Oct－2、Ki67蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤亚型中的表达意义

刘 钰，梅金红，郭银芳

（南昌大学第一附属医院a.质控科；b.病理科；c.病案室，南昌330006）

弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B－cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常见的一种，约占成人NHL的35%～40%。在欧美国家，DLBCL的发病率约占NHL的30%，在亚洲国家发病率则更高。DLBCL具有恶性程度高，侵袭性强，治愈率低的特点，严重危害人类健康。因此对其研究和预防具有极其重要的意义。通过实验了解肿瘤细胞的某些生物学特性，将有可能为DLBCL的诊断和治疗提供有价值的参考指标以及理论依据［1］。2004年Hans等运用微阵列技术和免疫组化进行CD10、MUM1、bcl26三种免疫标记物染色，将DLBCL分为生发中心B细胞样型（germinal center B cell like，GCB）和非生发中心B细胞样型（nongerminal center B cell like，non GCB）亚型，并已得到国内外学者的广泛认同。有报道称Oct－2在DLBCL中呈弥漫性表达［2］，但对于其在后者分型中的表达情况没有文献提及，而DLBCL由于分型不同治疗效果与预后截然不同。本研究若能通过对Oct－2在DLBCL生发中心型与非生发中心型中表达情况的分析，进一步了解后者的分型，将为提高DLBCL的临床病理诊断准确性提供一定的线索。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集南昌大学第一附属医院自2007年1月至2009年11月DLBCL住院患者共60例，分为2个组：生发中心型组（32例），其中男19例，女13例，年龄25～65岁，平均年龄56.2岁；非生发中心型组（28例），其中男18例，女10例，年龄29～62岁，平均年龄55.4岁。

1.2 试剂与免疫组化染色

Oct－2鼠抗人单克隆抗体（工作液）、Ki67鼠抗人单克隆抗体（工作液）购自北京中杉金桥科技有限公司。羊抗鼠免疫球蛋白及DAB显色剂购自福建迈新生物技术有限公司。DLBCL标本均常规固定、脱水、石蜡包埋、切片、HE染色和免疫组化染色。PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。

1.3 结果判定

Oct－2和Ki67阳性表达均为棕黄色颗粒定位于细胞核。判定标准：抗体阳性判断标准按阳性细胞率计分：在高倍显微镜下，选取阳性密度较高的区域，在高倍视野下至少计数1 000个肿瘤细胞中的阳性细胞数。Ki67计数时血管内皮阳性细胞不计在内。Oct－2和Ki67阳性细胞数的百分率用标记指数（labeling index，LI）表示：LI＝阳性细胞数／1 000个肿瘤细胞×100%。无明显阳性反应细胞或阳性细胞数＜20%为阴性（－）；阳性细胞数≥20%为阳性（＋）［3］。

1.4 统计学方法

采用SPSS15.0统计学软件分析，2组表达率的差异用χ2检验法分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

32例生发中心型Oct－2有23例阳性表达，9例阴性表达，28例非生发中心型Oct－2有9例阳性表达，19例阴性表达。Oct－2在2组亚型DLBCL中的表达差异有统计学意义（P＝0.03）。32例生发中心型Ki67有25例阳性表达，7例阴性表达；28例非生发中心Ki67有23例阳性表达，5例阴性表达，Ki67在2组亚型DLBCL中的表达差异无统计学意义（P＝0.326）。在32例生发中心型组中Oct－2与Ki67阳性细胞表达情况，经χ2检验分析，2种蛋白在DLBCL生发中心型中的表达无差异（P＝0.315）；28例非生发中心型组中 Oct－2与 Ki67阳性细胞表达情况，经χ2检验分析，2种蛋白在DLBCL非生发中心型中的表达存在差异（P＝0.04）。

3 讨论

2008年WHO淋巴瘤新分类明确了DLBCL的分类分子学亚型：生发中心B细胞样、活化B细胞样（也即非生发中心B细胞样）。这两种分子类型有明显不同的预后，5年生存率分别为70%和12%，生发中心型明显好于非生发中心型［4］。

Oct－2是B细胞特异性转录因子，正常状况下Oct－2在所有成熟的B细胞中呈高水平表达，而在前B细胞、T细胞中呈低水平表达，在树突状细胞、巨噬细胞、内皮细胞以及胃肠道黏膜、皮肤、胸腺的上皮中不表达［5］。因而Oct－2的表达可视为B细胞分化的一种标志，其抗体可能对B细胞淋巴瘤的诊断有帮助。有研究表明，在正常淋巴结或淋巴结反应性增生中Oct－2主要表达在B细胞，在T细胞区表达很少［6］，有实验表明Oct－2在大多数T细胞淋巴瘤为阴性表达［7］，由此推测通过对Oct－2的表达检测有助于区别B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。通过对Oct－2在31例DLBCL中行免疫组织化学染色，发现有25例呈强阳性表达，并且Oct－2免疫组织化学染色能够使肿瘤组织中增生更加活跃的细胞成分染色更加明显，故可以凸显出某些类型B细胞淋巴瘤的特有的组织学结构［8］，推测Oct－2免疫组织化学染色可能对于B细胞淋巴瘤的进一步分型有帮助。此外，Oct－2蛋白的阳性表达与肿瘤的分化程度、侵袭性有关，与患者性别、年龄、肿瘤部位、大小无关［9］。通过此次实验证明DLBCL的生发中心型中Oct－2的表达强度与其在非生发中心型中存在差异，提示Oct－2表达上调可能参与了生发中心型与非生发中心型的发病原因并且Oct－2的过表达与DLBCL生发中心来源有关。由此推测Oct－2可作为DLBCL分型的检测指标。

