HPLC法测定不同产地麻黄中麻黄碱的含量*

高 慧

(天津市第五中心医院，天津 300450)

麻黄为麻黄科植物草麻黄(Ephedra sinica Stapf)、中麻黄(Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey)和木贼麻黄(Epherdra equisetina Bge)的干燥草质茎［1］，其性温、味辛、微苦，具发汗解表、宣肺平喘、利水消肿之功效，常用于风寒感冒，胸闷喘咳，风水浮肿，支气管哮喘［2］，麻疹初期透发不畅等病症［3］。麻黄药材产地广泛，主产于山西、吉林、辽宁、内蒙古、河北、陕西等地区。不同产地的麻黄在化学成分上存在不同质量特征。目前已知麻黄中含有多种成分，如生物碱、黄酮、鞣质、挥发油、多糖等，但对其药理毒理作用研究较多的为麻黄特征化学成分生物碱类。本实验对不同溶剂提取麻黄的方法进行比较，采用 HPLC［4，5］法测定不同产地麻黄中麻黄碱的含量，为制剂越婢加术颗粒的麻黄药材来源提供可靠保障。

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津(SHIMADZU)LC高效液相色谱仪，SHIMADZU LC－20AT多功能紫外检测仪，SHIMADZU SPD－20A型泵，LC solution Lite色谱工作站，海尔冰箱，万用电炉(北京市永光明医疗仪器厂)，电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)，循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，1/10万分析天平(上海精天电子仪器厂)，超声波清洗器(巩义市予华仪器有限责任公司，型号KQ－500E)，回流装置。

1.2 试药 甲醇(上海沃凯)色谱纯，乙腈(上海沃凯)色谱纯，甲醇，磷酸二氢钾，三乙胺，磷酸，95%乙醇，盐酸均为分析纯，娃哈哈纯净水，氢氧化钠，盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号1241－200102，含量 ＞99.9%)，蒸馏水。

1.3 药材 4种麻黄药材来源于哈尔滨医科大学大庆校区中药标本馆，经该校生药研究室魏东华教授鉴定均为麻黄科植物草麻黄(Ephedrae sinica stapf)的干燥草质茎。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱为INERTSIL ODS－SP柱(4.6 mm × 150 mm，5 μm)，检测波长:205 nm，流动相:乙腈－(0.02 mol/L磷酸二氢钾+0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)(10∶90)，流速:1 ml/min，进样量10 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱标准品4 mg，置50 ml量瓶中，甲醇溶液稀释至刻度，得80 μg/ml对照品溶液。

2.2.2 样品溶液的制备 分别精密称取产地为山西、河北、陕西、内蒙的麻黄粗粉各5 g，各置于250 ml圆底烧瓶中，加70%乙醇50 ml回流1 h，过滤，重复回流3次，合并滤液，最后制成每100 ml相当麻黄生药1 g的4份不同产地的麻黄样品溶液。对照品和样品色谱图如图1。

图1 对照品(A)样品(B)HPLC色谱图

2.3 线性关系考察 精密吸取80 μg/ml对照品溶液10、8、6、5 和 2.5 ml分别置 10 ml量瓶中，甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为 80、64、48、40和 20 μg/ml的对照品溶液，在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液各10 μl进样，记录色谱峰峰面积，以盐酸麻黄碱对照品的含量(μg)为横坐标X，峰面积积分值Y为纵坐标进行回归，得回归方程为Y=5 E+0.6 X+119 445(r=0.999 7)，线性范围为 0.2 ～0.8 μg。

2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，分别自上述色谱条件下，连续进样5次，记录色谱峰面积，计算麻黄碱峰面积积分值，RSD值为0.71%。理论塔板数为2354，表明仪器的精密度良好。

2.5 稳定性试验 精密吸取山西样品溶液，于配制后0、2.5、5.0、7.5、10.0 和 12.5 h 自上述色谱条件下分别进样测定，共测定5次，记录色谱峰面积，计算麻黄碱峰面积积分值，RSD值为1.53%。表明山西样品溶液在12.5 h内稳定。

2.6 加样回收率试验 精密称取已知麻黄碱含量的山西麻黄5份，每份2.5 g，分别准确加入盐酸麻黄碱标准品适量，依照样品溶液的制备方法制备成5份样品，按上述色谱条件进样，记录麻黄碱峰面积，计算麻黄碱平均回收率(n=5)为98.21%，RSD值为0.79%。

2.7 提取方法的确定 本实验在考察含量测定的同时，注重提取方法的研究。本实验对水蒸气蒸馏法，酸水回流法，乙醇回流法，盐酸乙醇回流法，半仿生法进行了对比［6］。

2.7.1 水蒸气蒸馏法 取麻黄粗粉10 g，置圆底烧瓶中，加 100 ml水，冷浸10 min，回流 3 次，分别为 1、0.5和0.5 h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。

