白翅浮鸥H5亚型禽流感及新城疫的卵黄抗体监测

齐艳萍，陈雪龙，尹再军，王晓龙，赵和生，张 旭

(1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆，163319；2.大庆龙凤湿地保护区，黑龙江大庆，163711；3.东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨，150040)

禽流感(Avia influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒属的AI病毒(AIV)所引起的各种禽类的感染疾病综合征[1]。新城疫(Neweastle disease，ND)是由ND病毒(NDV)引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病[2-3]。AI与ND是严重危害禽类的两种烈性病毒性传染病，一旦感染，通常引起禽类大批死亡，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须呈报的传染病[4]。野禽中的许多种类又具有迁徙习性，成为传播AIV和NDV的重要因素，历史上已报道多个国家因进口观赏鸟类而导致AI或ND的流行。如何对这两种疾病有效的防控，已经成为全世界面临的一个问题。

白翅浮鸥(Chlidonias leucoptera)属鸟纲，鸥形目，鸥科，为我国常见候鸟，在大庆龙凤湿地内属于优势种群，为了解大庆龙凤湿地野生水禽母源抗体的携带状况，本研究应用血凝抑制试验，针对龙凤湿地优势种白翅浮鸥进行AIV和NDV卵黄抗体(母源抗体)的检测，探讨野生水禽种群对这两种病毒性传染病的自然被动免疫状况，并进一步推测白翅浮鸥种群AIV和NDV的感染和接触情况，为防控提供依据。

1 材料和方法

1.1 白翅浮鸥巢卵 于2010年春季在大庆龙凤湿地按照每个巢穴一枚的比例，采集白翅浮鸥巢卵，共144枚。

1.2 诊断试剂 H5亚型AI抗原和ND抗原及标准血清购自哈尔滨兽医研究所。

1.3 卵黄抗体的提取 分别无菌吸取200μL卵黄，加入800μL PBS，混匀后，3000r/min离心10m in，取上清待测。

1.4 血凝抑制试验 在12孔微量反应板以PBS对卵黄稀释液、阳性血清和阴性血清进行2倍倍比稀释。每孔加入4单位抗原25μL，室温作用20min。每孔加入1%鸡红细胞悬液，室温作用20min后，进行结果判定。

2 结果与讨论

2.1 H5亚型AIV和NDV卵黄抗体监测结果 144枚白翅浮鸥巢卵中有56枚为H5亚型AIV卵黄抗体阳性，阳性率为38.89%，平均抗体滴度为3.76(log2)(表1)。该结果高于青海湖等地区的斑头雁、鹌鹑等鸟类的血清抗体水平[5-6]，但两者差异不大。144枚白翅浮鸥巢卵中有52枚为NDV卵黄抗体阳性，阳性率为36.11%，平均抗体滴度为4.08(log2)。

2.2 卵黄抗体与血清抗体分析 亲本鸟感染AIV和NDV后在体内产生抗体，通过卵黄直接传递给子代雏鸟使其被动免疫，母源抗体水平可以在一定程度上反映亲本鸟的特异性病原体感染及其在繁殖环境中的病原体存在状况[8]。在家鸡和家鸭两种禽类中，血清抗体与卵黄抗体具有良好的一致性和相关性[7]，通过卵黄抗体的检测可以推测其母体对病毒的接触情况以及子代可能获得的母源抗体滴度水平，进而监测整个种群的感染和自然被动免疫状况，这也为野禽某些疾病的研究提供了方便快捷的研究方法。

表1 白翅浮鸥H5亚型AIV和NDV卵黄抗体的检测Table 1Detection of yolk antibody against H5subtype AIV and NDV in white-w inged tern by HI test

2.3 白翅浮鸥种群H5亚型AIV和NDV感染和接触情况分析 野生鸟类携带AIV、NDV现象十分普遍，在鸭、鹅、斑鸠、麻雀、百灵、八哥、天鹅等许多鸟类体内均检测到AIV抗体，并发现至少236种野鸟可以自然或实验性感染NDV，它们作为病毒携带者在病毒传播中发挥作用[9]。本次调查显示，大庆龙凤湿地白翅浮鸥巢卵H5亚型AIV和NDV卵黄抗体阳性率分别为38.89%和36.11%，检出率较高，其原因可能是：(1)有资料表明禽类不同个体、不同品种之间的病毒可以通过粪便-水-口或者口-水-口途径互相传播[10]。龙凤湿地内湖泊沼泽星罗棋布，是鸟类重要的繁殖地，其内栖居的鸟类多达76种，小环境内部病毒互相传播可能导致白翅浮鸥卵黄抗体阳性率较高。(2)白翅浮鸥为候鸟，其迁徙过程中可能会接触到这两类病毒，在龙凤湿地以外发生抗体阳转。

2.4白翅浮鸥种群预期感染或接触情况推测 当母源抗体效价为6(log2)左右时，其保护率为100%，为4(log2)时，其保护率为50%，为2(log2)时，其保护率为20%。白翅浮鸥卵H5亚型AIV和NDV平均抗体滴度分别为3.76(log2)和4.08(log2)，因此其雏鸟可能会获得接近50%的保护率。同时，根据此研究结果推测龙凤湿地白翅浮鸥种群中分别至少有61.11%和63.89%的雌性繁殖个体未产生H5亚型AIV和NDV血清抗体，因而种群再次感染AIV和NDV的风险依然很高。

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