在细胞周期中，除G0和G1早期以外，Ki67蛋白均有表达，功能与细胞的有丝分裂密切相关，因此，Ki67被认为是较理想的检测细胞增殖活性的指标，广泛地应用于测定各种肿瘤的增殖活性［10］。

陈健等［11］采用免疫组织化学与原位杂交技术对28例小儿恶性淋巴瘤组织中VEGF和Ki67进行检测，探讨VEGF和Ki67在小儿恶性淋巴瘤中的表达中发现，在正常淋巴组织中Ki67呈低水平表达，在恶性淋巴瘤组织中Ki67表达升高，其表达水平可以反映淋巴瘤的恶性程度，Ki67在小儿恶性淋巴瘤发生、发展中起重要作用。尹相丛等［12］对淋巴瘤患者60例和20例反应性增生淋巴组织和20例正常淋巴结组织分析发现，随淋巴瘤恶性程度增高，Ki67表达水平逐渐增高，说明Ki67是评估淋巴瘤肿瘤细胞增殖的良好指标，与淋巴瘤侵袭有关，对淋巴瘤临床分型、组织分级具有一定参考价值。

本实验结果表明Oct－2在DLBCL中表达较广泛，与相关文献的报道相一致，并且在生发中心型中呈高阳性表达，可为DLBCL分型提供一定的参考价值。Oct－2在DLBCL的表达高低可能有助于临床病理判断其为生发中心型或非生发中心型。在生发中心型与非生发中心型中Ki67的阳性细胞表达率并不存在明显的差异。由于DLBCL本身属于恶性淋巴瘤的一种，从理论上讲Ki67在生发中心型与非生发中心型都应该有高表达率。因此该实验结果与Ki67作为测定各种肿瘤的增殖活性的性质是相符的。此外，通过统计学结果表明Oct－2与Ki67在DLBCL在生发中心型中的表达无差异，而二者在非生发中心型中的表达有差异，这一结果的出现考虑可能与病例数偏少以及生发中心型与非生发中心型两种分型的基因型差异有关，这一点有待于进一步研究。

［1］ 邵剑峰，林茂芳，傅燕萍，等.非霍奇金淋巴瘤组织中survivin蛋白与p27蛋白的相关性［J］.实用医学杂志，2006，22（21）：2476－2478.

［2］ 赵向荣，马大烈.Oct－2蛋白在淋巴瘤中的表达及意义［J］.中华病理学杂志，2005，34（6）：337－340.

［3］ 廖琪，真酌，杜绍敏，等.CA125、Survivin和 Ki67在上皮性卵巢癌中表达及意义［J］.中国实用医药，2009，4（4）：113.

［4］ 彭晚娇，姚丽青，郑智勇.淋巴结外弥漫大B细胞淋巴瘤分子分型的病理学研究［J］.实用癌症杂志，2010，25（1）：59－61.

［5］ Laurencikiene J，Deveikaite V，Severinson E.HS1，2enhancer regulation of germline epsilon and gamma2bpromoters in murine B lymphocytes：evidence for specific promoter－enhancer interactions［J］.J Immunol，2001，167：3257－3265.

［6］ Malone C S，Patrone L，Buchanan K L，et al.An upstream Oct－1and Oct－2binding silencergovernsB29（Ig beta）gene expression［J］.2000，164：2550－2556.

［7］ Pfisterer P，Konig H，Hess J，et al.CRISP－3，aprotein withhomology to plant defense proteins，is expressed in mouse B cellsunder the control of Oct2［J］.Mol Cell Biol，1996，16：6160－6168.

［8］ Scholer H R，Ruppert S，Suzuki N，et al.New type of POU domain in germline specific protein Oct－2［J］.Nature，1990，3444（6265）：435－439.

［9］ Trosko J E.From adult stem cells to cancer stem cells：Oct－2 gene，cell－cell communication，and hormones during tunlorpromotion［J］.Ann N Acad Sci，2006，1089（1）：36－58.

［10］ 刘刚，俞薇薇.EBV、ki67、ERK1在乳腺癌中的表达及其相关性［J］.实用临床医学，2008，9（3）：129－130.

［11］ 陈健，蒋敏，高明太，等.小儿恶性淋巴瘤中血管内皮生长因子和Ki67的表达及其相互关系［J］.兰州大学学报：医学版，2010，36（2）：44－47.

［12］ 尹相丛，杨金平，李贵新，等.nm23、ki67在恶性淋巴瘤中的表达及意义［J］.山东医药，2009，49（2）：97－98.