三种长白山野生食用菌多糖和微量元素含量测定

2011-09-25徐晶曹越通化师范学院制药与食品科学系吉林通化134002

通化师范学院学报 2011年4期

徐晶，曹越(通化师范学院制药与食品科学系，吉林通化134002)

徐晶，曹越
(通化师范学院制药与食品科学系，吉林通化134002)

目的测定三种长白山野生食用菌—牛肝菌、密环菌、香菇的中多糖和微量元素的含量.方法采用水提醇沉法提取多糖，苯酚—硫酸法测定多糖含量，火焰原子吸收光谱法测定Ca、Fe、Zn、Mg四种微量元素的含量.结果牛肝菌、密环菌、香菇中多糖含量依次为7.67%、14.45%、6.92%.微量元素含量依次为(μg·g－1):Fe:910.9，769.4，473.0，Ca:176.1，68.8，141.7;Mg:34.3，25.3，30.1;Zn:128.7，83.9，124.9.结论三种长白山野生食用菌均含有丰富的多糖和微量元素，其中密环菌多糖含量最高，牛肚菌微量元素含量最高.

食用菌;多糖;微量元素;苯酚—硫酸法;原子吸收光谱法

食用菌是一大类有大型子实体的高等真菌，俗称蘑菇或蕈，含有蛋白质、多糖、纤维素、维生素、矿物质等多种营养成分，是一种绿色保健食品.食用菌中含有的多糖具有增强人体免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降低胆固醇等作用［1－2］，近年来得到国内外学者的广泛研究［3］.食用菌多糖的提取方法主要有水提醇沉法、酸碱提取法、酶解法、超声波法、微波法、超临界流体萃取法等方法［4－5］，其中水提醇沉法是最经典方法，应用最为广泛.关于食用菌中微量元素的研究报道较少，测定方法主要有吸光光度法、原子吸收光谱法和原子发射光谱法等.最近，于颖［6］报道了采用电感耦合等离子体质谱(ICP－MS)法测定牛肚菌中微量元素的方法.本文对三种长白山野生食用菌——牛肝菌、密环菌、香菇中多糖和微量元素(Fe、Ca、Mg、Zn)的含量进行了测定，以期为合理开发和利用长白山野生食用资源提供理论依据.

1 仪器与材料

1.1 仪器

80－2离心机(江苏省金壇市荣华仪器制造有限公司);HWS26型电热恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司);DHG—9101—3S型电热恒温鼓风干燥箱(上海三发科学仪器有限公司);FZ102微型植物试样粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司);722型可见分光光度计(上海元析仪器有限公司); FA1604A电子天平(上海精天电子仪器有限公司); WFX－1F2B2原子吸收分光光度计(北京第二光学仪器厂);铁空心阴极灯、钙空心阴极灯、镁空心阴极灯、锌空心阴极灯(河北衡水空心阴极灯厂).

1.2 材料

牛肝菌和密环菌采自吉林省通化市佐安，香菇购自通化市新华市场(人工栽培的鲜品)，经通化师范学院制药与食品科学系于俊林教授鉴定，分别为厚环粘盖牛肝菌Suillus grevillei(Kl.)Sing.、蜜环菌Armillariellamellea(Vahl.:Fr.)Karst，香菇Lentinus edodes(Berk.)Sing..将三种食用菌用蒸馏水清洗干净，放于铁盘上自然风干7天，用植物微型粉碎机进行粉碎，过80目筛备用.

1.3 试剂及药品

三氧化二铁(光谱纯);氧化钙(高纯);金属锌(99.99%);硫酸镁(光谱纯);葡萄糖(分析纯)、苯酚(分析纯);盐酸、硝酸、高氯酸、硫酸均为优级纯;蒸馏水.

1000mg·mL－1铁储备液:准确称取经灼烧的光谱纯三氧化二铁0.1429 g，置于250 mL烧杯中，加入盐酸(1+1)20 mL，加热至完全溶解，蒸至小体积，冷却后，加入盐酸5 mL，加热使盐类溶解，用去离子水定容到100 mL容量瓶中，摇匀.

系列铁标准溶液:取10 mL铁储备液用蒸馏水定容至100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1铁标准溶液，从100 mg·mL－1铁标准溶液中分别取1、2、3、4、5 mL定容至50 mL，配制成浓度为2、4、6、8、10mg·mL－1系列铁标准溶液.

1000mg·mL－1钙储备液:准确称取经灼烧的高纯氧化钙0.1400 g，置于250 mL烧杯中，加入盐酸2mL，低温加热使其溶解，冷却后移入100 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀.

