银黄注射液刺激性、过敏性和溶血性试验研究

2011-08-24鲍玉琳

中国实用医药 2011年27期

鲍玉琳

银黄注射液收载于(卫生部药品标准)中药成方制剂第十九册197页。是由金银花提取物、黄芩苷组成。具有清热、解毒、利咽之功效，临床用于风热犯肺所致发热、咳嗽、咽痛等症。上呼吸道感染，急性扁桃体炎，咽炎等见上述症候者，临床疗效可靠。本研究对银黄注射液的相关毒性进行试验，为临床安全用药提供参考依据。

1 材料

1.1 药物银黄注射液由四川三精升和制药有限公生产，每支装2 ml，内含绿原酸25 mg，含黄芩甙40 mg。生理盐水由山东临淄制药厂生产。卵蛋白由上海伯奥生物科技有限公司生产。

1.2 动物新西兰家兔，体重2～2.5 kg，雌雄各半，青岛康大食品有限公司，动物生产合格证号：SCXK(鲁)20070023，普通级;一级白色豚鼠，体重300～400 g，由山东省卫生防疫站提供，动物合格证号为鲁动质字20020603;Wistar大鼠，体重120～180，雌雄各半，购自山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室，合格证号：SCXK(鲁)2005-0017。

2 试验方法

2.1 肌肉刺激试验兔4只，雌雄各半，剪去兔两腿外侧毛，75%的乙醇消毒后，每只兔左腿股四头肌内注射2 mg/ml银黄注射液1 ml，右腿股四头肌内注射生理盐水1 ml注射后48 h处死动物，解剖取出两侧股四头肌，纵向切开，观察注射局部刺激反应。按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》对局部进行评分(表1)。取局部组织标本进行病理组织学检查。

2.2 血管刺激试验兔6只，雌雄各半，每只兔左耳静脉滴注2 mg/ml的银黄注射液，给药体积15 ml/kg，给药速度1～2 s/滴;右耳静脉滴注生理盐水，给药体积和给药速度同试验组。注射后48 h处死动物，解剖取注射部位进行病理组织学检查。

2.3 全身主动过敏试验取健康雄性豚鼠24只，随机分为4组，分别为银黄注射液高剂量组、低剂量组、阳性对照组和生理盐水对照组，每组6只。银黄注射液高剂量组为72 mg/kg，低剂量组为24 mg/kg;阳性对照组为牛血清白蛋白，剂量为3 mg/只;阴性对照组给予等体积的生理盐水。隔日腹腔注射相应的药液，共3次。末次注射后第10天快速静脉给药激发，激发时剂量、体积翻倍。按表2进行过敏反应评价。

表1 肌肉刺激反应分级标准

表2 过敏反应症状评价表

2.4 被动皮肤过敏试验取健康大鼠8只，随机分为4组，分别为受试药物高剂量组、低剂量组、阳性对照组和阴性对照组，每组2只。银黄注射液高剂量组为270 mg/kg;低剂量组为27 mg/kg;阳性对照组为卵白蛋白，剂量为75 mg/kg;阴性对照组给等体积的生理盐水。各组隔日腹腔注射相应的药液，共注射五次。末次致敏注射后第10天采血，2000转/min离心10 min，分离血清，-20℃保存，两周内备用。另取16只大鼠随机分为4组，分组同致敏试验。大鼠两侧背部剪毛，面积约3×4 cm。上述各组抗血清与生理盐水以1∶2和1∶10稀释。各组在预先剪毛的背部皮肤左侧皮内注射1∶2的抗血清0.1 ml，右侧皮内注射1∶10的抗血清0.1 ml。24 h后各组静脉注射与致敏剂量相同的药液加等量的1%伊文斯兰染料共1 ml。30 min后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小，直径大于5 mm者为阳性。

2.5 溶血试验 ①2%红细胞混悬液的制备：取兔血10 ml，放入盛有玻璃珠的灭菌三角瓶中振摇10 min，使成脱纤血液。加90 ml生理盐水，摇匀，分装于离心管中，1000转/min离心10 min，去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如上洗数次，直至上清液不显红色，弃去上清液，将所得红细胞用生理盐水配成2%的混悬液，待用。②加液：取试管7支，编为1、2、3、4、5、6、7号，每管分别加2%红细胞混悬液2.5 ml，然后对1～7 号管分别按序号加生理盐水 2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、0 ml，混匀后置于37℃培养箱中温浴30 min后，1～6管分别加10 mg/ml的银黄注射液药液 0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0 ml，7管加蒸馏水2.5 ml(表3)，匀后置37℃恒温箱中。③观察：分别于 15 min、30 min、45 min、60 min、120 min、180 min 和 240 min观察溶液上层是否呈透明红色的溶血现象，或是否有棕红色和红棕色絮状沉淀(红细胞凝集现象)。

表3 溶血试验各管加样量

3 结果

3.1 肌肉刺激试验试验组：肉眼观察发现4块股四头肌中，有3块肌肉有轻度充血，其范围小于0.5×1 cm，有1块肌肉无明显变化。根据刺激反应中反应级的分值计为分3。镜下见肌纤维结构基本正常，部分区域见局灶性出血和肌纤维坏死灶，伴有嗜中性粒细胞、淋巴细胞及组织细胞浸润。阴性对照组：肉眼观察4块肌肉中有1块肌肉有轻度充血，另3块肌肉未见明显改变，根据刺激反应中反应级的分值计为1分。镜下见局灶性出血，未见炎细胞浸润以及肌纤维的变性坏死。

3.2 血管刺激试验试验组动物静脉血管内皮细胞增生，血管壁增厚，部分血管内皮增生。

3.3 全身主动过敏试验阳性对照组6只豚鼠出现咳嗽、打喷嚏、排尿、痉挛后死亡;生理盐水对照组、银黄注射液高剂量组和低剂量组的动物均未发现过敏反应现象。

3.4 被动皮肤过敏试验阳性对照组4只均出现蓝色斑点，直径均大于5 mm。高剂量组1∶2稀释血清1只出现斑点，直径均大于5 mm。低剂量组和阴性对照组均未出现蓝色斑点。

3.5 溶血试验 7号管全部溶血，其余各管均未发现有溶血现象，也未发现有红细胞凝集作用。