宫颈细胞异型患者HPV感染及基因分型研究

天津医科大学总医院（300052）孟雅丽

天津港口医院（300456）李树全

宫颈癌是最常见的严重危害妇女健康的恶性肿瘤之一，其发病率居女性恶性肿瘤的第二位，全球宫颈癌发病人数逐年增加，尤其在发展中国家更为突出，其中80%的病例发生在发展中国家[1]。我国作为一个发展中国家是宫颈癌的高发地区，每年大约有13.15万的新发病例，占世界总发病人数的1/3，每年约5万人死于宫颈癌。近年来，宫颈癌的发病率又有上升趋势，且年轻患者所占比例逐渐增加[2]。进行正确的早期筛查、早期诊断、早期治疗，将其阻断在癌前病变阶段，是预防和控制宫颈癌的关键。本研究对宫颈细胞异型患者进行HPV-DNA检测和阴道镜下活检，以探讨HPV感染及HPV主要基因型别与宫颈病变的关系。

1 资料和方法

1.1 资料 2009年11月～2010年12月在天津港口医院门诊和病房中行宫颈液基细胞学检查（Thinprep cytologic test，TCT）者，采用TBS（the bethesda system）分类法，发现意义不明确的非典型鳞状细胞（Atypical squamous cell of undetermined significance，ASCUS），低度鳞状上皮内病变（lowgrade squamous intraepithelial lesion，LSIL）及高度鳞状上皮内病变（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）等细胞异型的患者186例，年龄最小的患者为2l岁，最大的患者为61岁，平均年龄为44.0岁。门诊检查者包括因病就诊病人及健康查体者，病房中为术前常规的病人，研究中将有前在的宫颈上皮内瘤样病变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）史、宫颈、阴道和外阴癌患者及临床上有免疫抑制、妊娠者除外。

1.2 方法 186例患者均予行HPV-DNA检测及行电子阴道镜检查和宫颈活检。①HPV-DNA检测：用宫颈脱落细胞采集器于宫颈口采集表皮脱落细胞，应用香港亚能基因检测技术研究中心的HPV基因分型芯片检测系统检测HPV感染及基因分型情况；②阴道镜检：严格按照操作说明进行电子阴道镜检查，对可疑部位活检或同时行宫颈管搔刮术；③阴道镜活检标本病理学检查均由天津港口医院病理科医师完成。

附表1 病理学与HPV-DNA检测结果

附表2 各组HPV基因型别的分布[n（%）]

续表2 各组HPV基因型别的分布[n（%）]

1.3 统计学处理 所有资料分析由SPSS 13.0软件处理，以评估HPV感染及其基因型别与宫颈病变的关系。

2 结果

2.1 病理学与HPV-DNA检测结果 本组检测186例中，经阴道镜活检病理结果为正常或宫颈炎的患者为130例，宫颈湿疣或CIN1的患者为25例，CIN2-3的患者为25例，宫颈癌的患者6例，其中浸润性鳞癌的患者5例，1例为腺鳞癌。HPV-DNA阳性者41例，占总数的22.0%，不同病理组别HPV阳性率分别为：正常或宫颈炎组5/130（3.8%）、CIN1组10/25（40.0%）、CIN2-3组20/25（80.0%）、宫颈癌组的阳性率6/6（100%）。见附表1。

经统计分析，X2=99.83，P<0.01，HPV阳性检出率在不同组织学类型组别间差异显著。

2.2 HPV基因型别的分布 在41例HPV阳性的病例中共检出16种HPV亚型，单型别感染的患者34例（82.9%），复合感染的患者为7例（17.1%），其中二重感染的患者5例，三重感染的患者2例，高危型感染的患者40例，占总数的97.6%，其中包含高低危亚型混合感染的患者4例，单型别低危感染的患者1例，占总数的2.4%。在CIN2-3中及宫颈癌病例中，高危型HPV感染率为100%。6例宫颈癌中，有4例宫颈鳞癌感染HPV16，1例宫颈鳞癌感染HPV33，1例宫颈腺鳞癌感染HPV18。在检出的16种型别中，HPV16（17例）最常见，HPV58（8例）次之，HPV18（5例）居第三位，见附表2。HPV16检出率明显高于其他亚型，在各组间差异显著，P<0.01。

3 讨论

宫颈癌的发生是由宫颈癌前病变，即宫颈上皮内瘤样病变在多个基因、多个因素综合作用参与下发展而来一个连续的、渐变的过程。从CIN发展到宫颈浸润癌需要十几年的时间，由CINⅠ发展到原位癌平均为9年，再发展到浸润性癌则需要3个月～2年[3]。而宫颈浸润癌的五年生存率约是67%，宫颈早期癌的五年生存率约是90%，宫颈原位癌的五年生存率几乎达100%。所以，进行正确的早期筛查、早期诊断、早期治疗，将其阻断在癌前病变阶段，是宫颈癌预防和治疗工作中的关键。

3.1 目前，对宫颈癌及其癌前病变的筛查和诊断，主要采用宫颈脱落细胞涂片和活体组织病理学检查等形态学方法。其中，活体组织病理学检查是金标准，可以明确诊断宫颈癌及其癌前病变级别，但其为有创性检查，会给患者带来一定的身心影响和经济负担。

自以TBS系统为诊断标准的宫颈液基细胞学检查（TCT）广泛应用于宫颈癌筛查以来，宫颈癌的发生率和病死率已大幅下降，但因其敏感性、特异性以及可重复性存在缺陷，在临床应用中仍然存在着一定的漏诊率和误诊率，其中以宫颈细胞学异常中最常见的ASCUS和LSIL为首。而HPV感染是宫颈病变产生的必要条件。

国际癌症研究中心（LARC）在2004年对HPV的总结中提出：没有持续的HPV感染，女性发生宫颈鳞癌的可能性为0；高危型HPV检测作为宫颈癌筛查和追踪管理是有效，可行的[4]。当HPV检测加入到宫颈细胞学筛查中时，两者结合的敏感性超过了95%，尤其作对ASCUS来说，HPV检测比重复细胞学筛查的灵敏度高[5]。

本研究亦证实在高级别的宫颈病变中，HPV的检出率明显高于低级别宫颈病变。

3.2 HPV病毒目前确定的型别有110多种，大约有35种与生殖道感染有关，约20种与肿瘤有关。依据不同型别与癌发生的危险性高低，HPV分为低危型如HPV6、11、40、42、43、44、54等，主要引起生殖道、肛周皮肤和阴道下部的外生性湿疣类病变、扁平疣类病变和宫颈低度病变；高危型如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等，常与宫颈癌及高级别宫颈上皮内瘤样病变（CINⅡ/Ⅲ）的发生相关，尤以HPV16、18型最常见。在高级别CIN和宫颈癌组织中，高危型HPV病毒DNA检出率几乎为100%，其中HPV16、18的阳性率分别是60%、14%[6]，与本研究结果相似。

在本研究中发现，病毒感染以单一和双重感染多见，三重及以上感染只见于少数病例。在感染型别上，HPV16型无论在单一感染还是在多重感染中都是最常见的。仅次于HPV16型的是HPV58和18型感染。

综上所述，在宫颈病变筛查中，HPV-DNA尤其是高危基因型别检测能够辅助TCT有效地筛查出宫颈病变，明显减少宫颈高度病变的漏诊，并在预测病变进展及判断预后等方面有巨大的临床应用价值。