系列钙标准溶液:取10 mL钙储备液用蒸馏水定容至100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1钙标准溶液，从100 mg·mL－1钙标准溶液中分别取2、4、6、8、10mL定容至50mL，配制成浓度为4、8、12、16、20 mg·mL－1系列钙标准溶液.

1000 mg·mL－1锌储备液:准确称取高纯金属锌0.1000 g，置于250 mL烧杯中，加盐酸(1+1)20 mL，加热至完全溶解，蒸至小体积冷却，加入盐酸5 mL，加热煮沸溶解盐类，冷却后用去离子水移入100 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀.

锌系列标准溶液:取10 mL锌储备液用蒸馏水定容到100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1钙标准溶液，从100 mg·mL－1锌标准溶液中分别取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL定容至50 mL，配制成浓度为0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg·mL－1系列锌标准溶液.

1000 mg·mL－1镁储备液:准确称取光谱纯硫酸镁0.5261 g，加入2 mL水，慢慢加入2 mL盐酸(1+1)，待完全溶解后，加热煮沸，冷却后移入100 mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀.

镁系列标准溶液:取10 mL镁储备液用蒸馏水定容到100 mL容量瓶中，成为100mg·mL－1镁标准溶液，从100 mg·mL－1镁标准溶液取10 mL用蒸馏水定容到100 mL容量瓶中，成为10 mg·mL－1镁标准溶液，从10 mg·mL－1镁标准溶液中分别取1、2、3、4、5 mL定容至50mL，配制成浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg·mL－1系列镁标准溶液.

0.1 %的葡萄糖标准溶液:精密称取干燥恒重的葡萄糖0.5 g，加蒸馏水溶解，定容到500mL的容量瓶中，混匀备用.

2 实验方法

2.1 多糖含量的测定

食用菌多糖测定采用苯酚—硫酸法.

(1)葡萄糖标准曲线的绘制.准确吸取葡萄糖标准使用溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置于比色管中，各补水到2 mL，然后加入1 mL5%的苯酚溶液，振荡混匀.再小心加入5 mL浓硫酸，摇匀，用分光光度计于490 nm处以试剂空白为参比，分别测定各溶液的吸光度，绘制标准曲线.

(2)食用菌多糖样品待测液的制备.准确称取已风干的牛肝菌、密环菌、香菇各约10 g，置于500mL烧瓶中，加水300 mL置沸水浴中加热1 h，过滤，将滤液浓缩至25 mL.滤液加入质量分数为95%的乙醇145 mL，使溶液质量浓度达到85%，静置过夜.将静置过夜的溶液离心沉淀，用乙醇反复洗涤，60℃烘干成粉末，备用.

因为粗提取的多糖中含有单糖、双糖、低聚糖等成分，必须进一步的精制、纯化.取经粗提取的三种菌粉各0.2 g，分别置于500mL容量瓶中，加水100 mL左右，放置沸水浴上加热1 h，冷却至室温后用85%乙醇150 mL，于60℃浸提30 min，重复2次，合并提取液，以3000 r·min－1的转数离心分离5 min，用乙醇溶液洗涤沉淀，离心后弃去上清液，重复操作3～4次，然后将沉淀加入蒸馏水溶解并定容至100 mL，摇匀，即得多糖样品待测液.

(3)食用菌多糖含量的测定.准确吸取三种样品测定液各1mL，分别置于比色皿中，按照标准曲线制备方法进行测定，于490nm处测吸光度，以试剂空白为对照，分别测得牛肝菌多糖、香菇多糖和密环菌多糖的吸光度，按下式计算多糖含量.

多糖计算公式:

式中:C－根据线性方程计算出的样品测定液中葡萄糖质量，mg;V1－样品提取时定容体积，mL;V2－样品比色管中取样体积，mL;m－样品称量质量，g.

2.2 微量元素的测定

食用菌中微量元素的测定采用原子吸收光谱法.

(1)仪器工作条件.火焰原子吸收分光光度法测定各微量元素的仪器最佳工作条件如表1.

表1 仪器工作条件

(2)微量元素待测液的制备.准确称取已风干的牛肝菌、密环菌、香菇各0.5g于三个100mL小烧杯中，加入5mL硝酸，盖上表面皿，静置24h，用电热套在110°C条件下加热，待溶液近干时取下，冷却，加入3mL高氯酸，加热(加热后冒白烟)至近干，取下，冷却后移入50mL容量瓶中，用3%的硝酸溶液定容，制得微量元素测定液，每样平行制备三份.