犬细小病毒病的最新研究进展

2011-08-15陆冠亚王仍瑞

中国工作犬业 2011年5期

关键词：病犬细小粪便

陆冠亚王仍瑞

犬细小病毒病的最新研究进展

陆冠亚王仍瑞

细小病毒病，是由犬细小病毒引起的犬的一种高度接触性传染病，以犬急性出血性肠炎或幼犬急性心肌炎为主要特征，给养犬业的发展造成了严重的损失。本文就犬细小病毒病的病原、流行特点、临床症状、病理变化、诊断和防制措施等研究近况进行综述。

一、病原

犬细小病毒病病原为犬细小病毒2型（CPV-2），它属于细小病毒科，细小病毒属。病毒粒子细小，直径20～22nm，20面体对称，无囊膜，在氯化铯中的浮密度为1.43g/cm3。基因组为单股DNA，大小为5233bp。病毒粒子有VP1、VP2、VP3三种多肽，其中VP2是衣壳蛋白主要成分，有血凝活性，能在4℃和25℃凝集猪和恒河猴的红细胞，但不能凝集其他动物的红细胞。本病毒能在多种不同类型的细胞内增殖，通常用MDCK和F81等传代细胞分离培养病毒。在MDCK上常形成核内包涵体。CPV-2易发生抗原漂移，近年来，在抗原性、宿主范围和血凝性上都发生了变化。CPV-2有a、b、c三个亚型，但致病性无明显差异，我国目前以CPV-2a流行为主。

病毒对外界环境有较强的抵抗力，室温下可存活3个月，60℃时能存活1h，在pH值3～9和56℃条件下能稳定1h以上，室温下粪便中的病毒在6 个月以内仍具感染性。CPV对甲醛、β-丙内酯、羟胺和紫外线敏感，但对氯仿、乙醚等有机溶剂和去胆碱盐有较强的抵抗力。

二、流行病学

CPV主要感染犬，偶尔也可见于貂、狐、狼等其他犬科和鼬科动物。各种年龄和品种的犬均易感，但纯种犬易感性极高。2～4月龄幼犬易感性最强，病死率最高。3～4周龄犬感染后成急性致死性心肌炎的为多；8～10周龄以肠炎为主，但心肌细胞有核内包涵体。小于4周龄仔犬和大于5岁龄的老犬发病率低。本病多为散发，同窝发病率高，犬场常呈地方流行，持续时间长。

病犬是主要的传染源。在感染后3～4天，即可通过粪、尿、唾液、呕吐物等向外界排毒，传染性强。7～10天后随着体内抗体的增多，感染性降低。病毒主要随污染的饲料、饮水，经消化道进入机体，外寄生虫也能成为传播媒介。病愈犬的粪尿长期带毒，不经严格消毒的车辆、用具、饲养和医疗人员的衣、鞋、器具等也可成为散播本病的媒介。

本病一年四季均可发生，但以冬春季多发。长途运输、饲养管理条件骤变以及寒冷、拥挤、卫生条件差等均可促进本病发生。

三、临床症状

本病在临床上主要以两种形式出现，即肠炎型和心肌炎型。有的病犬同时具有肠炎型和心肌炎型的临床症状，发病时间短，死亡率95%。

（一）肠炎型

潜伏期为7～14天，多见于青年犬。发病早期精神沉郁，食欲减少甚至废绝，鼻镜干燥，体温高达40～41℃以上，成年犬发病一般不发热。病犬常先呕吐后腹泻，呕吐物中无食糜，开始为白色泡沫，继而粘稠量少、沾取成丝，随着脱水加重则成黄色，极个别的有淡绿色胆汁，带血。排便次数增多，粪便呈黄色或灰黄色，稠厚恶臭，尿量减少，淡茶色。中期食欲废绝，渴欲增加，频繁呕吐，腹泻常呈喷射状，粪便稀薄，混有大量黏液、气泡或脱落的肠粘膜碎片。病后2～3天，粪便呈蕃茄汁样，混有血丝，并有特殊血腥臭味。后期病犬消瘦、乏力、嗜睡、腹部蜷缩，眼球凹陷，皮肤弹性减退，因脱水致电解质紊乱，易发生酸中毒而于数小时至两天死亡。病程稍长的，末期体温降低、肢端湿冷，可视粘膜苍白，排便失禁，尾部及后腹部常被粪便污染，严重者肛门松弛开张，衰竭死亡。病程短的4～5天，长的1周以上。

（二）心肌炎型

多见于流行初期或缺乏母源抗体的4～6周龄幼犬。常突然发病，初期精神尚好，仅有轻度腹泻、呕吐和体温升高，后发展迅速，可视粘膜苍白，病犬迅速衰弱，呻吟、干咳、呼吸困难，听诊有心内杂音，心律不齐，心电图R波降低，S-T波升高。病犬常因急性心力衰竭突然死亡。病死率60%～100%，只有少数轻型病例可以治愈。

