（Agilent-AB 公司，美国）；氮吹仪：N-EVAPTM 112（Organomation Associates公司，美国）。实验室常规玻璃器具。

甲醇为色谱纯，二氯甲烷，乙醇，无水乙醚，硫酸-水（1+9），氢氧化钠溶液（30 g/L），氯化钠，饱和氯化钠溶液，水为超纯水，0.22 μm针筒式微孔滤膜过滤器（有机相），2,4-D标准品溶于甲醇配成浓度为1 mg/mL的储备液，再稀释成适当浓度的标准品工作溶液。

1.2 方法

1.2.1 提取和净化

称取混合均匀的试样10 g（精确到0.01 g）于500 mL具塞锥形瓶中，加15 mL无水乙醇、5 mL硫酸-水（1+9）、10 g氯化钠和100 mL二氯甲烷。加塞，振荡提取30 min。通过快速滤纸过滤，滤液收集于250 mL分液漏斗中，用约50 mL二氯甲烷分3次洗涤锥形瓶及滤渣。合并洗液于分液漏斗中，于上述分液漏斗中加25 mL氢氧化钠溶液和50 mL蒸馏水，再加入10 mL饱和氯化钠溶液（此时水相pH应大于12，否则应补加适量氢氧化钠溶液。对于极易乳化的样品可再补加约3 g氯化钠），振摇提取2 min。静置分层，弃去二氯甲烷层。以25 mL二氯甲烷洗涤水层2次，弃去二氯甲烷层。再以25 mL无水乙醚洗涤水层，静置分层，将下层水相转移至另一500 mL分液漏斗中，弃去无水乙醚层。于上述水相中，加入25 mL硫酸-水（1+9）进行酸化，摇匀[水相pH应小于2，否则应适量补加硫酸-水（1+9）]，然后分别用 50、25、25 mL 二氯甲烷提取水相。将二氯甲烷提取液收集于250 mL旋转蒸发瓶中。于50℃水浴中蒸干。用2 mL流动相溶解，经0.22 μm微孔滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱测定。

1.2.2 LC-MS/MS 条件

HPLC 条件：色谱柱为 Allure C18柱，100×2.1 mm，5 μm；流动相为甲醇-水（40+60，体积比）；流速0.2 mL/min；进样量 20 μL。

MS-MS条件：电离方式ESI－，离子源温度450℃；气帘气压力0.207 MPa；雾化气压力0.083 MPa；辅助气1压力0.276 MPa；辅助气2压力0.103 MPa；电喷雾电压-4500 V；入口电压-8 V；碰撞能量-16 V；碰撞室出口电压-10 V。多反应监测方式（MRM），监测离子对（m/z）：定性离子对（218.6/160.9，220.8/162.9），定量离子对（218.6/160.9）。

1.2.3 测定

根据上述条件，以样品空白提取液稀释的标准溶液作定量曲线，对被测样品进行测定。

2 结果

2.1 线性

在优化的色谱质谱条件下，对一系列不同浓度的标准溶液（0.01 μg/mL～1 μg/mL）进行色谱测定，以标准溶液浓度为横坐标，定量离子对的面积值为纵坐标绘制标准曲线，线性方程为y=6.66×106x+5.48×104，相关系数为0.9997。

2.2 检测限

2，4-D的测定低限是根据添加法进行实测确定的，为5 μg/kg，可满足各类进出口肉及肉制品残留限量检验的要求。以火腿罐头为例，空白及添加检测低限的谱图见图1与图2。

图1 空白火腿罐头样品中2，4-D的定量离子流图Fig.1 Diagnostic ion chromatogram of 2，4-D in blank sample of canned pork ham

2.3 回收率与精密度

本方法采用标准加入法，分别取空白的猪肉、鸡肉和猪肉罐头样品，准确加入2，4-D标准溶液，分别制备添加浓度为5、10、50 μg/kg的样品各10份，对样品进行前处理，并进行LC-MS/MS分析，计算回收率和精密度，结果得到所有农药的回收率均在60%～120%之间，精密度也均小于15%，回收率与精密度结果见表1和表2。

图2 空白火腿罐头添加检测低限2，4-D的定量离子流图Fig.2 Diagnostic ion chromatogram of 2，4-D in spiked sample of canned pork ham

表1 回收率实验(n=6)Table 1 Test of recovery(n=6)

表2 精密度实验(n=6)Table 2 Test of precision(n=6)

3 讨论与结论

3.1 前处理方法的选择及优化

前处理方法上，参考美国《农药分析手册》（PAM）和进出口行业标准SN 0195-1993[3]中的提取和净化方法，把主要提取溶剂由三氯甲烷更换为二氯甲烷。两者的提取效率接近，而二氯甲烷的毒性比三氯甲烷要低得多。

由于采用液质质方法检测，就省却了原方法的衍生化过程，改为溶解后直接进样，节省大量处理时间。

3.2 质谱条件的优化

因为2，4-D的准分子离子[M-1]-经二级碰撞后仅产生一个丰度较强的子离子（即Q3）（见图3），这就要求每个化合物分别选择两个母离子（即Q1），才能满足4个鉴别点的要求[4]。由于2,4-D分子含有2个Cl原子，利用Cl同位素的丰度比，选择了[M+2-1]-作为另一个Q1，对Q1进行二级碰撞，找到其对应的Q3（图4）。

3.3 结论

本研究建立的利用HPLC-MS-MS，ESI负离子化技术，以MRM方式检测肉及肉制品中2,4-D残留的方法，完全可以满足肉及肉制品中的残留限量要求，具有应用价值。

图3 MS2图谱(218.6/160.9)Fig.3 Mass of 218.6/160.9

图4 MS2图谱(220.8/162.9)Fig.4 Mass of 220.8/162.9

[1]各国食品中农药兽药残留限量规定[M].大连：大连海事大学出版社,2002:8-156

[2]古珑,许泓,林安清,等.液相色谱-质谱-质谱法检测坯布中残留2,4-滴和 2,4-滴丙酸[J].现代仪器，2005(4)：52-55

[3]SN0195-93出口肉及肉制品中2,4-滴残留量检验方法[S].北京：中国标准出版社，1993:1-5

[4]The European Commission.COMMISSION DECISION of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results[J].Official journal of the European Communities,2002,L221：8-36

Determination of 2，4-D Residues in Meat and Meat Products

HE Jia,WU Yan-hui,ZHANG Man,XU Hong,LIN An-qing,ZHANG Jun
（Tianjin Entry－Exit Inspection and Quarantine Bureau，Tianjin 300458，China）

The 2，4-D residues and its Na salts are extracted from the tissue with dichloromethane under acidified condition,then transferred into alkaline solution.The alkaline solution is washed with organic solvents and acidified,2，4-D is then reextracted with dichloromethane.After the dichloromethane evaporated,the residues is resolved by methanol and determined by Liquid chromatography-tandem mass spectrometry.The electrospray （ESI）negative mode detected by MRM is used for MS-MS.The optimization of analytical conditions of HPLC and analytical parameters of MS-MS are performed.The detection limit by this method is 0.005 mg/kg.The linearity,recovery rate and.precision meet the rules of the residue analysis of pesticides.

HPLC-MS-MS;residue analysis;2,4-D

何佳（1979—），女（汉），工程师，硕士，研究方向：食品残留分析。

2010-12-15