HPLC测定藏药五味麝香片中没食子酸的含量

冶平

（青海省九康医药保健品有限公司，青海 西宁810001）

藏药五味麝香片是由麝香、诃子（去核）、黑草乌、木香、藏菖蒲等5 味中药制成的片剂，具有消炎，止痛，祛风的功效。用于扁桃体炎、咽峡炎、流行型感冒、炭疽病、风湿性关节炎、神经痛、胃痛，牙痛。方中诃子为君药，为控制其质量，我们在参考有关文献的基础上[1-4]，采用高效液相色谱法测定五味麝香片中没食子酸的含量，该方法准确度高、重现性好、专属性强、适用面广，可为产品的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

LC-10ATVP 二元泵（岛津公司）；Rheodyne 7725 进样器（美国）；SPD-M10AVP 二极管阵列检测器（岛津公司）；Class-VP 液相色谱工作站（岛津公司）；Milli-Q 超纯水装置。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。水为重蒸水并经0.45 μm 滤膜过滤。对照品没食子酸(C7H6O5，S1)购自中国药品生物制品检定所，批号为749-200008。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为甲醇－水－磷酸 (8∶92∶0.01)，流速：1 mL/min; 检测波长为273 nm，AUFS：0.01；柱温30℃，理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于1 000，见图1。

图1 色谱分离图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取没食子酸对照品1.2 mg置10 mL 容量瓶中，甲醇定容，即得。

2.2.2 供试品溶液 取五味麝香片10 片，研细，混匀，精密称定1 g，置具塞锥形瓶中，加CH3OH 20 mL，放置在80℃水浴加热回流30 min，取出，冷却，过滤，滤液转移至25 mL 容量瓶中，残渣加甲醇洗数次，用CH3OH 定容至25 mL 量瓶中，摇匀，过0.45 μm 的微孔滤膜，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线 性 关 系 分别精密吸取对照品溶液4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 μL，依次进样。测定没食子酸峰面积积分值，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品进样量X为横坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=280 504.7X+67 752.6，r=0.999 4，表明没食子酸在0.48 ～2.4 μg 呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL 连续进样5 次，分别测定没食子酸峰面积值为2 945 096，2 936 560，2 929 019，3 016 840，3 019 795，得RSD为1.20%。

2.3.3 重现性试验 取同一批号五味麝香片，分别按“供试品溶液”项下操作，制备5 份供试液，进样测定没食子酸含量分别为2.40，2.36，2.32，2.41，2.40 mg/g，RSD为1.52%。

2.3.4 稳定性实验 精密称取五味麝香片样品，按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，在12 h 内，每隔1 h进样10 μL，测定没食子酸的峰面积积分值分别为3 409 867，3 376 158，3 367 430，3 343 466，3 306 149。RSD为1.51%，说明没食子酸在12 h 内稳定，符合样品测定条件。

2.3.5 回收率试验 采用加样回收法，即取已知含量的样品，分别加入一定量的没食子酸对照品，按样品测定方法测定没食子酸含量，计算回收率，结果见表1。2.4 样品含量测定 精密吸取对照品和供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，连续进样3 次，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱峰面积，以外标法计算样品中没食子酸含量，其结果见表2。

表1 没食子酸加样回收试验结果

表2 三批供试品中没食子酸的测定结果

3 讨论

本次实验采用HPLC 测定藏药五味麝香片中没食子酸的含量方法，该法精确、重现性好，可作为藏药五味麝香片中没食子酸质量控制的测定方法。实验中曾用甲醇－水为流动相，但分离效果不佳，杂质对没食子酸吸收峰有干扰，改用甲醇－水－磷酸(8∶92∶0.01)为流动相后，没食子酸吸收峰与杂质吸收峰可得到较好的分离，此方法适合于测定藏药五味麝香片中没食子酸的含量。

[1]茅向军,许乾丽,熊慧林,等.高效液相色谱法测定热淋清胶囊中没食子酸的含量[J].中国中药杂志，2002，27(8)：589-591.

[2]沙明, 陈吉文. 高效液相色谱法测定地榆中没食子酸的含量[J].中国中药杂志，1999，24(2)：99-100.

[3]李爱群,蔡葵花,林励.薄层扫描法测定利喉乐含片中没食子酸的含量[J].分析测试学报，1999，18(1)：64-66.

[4]卞阿凤,常越萍,金蓉鸾.石明合剂中没食子酸含量测定[J].中国中药杂志，1994，19(5)：287-288.