紫外分光光度法测定银杏叶中总黄酮的含量

王卫华，彭婷婷，晁建敏＊，安芸,苗方

（菏泽医学专科学校 山东菏泽274000;⋆菏泽市牡丹大药房连锁公司）

银杏（Ginkgo biloba L）又名白果,是我国的特种植物,食用、绿化环境。特别在医药上有很高的利用价值。银杏叶中黄酮类化合物可分为黄酮、双黄酮和儿茶素等类化合物，共有36种，主要以苷的形式存在。银杏黄酮的元有7种，即槲皮素、山柰素、异鼠李素、杨梅素、芹菜素、木草素、三粒小麦黄酮等，前3种是其主要成分［1］。在银杏叶及提物（GBE）的质量控制中主要检测这3种黄酮苷元的含量。银杏叶中黄酮类化合物具有捕获游离基和抑制血小板活化因子、扩张脑血管、促进血液循环、抗过氧化等功能，从而广泛用于治疗冠心病、心绞痛，治疗老年痴呆症和增强记忆功能，防治皮肤病、脱发等疾病［2］。银杏所特有的值逐步为我们所重视。对银杏中黄酮的总含量测定的方法较多，为了更好地开展银杏叶的药材质量标准化研究，拟建立了分光光度法检测银杏叶总黄酮含量的方法，从而为银杏叶的质量评价提供一种新的依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 UV-2401分 光光度计（岛津）。

1.2 试剂 芦丁对照品（北京药品生物制品检定所）其余试剂均为分析纯银杏叶：采收于菏泽郊区，采后冲洗并将其在烘箱60℃烘至手捏碎，粉碎（60目 ）碎片贮于干燥器中置暗处保存。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制 精密称取芦丁对照品0.025 g（120℃干燥至恒重）置50 ml容量瓶中，加70%乙醇适量，水浴加热，溶解，放冷，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.5 mg／ml的对照品溶液。

2.2.供试品溶液的配制 精密称取银杏叶5.1004 g至100 ml的锥形瓶中，加70%乙醇75 ml，超声45 min［3］，冷却，过滤，滤液蒸干 ，用 70%乙醇定容于100 ml容量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 测定波长的选择 精密移取对照品溶液2.00 ml置10 ml容量瓶中，按顺序依次加入5%NaNO2溶液 0.4 ml混匀 ，放置6 min，加10%AlCl3溶液 0.4 ml摇匀，放置6 min，再加入4%NaOH溶液4 ml，并加蒸馏水稀释至刻度，摇匀放置15min［4］。同法以对照品溶液吸取0 ml配制的10 ml溶液作为空白，在400～700 nm范围内进行扫描，确定它们的最大吸收波长为510 nm。

2.4 标准曲线绘制 精密吸取对照品贮备液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml分别置于 10 ml容量瓶中，按方法配制，以试剂作空白，于510 nm处分别测其吸收度。以对照品浓度C（mg/ml）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：A=26.208C+0.0318（ r=0.9993），线性范围为（0.025 mg～0.250 mg）/ml。

2.5 样品的测定 取供试品溶液3 ml 3份，照标准曲线绘制，制备待测溶液，以试剂为空白，在510 nm处测定其吸光度，代入回归方程中得实验结果，平均百分含量为1.56%。（见表1。）

表1 样品中总黄酮的含量测定

2.6 稳定性实验 取对照品试液1份每隔10 min测 1次吸光度，显示在 60 min内稳定，RSD为0.43% 。

2.7 精密度实验 精密吸取同一样品供试液2 ml，照“标准曲线绘制”中的方法测定吸收度，RSD为1.08% ，表明仪器精密度良好。

表2 加样回收率试验结果（mg,%）

2.8 样品加样回收率实验 精密吸取标准溶液0.10 ml、0.20 ml、0.30 ml各1份，分别加入已知含量的供试品溶液3.00 ml，结果见表2。由表中可以看出，分光光度法测定银杏叶总黄酮中芦丁平均回收率为99.4%，RSD为0.44% ，回收率良好。

3 讨论

本实验所提取的黄酮类化合物溶液用显色法测定时会产生浑浊现象，因此该法不能准确地测定总黄酮的含量。高相液相色谱法无疑是使用最多，也是准确度最为可靠的分析方法，但是分析时间相对长、分离效率低、即使采用梯度洗脱技术也难使某些成分完全分离，且仪器比较昂贵，色谱柱易被污染，而且污染后难于清洗，使柱的使用寿命缩短，在工业中不易推广［5］。从实验结果可知，以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定其总黄酮含量，操作简便，重现性好，结果准确。从紫外扫描图谱上发现的510 nm波长总黄酮含量测定的方法经检验是可行的，是一种简便快捷的方法。

针对含量测定配制供试品溶液的不同提取方法，不同提取溶剂，不同溶剂体积及不同提取时间分别考察，结果以75 ml 70%乙醇超声提取45 min含量最高，杂质较少。

［1］ 王飞娟.银杏叶中黄酮类化合物的研究进展[J].西北药学杂志，2010 ，25（2）：155-156

［2］ 于华忠，李国章，曹庸，等.银杏黄酮的含量测定［J］.中国林副特产，2005，4（2）：22-22.

［3］ 李春红，潘宏，田吉.香椿嫩叶中总黄酮的含量测定［J］.泸州医学院学报 2010，33（4）：380-382.

［4］ 王浩江，孙体健，曹晓峰.月季花中总黄酮含量测定［J］.山西医科大学学报，2007，38（4）：318-319.

［5］ 王新雯，海洪，金文英等.黄酮类化合物含量测定方法的研究进展［J］.辽宁化工，2008，37（12）：857-860.