血清DLL1的检测在结核性脑膜炎诊断中的价值

沈萍 鲁晶晶 李尽义 彭涛 贾延劼

结核病是当今世界上引起死亡人数最多的传染病之一。在我国近几年来其发病率呈上升趋势，结核性脑膜炎也随之多见，但目前尚无特异敏感的诊断方法，误诊率较高。致病结核杆菌在宿主体内的生存能力与其氧化脂肪酸的能力有关。Delta-Like-1(DLL1)属于Notch配体，而 Notch1信号在脂肪代谢中起到重要作用［1］。本研究通过对结核性脑膜炎，病毒性脑膜炎，颅内转移瘤及健康对照组患者血清的DLL-1水平进行检测，探讨其临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2008年5月至2010年11月入住新郑市人民医院和郑州大学第一附属医院神经内科及儿科的中枢神经系统感染性疾病的患者45例，均严格按照相关标准确定诊断。分为结核性脑膜炎患者26例，作为结脑组，男10例，女16例;年龄6～51岁，平均(21.2±14.5)岁;病毒性脑膜炎患者19例，作为病脑组，男12例，女7例，年龄5～50岁，平均(15.9±14.0)岁;正常对照组选择无中枢神经系统感染、肿瘤、免疫性疾病、血液系统疾病而需要鉴别诊断的周围神经病变或头痛等患者，共25例，男15例，女10例;年龄8～50岁，平均(17.5±18.3)岁。同时选择颅内转移瘤7例，作为肿瘤组，男4例，女3例，年龄42～70岁;平均(54.9±7.8)岁。

1.2 结脑的诊断标准 ①年龄＞12周岁的24例患者按照Ahuja等［2］的TMB诊断标准(Ahuja标准);②年龄≤12周岁的6例患者参照有Seth和Sharma［3］的标准(Seth标准)。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 在获得患者或其家属知情同意的情况下，抽取外周静脉血2 m1，采用不加抗凝剂的真空采血管收集，室温30 min后，2000 r离心血清10 min，分离血清。所有标本登记后，均放入-20℃冰箱保存。

1.3.2 DLL1的测定 采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)，试剂盒由韩国AdipoGen公司提供，按照说明书操作。构建一个通过绘制已知浓度(浓度)(Y)与吸光度(吸光率)(X)的标准曲线。显示一个可衡量的范围通常显示在(标准曲线)0.125ng/ml和8ng/ml之间。线性回归成功，两者相关系数为0.9996。通过回归曲线插值公式，计算样品的可溶性DLL1浓度，如下所示的一个二次方程公式:Y=-0.1045X2+7.514X-0.2449;r2=0.9984;DLL1浓度计算乘以稀释倍数，以获得该样品稀释前的浓度。

1.4 统计学方法 所有数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析。计量资料结果均以均数±标准差表示，数据以(±s)表示。多组间比较用方差分析(F检验)或Kruskal-Wallis检验，组间两两比较用LSD-t检验或Bonferroni法。P＜0.05表示差异具有统计学意义.

2 结果

血清中DLL1的含量测定结果 表1提示，结脑组、病脑组、对照组分别为［(17.25±6.91)，(1.32±3.57)，(0.99±1.84)ng/ml］，结脑组与病脑组、对照组相比差异均有统计学意义(F=50.31，P＜0.01)，病脑组与对照组相比差异无统计学意义(F=0.114，＞0.05)。

表1 各组血清中DLL1的含量的比较(x ± s，ng/ml)

3 讨论

结核性脑膜炎的早期诊断、及时治疗，直接关系到患者的预后，是降低病死率和并发症的关键［2］。但是临床上结核性脑膜炎脑脊液常呈不典型改变，易被误诊。本研究即为了寻找诊断结核性脑膜炎更有价值的实验室指标。

结核杆菌全基因组有4411529bp，包括4000余个编码蛋白质的基因，其中具有250多个编码脂肪酸代谢的酶的基因，比大肠杆菌相关酶类多了4倍以上。结核杆菌细胞壁所含的脂类约占细胞壁干重的60%［4］，其含量与细菌毒力密切相关，含量越高毒力愈强。这些证据均说明了脂肪代谢对结核杆菌的重要性［5］。

DLL1是果蝇的Notch配体Delta人类同源体，是723个氨基酸组成的L型跨膜蛋白，与小鼠DLL1蛋白质相比有88%是相同的，有一个DSL区域跟随8个串联的EGF(表皮生长因子)样重复序列和1个简短的细胞质的C-端区域［6］。DLL1与Notch结合，促进脂肪细胞的分化进程［7］。Notch是一组跨膜受体，在多种器官及细胞的发育中起作用，主要决定细胞的分化方向。近年研究表明，Notch信号通路的抑制、基因突变或异常激活可能与许多疾病如阿尔茨海默病、帕金森病、脑卒中、肿瘤、脑再灌注损伤等尤其是脑肿瘤的发生有关［8］。Notch1及其配体DLL1在颅内感染性疾病中的报道很少。

结果表明，结核性脑膜炎组中血清DLL1含量也明显高于其他中枢神经系统感染组别，26例结脑患者行DLL1测定，测定值中有22例(84%)＞6.0 ng/ml，而病脑及对照组各有1、0例＞6.0 ng/m，以大于该值为判断值，也能与病脑及正常对照相鉴别。

结脑患者的血清DLL1含量升高的机制尚不完全清楚，可能如下:(1)结核病是一种慢性消耗性病变，引起脂肪等代谢紊乱;DLL1可能也参与了脂肪细胞的分化和自我更新;结脑患者代谢紊乱增强，DLL1脱落有助于Notch信号在邻近细胞的下调并促进脂肪细胞的分化进程［7］。(2)当结核菌侵入中枢神经系统后引起结核性脑膜炎时，因局部的免疫反应，使T淋巴细胞数量明显增多、增殖、分化;T淋巴细胞增多需要Notch信号途径的激活。Kapoor等发现在结核性脑膜炎患者脑内结核性肉芽肿中Notch信号途径的激活［9］。(3)DLL1通过支架蛋白MAGI1，位于神经细胞突起的粘附连接里，当结核性脑膜炎导致的神经细胞粘附连接损伤后，DLL1可能释放出来，从而使得DLL1的含量增高［10］。

综上所述，结核性脑膜炎患者的血清中DLL1的含量均有明显增高，对血清中DLL1的含量进行检测，不仅方法简单，而且为结核性脑膜炎的诊断提供了新的思路。

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