猪多种疫苗分点同时注射的免疫抗体检测试验



猪多种疫苗分点同时注射的免疫抗体检测试验

沈艳丽①蔡金山①赵志刚②杨继元②郭春兰①（①青海省动物疫病预防控制中心 西宁 810001 ②青海省大通县兽医站）

试验采用口蹄疫、猪瘟和高致病性蓝耳病3种疫苗分点同时注射，以探讨是否会产生相互干扰。试验分为5组，每组30头，用ELISA方法和正向间接血凝试验检测免疫抗体，结果表明，口蹄疫、猪瘟和蓝耳病分点同时注射组产生的口蹄疫抗体在14d和21d达到最高值，且抗体水平高于单苗注射组；猪瘟抗体在28d达到最大值，较单苗注射组推迟了1周，蓝耳病抗体2个组在43d内，S/P值都在零以下，2个免疫程序对蓝耳病免疫抗体的生成时间和水平无明显差异。

疫苗 免疫抗体 检测

口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病是国家规定的强制免疫疫病，青海省主要以散养畜禽为主，养殖户分散，养殖条件相对较差。农村散养户和规模养殖场畜禽目前实行春秋两季集中免疫，各地为节约时间、节约劳力、降低成本、对口蹄疫、猪瘟、猪蓝耳病3种强制免疫疫苗进行同时注射，各种疫苗之间是否存在拮抗作用，只有通过免疫效果监测，建立科学的免疫程序，才能对多种疫苗免疫进行合理程序化安排，避免不同种疫苗作用的相互干扰。为了促进防疫工作开展，减轻基层防疫人员工作强度和物资消耗，笔者进行了口蹄疫疫苗、猪瘟疫苗和蓝耳病疫苗分组分点注射的免疫干扰试验。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 选自张氏集团大通仔猪繁殖场40~60日龄未经免疫的仔猪120头作为试验猪，免疫前对动物进行基础抗体滴度测定，猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)病毒和抗体阴性，口蹄疫感染抗体阴性，免疫抗体低于1:32的选择为试验对象。

1.1.2 试验疫苗 口蹄疫O型灭活苗，生产批号0903018，系中农威特生物科技股份有限公司生产，猪瘟活疫苗(脾淋组织苗)，生产批号08079，系中牧实业股份有限公司成都精华药械厂生产，高致病性猪蓝耳病灭活苗，生产批号09014，系浙江杭州优帮生物技术有限公司生产。

1.1.3 检测试剂 O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA试剂盒，批号2009062401，猪瘟正相间接血凝诊断液及阳性血清，批号090316，均购自兰州兽医研究所，猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒(ELISA)批号09418－EE358，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司生产(IDEXX)。

1.1.4 试验场地与饲养管理 试验场地位于大通县黄家寨，附近无其他猪舍，各组单独一圈，隔离饲养，饲喂相同饲料，整个试验场地封闭管理，固定饲养人员，严格消毒，杜绝无关人员出入。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组 将120头仔猪，随机分成5组，第1组30头，注射O型口蹄疫灭活疫苗，第2组30头，注射猪瘟活疫苗，第3组30头，注射高致病性猪蓝耳病灭活苗，第4组同时分点注射O型口蹄疫、猪瘟、蓝耳病3种疫苗。

1.2.2 免疫方法 单组疫苗免疫，注射部位为左右颈部。3种疫苗和4种疫苗同时分点免疫，注射部位为左右颈部和腿部内侧。免疫剂量：口蹄疫疫苗1ml/头，猪瘟疫苗1头份/头，蓝耳病灭活苗2ml/头。

