鲍鱼性腺多糖的体内抗氧化活性

2011-11-20刘娜，朱蓓薇，孙黎明，刘俊荣

大连工业大学学报 2011年3期

刘娜，朱蓓薇，孙黎明，刘俊荣

（1.大连工业大学食品学院，辽宁大连 116034；2.大连海洋大学食品工程学院，辽宁大连 116023）

0 引言

鲍鱼多糖是鲍鱼重要的生理活性物质之一。沈鸣［1］、陈倩超［2］、许东晖［3］及王兵［4-5］等研究发现，鲍鱼多糖具有增强免疫力、抗肿瘤等作用。本课题组殷红玲等［6］对鲍鱼肉中多糖的提取工艺进行了研究，李冬梅［7］、程婷婷［8-9］等研究了鲍鱼脏器多糖的提取条件，李韬等［10］从鲍鱼性腺中提取多糖并研究了其体外抗氧化活性，为鲍鱼的综合开发及深入研究奠定了理论基础。本研究以鲍鱼性腺为主要原料，采用酶促水解、乙醇醇沉等方法提取鲍鱼性腺中的多糖并研究其体内抗氧化活性，旨在为鲍鱼性腺多糖类功能产品的开发提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 原料与试剂

皱纹盘鲍性腺，由大连獐子岛渔业集团股份有限公司提供。总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、单胺氧化酶（MAO）、过氧化氢酶（CAT）试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

昆明种小白鼠，30只，雌性，18～22g；SD 大鼠42只，雌性，180～220g；购自大连医科大学实验动物中心。

1.2 试验方法

1.2.1 鲍鱼性腺多糖的提取

以新鲜鲍鱼性腺为原料，加入3倍体积的水煮沸，用6mol／L 的NaOH 调pH 值为10.0，加入2.0%的碱性蛋白酶，45 ℃酶解3h后迅速升温至90 ℃维持10 min灭酶，冷却至室温调pH为中性，离心10min（4 000r／min），取上清液即得多糖水溶液，然后加入3倍体积95%的乙醇醇沉12h，离心取沉淀。复溶后离心去杂质。上清液冷冻干燥待用，即鲍鱼性腺多糖（CAGP）。CAPG 中含糖37.1%、蛋白19.7%、硫酸根19.31%、糖醛酸14.69%。

1.2.2 CAGP对正常小鼠抗氧化能力的影响

30只昆明种小鼠随机分成3组，生理盐水对照组（NS组）、阳性对照组（VC1g／kg，用前新鲜配制）、CAGP 组（200 mg／kg）。连续灌胃给药15d。末次给药后摘眼球取血制备血清，颈椎脱臼法处死小鼠，取肝脏和脑，检测血清和肝脏MDA、肝脏T-AOC和CAT 及脑组织MAO。

1.2.3 CAGP对高脂血症大鼠抗氧化损伤能力的影响

采用自行配制的高脂饮食（猪油15%+胆固醇6%+胆盐3号2%+丙基硫氧嘧啶0.2%）给雌性SD 大鼠灌胃。每只大鼠灌胃2mL，连续灌胃20d。根据血清甘油三酯含量，取24 只雌性SD 大鼠，随机分为3 组，阳性对照组（血脂康200mg／kg）、CAGP组（200 mg／kg）及阴性对照组（生理盐水），另取同批次未饲喂高脂饮食大鼠8只作为正常对照组（生理盐水）。各组腹腔注射连续给药40d。

于第37天，除正常对照组外，其他3组大鼠均腹腔注射四氧嘧啶，200mg／kg。72h后，用乙醚麻醉，腹腔主动脉取血，检测血清MDA 与SOD 以及肝脏的T-AOC。

1.2.4 统计学方法

数据以（平均值±标准偏差）表示。采用SPSS 12.0统计学软件对各组数据进行单因素方差分析（One-way AVOVA），P＜0.05 为有统计学差异，P＜0.01表示差异极其显著。

2 结果与分析

2.1 CAGP对正常小鼠抗氧化能力的影响

2.1.1 血清及肝组织中的MDA 含量

丙二醛是氧自由基损伤组织或细胞导致脂质过氧化的代谢产物，因此丙二醛浓度越低，脂质过氧化程度越低，机体抗氧化能力就越强。由表1可以看出，多糖组和VC组血清和肝组织中的丙二醛浓度均明显低于NS组（P＜0.01）。上述结果表明，CAGP 可有效降低血清及肝组织中MDA 的形成，减少细胞膜脂质过氧化。

表1 CAGP对正常小鼠抗氧化能力的影响Tab.1 The effect of CAGP on the antioxidant capability of normal mice

2.1.2 脑组织中的MAO 活力

脑组织匀浆中单胺氧化酶数据分析如表1所示。MAO 是催化芳香族、脂肪族单胺类氧化脱氨基反应的酶，主要是调节单胺类递质的含量。随着年龄的增长，体内MAO 活性逐渐增强，继而氧自由基生成增多，促进神经系统老化［12］。如表1 所示，多糖组的MAO 活力明显低于NS 组（P＜0.01），证明CAGP 可有效降低脑组织中单胺氧化酶的活力，具有抗氧化活性。

2.1.3 肝脏T-AOC

体内具有还原能力的抗氧化物质可将Fe3+还原成Fe2+，后者与菲啉类物质形成稳定的络合物，其含量可反映出机体总抗氧化能力的高低。如表1所示，CAGP 组及Vc组的T-AOC 较NS组显著增强。

2.1.4 肝组织中CAT 活力

过氧化氢酶是一种酶类清除剂，是以铁卟啉为辅基的结合酶。它可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御体系的关键酶之一。如表1所示，多糖组中CAT 活力明显高于NS组和阳性对照组，表明CAGP可显著提高体内CAT 活力。

2.2 CAGP对高脂血症大鼠抗氧化损伤能力的影响

2.2.1 血清中SOD 活力

机体代谢过程中会产生各种自由基，过量的自由基可造成细胞和组织损伤。生物进化过程中，为消除过多自由基，机体已经产生了一套完整而精细的防护体系。首要防御体系为生物体内的各种抗氧化酶，例如SOD，其活力的高低可以表征机体抗氧化损伤能力的强弱。如表2所示，阴性对照组血清SOD 活性明显低于正常对照组（P＜0.01），说明四氧嘧啶可明显降低机体抗氧化酶的活力。CAGP 组的SOD 活性明显高于阴性及阳性对照组（P＜0.01），提示CAGP对氧化损伤具有一定的防御作用。