HPLC法测定清开灵泡腾片中栀子苷的含量Δ

笔雪艳，刘晓凤，张清波（.黑龙江省食品药品检验检测所，哈尔滨市5000；.黑龙江中医药大学，哈尔滨市 50040）

HPLC法测定清开灵泡腾片中栀子苷的含量Δ

笔雪艳1＊，刘晓凤2，张清波1（1.黑龙江省食品药品检验检测所，哈尔滨市150001；2.黑龙江中医药大学，哈尔滨市 150040）

目的：建立测定清开灵泡腾片中栀子苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent C18（150mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-水（11∶89），检测波长为238nm，流速为1.0mL·min-1。结果：栀子苷进样量在0.03012～0.90360µg之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.9999）；平均回收率为97.02%，RSD＝1.0%（n＝6）。结论：本方法简便、准确、分离效果好，可用于清开灵泡腾片的质量控制。

清开灵泡腾片；栀子苷；高效液相色谱法；含量测定

清开灵泡腾片是由金银花、珍珠母、板蓝根、栀子、黄芩苷等8味药组成的中药复方制剂，具有清热解毒、镇静安神的功效。原质量标准收载于《国家食品药品监督管理局国家药品标准》新药转正标准第35册[1]，目前只有黄芩苷的含量测定方法。而处方中栀子苷为栀子的有效活性成分，在清开灵系列品种中也有关于栀子苷含量测定的报道[2，3]，但由于泡腾片中加入的辅料种类比较多，样品若不经纯化直接测定，基线飘移比较明显，影响含量测定的准确性。为了更好地控制药品质量，笔者建立了处方中栀子苷的含量测定方法——高效液相色谱（HPLC）法。

1 仪器与试药

HP1100型HPLC仪、电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

清开灵泡腾片（哈高科白天鹅药业集团有限公司，批号：080306、080307、080308）；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110749-200309）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（11∶89）；检测波长：238nm；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL。理论板数按栀子苷峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

取栀子苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取重量差异项下的本品，研细，取约2.0g，精密称定，置100mL量瓶中，加热水（70～80℃）40mL，待完全泡腾后，放冷，加入甲醇40mL，摇匀，超声处理30min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25mL，蒸干，残渣加50%甲醇5mL使溶解，上于中性氧化铝柱上[4]（内径1.8cm，100～200目，5g），加50%甲醇洗脱3次，每次10mL，收集洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇溶液使溶解，并转移至10mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

取按本品处方工艺制备的不含栀子的阴性样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.5 测定法

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.栀子苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.sample；C.negative sample；1.geniposide

2.6 线性关系考察

精密吸取对照品溶液（0.03012mg·mL-1）1、2、5、10、15、20、30μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝1746.4086X－3.00061（r＝0.9999）。结果表明，栀子苷进样量在0.03012～0.90360µg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件重复进样5次，测定栀子苷峰面积。结果，RSD＝0.2%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.8 重复性试验

取同一批样品（批号：080308），按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量。结果，栀子苷的平均含量为每片0.60mg，RSD＝1.2%（n＝6），表明本法重复性良好。

2.9 稳定性试验

精密吸取同一批供试品溶液，分别于制备后0、2、4、7、15h测定。结果，RSD＝1.9%（n＝5），表明供试品溶液在15h内稳定。

2.10 加样回收率试验

取同一批已知含量（批号：080308，栀子苷含量：0.5955mg·g-1）的样品6份，精密称定，分别精密加入栀子苷对照品溶液（0.1038mg·mL-1）6mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，摇匀，滤过，取续滤液，分别注入液相色谱仪测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.11 样品含量测定

按上述色谱条件测定3批样品含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果Tab 2 Results of content determination of sample

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取栀子苷对照品溶液作紫外光谱扫描，结果可见其在237.4nm波长处有最大吸收，且在（237.4±2）nm波长范围内均为稳定吸收。故参考2005年版《中国药典》（一部）栀子药材中栀子苷的最大吸收波长，选用238nm为本品测定波长。

3.2 供试品前处理方法的选择

笔者曾在2010年版《中国药典》起草工作中承担了清开灵片、颗粒、胶囊和泡腾片的标准起草工作，在栀子苷的测定上，采用超声提取的方法直接测定，但泡腾片的样品基线的飘移比较明显，影响含量测定的准确性。试验中将样品完全泡腾后，分别采用超声提取、酸沉纯化、上Al2O3柱3种处理方法进行比较，结果上Al2O3柱纯化栀子苷色谱峰分离较好。

3.3 中性氧化铝用量及洗脱剂用量的确定

分别选择3、5、7g中性氧化铝，选择50%甲醇20、30、50mL洗脱容积进行比较，结果5g中性氧化铝30mL即可达到分离及洗脱完全。

综上，本方法简便、准确，分离效果好，可用于清开灵泡腾片的质量控制。

[1] 国家药典委员会.国家食品药品监督管理局国家药品标准新药转正标准（第35册）[S].北京：人民卫生出版社，2004：92

[2] 黄晓丹，傅 英，陈禧翎，等.HPLC法测定清开灵胶囊中栀子苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2009，16（6）：52.

[3] 赵绪元，姚金成，胡 领，等.反相高效液相色谱法测定清开灵注射液中2组分的含量[J].中国药房，2007，18（3）：202.

[4] 肖佳尚，李晓蒙，叶向阳.复方三黄消炎片中栀子苷含量测定研究[J].中国药品标准，2006，7（5）：33.

Content Determination of Geniposide in Qingkailing Effervescent Tablets by HPLC

BI Xue-yan，ZHANG Qing-bo（Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin 150001，China）
LIU Xiao-feng（Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of geniposide in Qingkailing effervescent tablets.METHODS：HPLC was adopted.The separation was performed on Agilent C18（150mm×4.6mm，5μm）column with acetonitrile-water（11∶89）as mobile phase.The detection wavelength was set at 238nm.The flow rate was 1.0mL·min-1.RESULTS：The linear range of geniposide was 0.03012-0.90360μg（r＝0.9999）with an average recovery of 97.02%（RSD＝1.0%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and well-separated for the quality control of Qingkailing effervescent tables.

Qingkailing effervescent tablets；Geniposide；HPLC；Content determination

R283.64；R927.2

A

1001-0408（2011）03-0240-02

2010-01-19

2010-03-29）