1.2.3 临床不良反应观察 所有试验猪在免疫注射后进行临床观察7~10d，主要观察猪只精神状况、采食、体温和不良反应。

1.2.4 免疫抗体检测 分别于免疫后14、21、28、43d经前腔静脉采血，分离血清，用于抗体检测。

O型口蹄疫抗体检测：采用液相阻断ELISA(LpB-ELISA)方法，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：猪血清抗体滴度≥1:64，则判定被检血清O型口蹄疫抗体合格；抗体滴度<1:64，则判定被检血清O型口蹄疫抗体不合格。猪瘟抗体检测：采用间接血凝方法检测，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：抗体效价≥1:32，则判定被检血清猪瘟抗体合格；抗体效价<1:32，则判定被检血清猪瘟抗体不合格。蓝耳病抗体检测：采用ELISA方法，具体操作参照试剂盒说明书进行。判定标准：S/P值≥0.4，判定被检血清蓝耳病抗体合格，S/P值<0.4，则判定被检血清蓝耳病抗体不合格。

检测数据按病种进行分类统计，以Lg10的对数进行分析比较。

2 试验结果

2.1 临床不良反应

除部分猪只免疫当天及第2d体温稍有升高、食欲下降外，无其他不良反应。单苗注射组与3种疫苗注射组间无明显差异。

2.2 不同免疫程序口蹄疫抗体产生情况 (见表1、图1)

表1 口蹄疫抗体检测结果(抗体滴度用log10表示)

图1 口蹄疫抗体检测曲线图

从表1和图1可以看出，第1组和第4组在14d和21d时，抗体水平达到最高值，但维持时间不长，第28天时已开始下降，第4组抗体值高于第1组。

2.3 不同免疫程序猪瘟抗体产生情况 (见表2、图2)

表2 猪瘟抗体检测结果(抗体滴度用log10表示)

图2 猪瘟抗体检测曲线图

从表2和图2中可以看出，第2组抗体产生时间早，21天达到最高值，而第4组28天抗体达到最高值，较第2组推迟1周。

2.4 不同免疫程序猪蓝耳病抗体产生情况

注射蓝耳病灭活疫苗的2个组在免疫后43天内的平均S/P值都在零以下，2个免疫程序对蓝耳病免疫抗体的生成时间和水平无明显差异。

3 结论与讨论

（1）口蹄疫O型、猪瘟、猪蓝耳病灭活疫苗同时分点免疫注射，临床上无严重不良反应，可推广应用。（2）4组的口蹄疫免疫抗体水平高于1组，且高抗体水平维持时间较长，表明口蹄疫、猪瘟、蓝耳病同时分点免疫的抗体水平要优于单苗注射组。（3）从近几年的检测来看，青海省猪O型口蹄疫免疫抗体水平很低，一直认为与猪多种疫苗同时注射而产生拮抗作用有关，从本次试验结果来看，多种疫苗同时注射不会产生拮抗作用，相反在一定程度上还有促进协同抗体产生的作用。（4）从同一品种、相同的饲养环境以及年龄相当的猪的抗体检测结果中可以看出，注射相同剂量的同一种疫苗后，在不同个体之间的免疫抗体水平存在差异。从本试验中，猪口蹄疫抗体滴度值始终较低，这可能与试验所选仔猪有关，因为是初次免疫、反应敏感性较差，首免后产生的抗体水平低，不能达到规定的保护效价。本次试验中口蹄疫抗体合格率也较低，最高只有66.7%，也验证了本省春秋集中免疫中抗体水平较低这一结果。因此，今后的防疫工作中，应加大对仔猪等的2次强化免疫工作。（5）猪瘟脾淋苗产生的抗体效价较高，在抗体产生的整个时期，单苗注射组和3种疫苗同时注射组在抗体达到最高值时抗体合格率都在80%以上，且维持时间也较长，因此，在生产实践中，只要严格规范地进行操作，不需要加大注射剂量，都能达到较高的抗体水平。（6）从本次试验看出，蓝耳病疫苗1次免疫的效果不佳，或因抗体产生的时间较长，由于时间较为仓促，未能确定篮耳病抗体效价上升的确切时间，有待下一步进行补充完善。（7）猪瘟、口蹄疫和蓝耳病分点同时注射对3种抗体的产生没有显著影响，没有增加免疫副反应，可在农村散养生猪中推广“同时接种口蹄疫、猪瘟和蓝耳病疫苗”的免疫程序。

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