2.7.2 酸水回流法 取麻黄粗粉10 g，置圆底烧瓶中，加100 ml水，0.75 ml盐酸，冷浸10 min，回流3 次，分别为1、0.5 和 0.5 h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。

2.7.3 乙醇回流法 取麻黄粗粉10 g，置圆底烧瓶中，加60%乙醇100 ml，回流3次，每次1 h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。

2.7.4 酸水乙醇回流法 取麻黄粗粉10 g，置圆底烧瓶中，加60%乙醇100 ml，0.75 ml盐酸，回流 3 次，分别为1、0.5 和 0.5 h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于 60℃干燥，称重［7］。

2.7.5 半仿生法 取麻黄粗粉10 g，置锥形瓶中，加100 ml水，加盐酸调至 pH=1，煎煮 0.5 h，过滤，滤渣加80 ml水，加氢氧化钠调至pH=10，煎煮2次，每次0.5 h，每次过滤，合并滤液，浓缩，于60℃干燥，称重。

精密吸取按上述5种方法提取的麻黄浸膏适量，分别加入甲醇适量制成每100 ml相当麻黄生药1 g的样品溶液。精密吸取对照品溶液和上述5种样品溶液各10 μl，按照“2.1”项下色谱条件分别进样，记录色谱峰面积，计算麻黄碱含量，结果半仿生法从麻黄中提取的盐酸麻黄碱含量最高，乙醇回流法次之，其次为盐酸乙醇回流法，酸水回流法，水蒸气蒸馏法。考虑到乙醇回流法较半仿生法差距不甚显著，且半仿生法对实验器材要求较高，由此确定了乙醇回流法为提取麻黄较好的方法，其原因在于游离的麻黄碱在提取和干燥的过程中易蒸发损失，水的沸点比乙醇高，因而损失较多，乙醇可减少蒸发损失，提取量也较高［8］。见表1。

表1 提取方法结果比较

2.8 样品含量测定结果 精密吸取“2.2.2”项下方法制备的四种不同产地麻黄样品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件，分别注入液相色谱仪，每份测定3次，记录峰面积，计算样品溶液中麻黄碱含量。结果见表2。

表2 不同产地麻黄中麻黄碱含量

3 讨论

HPLC法测定麻黄碱含量的报道较多，色谱条件多样，本实验分别考察了5种流动相:甲醇－水、乙腈－水、乙腈－0.1%磷酸水溶液、乙腈－0.2%磷酸水溶液、乙腈－(0.02 mol/L磷酸二氢钾+0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)，前4种流动相均有不同情况的拖尾或基线漂移现象。结果流动相为乙腈 －(0.02 mol/L磷酸二氢钾 +0.02%三乙胺+0.2%磷酸水溶液)(10∶90)基线平稳，可使色谱峰较好分离，加入三乙胺试剂可防止拖尾现象发生［9，10］。

在麻黄提取工艺中，乙醇回流法为较好的提取方法。不同产地麻黄中麻黄碱含量差异较大，以山西的最高，其次为河北，再次为内蒙，陕西麻黄最低。说明产地因素对麻黄中麻黄碱的含量有重要影响。

1 中国药典.一部.2005:223

2 中国医学科学院药物研究所.中药志.第4册.北京:人民卫生出版社，2002:621

3 战旗，张兆旺，孙秀梅.麻黄两种方法提取液的成分含量比较.山东中医杂志，1999，18(7):322

4 Mo S H，Chen X J，Deng X D，et al.Determination of ephedrine hydrochloride in Juyuanzhike tablets by HPLC.ChinTraditPatMed，2004，26(3):201

5 Wang L，Zhang T H，Jiang R，et al.Simultaneousdetermination of fexofenadine hyd－rochloride and pseudoephedrine hydrochloride in their sustainedrelease twolayer tablets by HPLC.JShenyangPharm Univ，2003，20(4):266

6 沈红，狄留庆，黄耀洲.不同提取方法对麻黄中麻黄碱提取得率的比较研究.南京中医药大学学报，2004，20(3):170

7 张绍轩，李勇，黄青，等.用正交试验优选盐酸乙醇回流法提取麻黄的工艺研究.吉林中医药，2008，28(4):291

8 赵东旭，李伟成，苏志国.草麻黄中麻黄碱提取的工艺学研究.天然产物研究与开发，2001，13(2):167

9 张巍，杨继荣，徐春梅.建立麻黄提取物含量测定高效液相色谱法.黑龙江医药，2010，23(2):155

10 符继红，张丽静.麻黄药材HPLC指纹图谱的研究.中草药，2008，30(2):163