由于毒素的作用，易继发呼吸困难、喘，最后心力衰竭死亡。毒素或作用于神经，造成脑出血、神经紊乱，作用于坐骨神经，造成瘫痪。

四、病理变化

病毒侵入后，感染的头两天，在口咽部复制，通过血流传播到其它器官，3～5天后出现病毒血症。病毒通过血流到达肠粘膜，并发生全身性感染。

（一）肠炎型

病死犬可视黏膜苍白，皮下干燥，血液粘稠暗紫色，犬胃内空虚，底部有少量的出血点。小肠以空肠和回肠病变严重，肠壁浆膜暗红色，浆膜下充血出血，黏膜坏死、脱落、绒毛萎缩，有时覆盖纤维素性假膜。肠腔扩张，内容物水样并混有血液和粘液，恶臭。大肠内容物稀软，带血，粘膜上有许多出血点。肠系膜淋巴结肿大，切面呈弥漫性出血。组织学检查，小肠后段粘膜上皮变性坏死，有些变性或完整的上皮细胞内含有核内包涵体。隐窝肿大，肠腺消失，残存腺体扩张，内含坏死的细胞碎片。

（二）心肌炎型

病变主要局限在肺和心脏。肺水肿，局灶性充血、出血，使肺表面色彩斑斓。心脏扩张，房室内有出血快。心肌和心内膜有非化脓性坏死灶，心肌损伤，有出血性斑纹，冠状沟有少量出血点。组织学特征为心肌纤维弥漫性淋巴细胞浸润，间质水肿和局限性心肌变性，受损心肌细胞中常有核内嗜碱性包涵体。胆囊充盈。

五、诊断

（一）临床检查：细小病毒病犬的呕吐物往往是从白色、黄色到酱红色泡沫，频繁呕吐，连续3～4天。待呕吐停止，腹泻开始。由灰黄色稀便到酱红色血便。呈喷射状水泻，此时的病犬两眼凹陷，弓背蜷缩，肛门松弛。可初诊为犬细小病毒性肠炎。

（二）组织学检查

取小肠后段和心肌病料作组织切片，肠上皮细胞和心肌细胞可见核内包涵体。

（三）血常规检验

自病犬耳缘静脉采血，WBC 计数低于6.0×103/mm3明显减少（正常值应大于6.0×103/mm3）。

（四）快速检验

1.取病犬粪便，采用犬细小病毒快速诊断盒进行检验，如呈阳性反应，即可确诊。

2.取粪便少许放于稀释液中取一些滴于胶体金试纸条上5 min 后可见2 条红线。

（五）病毒学检查

1.电镜检查：采病犬粪便，直接或加等量PBS后混匀，离心，上清液加等量氯仿振动，再如前处理一次。吸取上清液滴于铜网上，用2%磷钨酸负染后电镜检查。病初期可见大量均一直径20～22nm圆形和六边形散在病毒粒子。后期由于肠粘膜分泌性抗体出现，常可见大块聚集状态的病毒粒子，效果欠佳。

2.免疫胶体金电镜检查：将接种CPV 的FK18 细胞培养物经3次冻融，加入驴抗犬细小病毒混匀，离心，用蒸馏水或PBS 悬浮沉淀物。向抗原抗体免疫复合物中加入稀释的胶体金A蛋白液混匀，用蒸馏水或PBS充满管，离心。将沉淀物悬浮，负染，干燥后观察，可看到大量聚集的病毒粒子及抗体抗原免疫复合物和周围附有的免疫金颗粒。

3.免疫电镜检查：用对流免疫电泳方法对犬PCV免疫复合物中抗体进行检测。

病毒分离与鉴定：新疫区为了对流行毒株进行研究比较可采用此法。常用原代或次代犬胎肾或猫胎肾细胞培养物或它们的细胞系进行培养。最简便的病毒鉴定方法是接种3～5天后用荧光抗体检测细胞中的病毒或测定培养液中病毒的血凝性。

（六）血清学检查：常用血凝和血凝抑制试验。发病早期，可取病犬细胞培养物或粪便进行HA试验测病毒校价。用0.5%～1%猪红细胞作指示系统，HA＞1∶80可作为阳性感染指示标准。发病后期，由于IgM等抗体的出现，使CPV抗原失去血凝性，此时，用二巯基乙醇处理，便可检查到粪便中的IgM等抗体和CPV抗原。血凝抑制试验主要用于流行病学检查，也可用于检测粪便中的抗体。

（七）酶联免疫吸附试验：采用双抗体法，应用特制的酶标反应小管、板或纤维素膜。国内外已研制出多种试剂盒。如用CPV单克隆酶标抗体制成的CPV快速诊断盒，可在2h内检出粪便中的CPV抗原。

（八）PCR诊断技术：采用PCR试剂盒，简便、灵敏、特异，可检出微量CPV的DNA。

另外还可用荧光抗体试验、免疫扩散试验、核酸探针技术等法诊断本病。

六、预防

预防本病主要依靠注射疫苗和严格犬的检疫制度。目前国内使用的疫苗有同源的和异源的灭活苗和弱毒苗两类。异源苗是指猫泛白细胞减少症灭活苗或弱毒苗，安全可靠。国外多倾向使用犬细小病毒灭活苗或弱毒苗。国内多生产单苗、二联苗、三联苗和五联苗。一般幼犬于6～8周龄首免，灭活苗接种9次，间隔2～3周；弱毒苗接种1次，以后每年加强免疫1次。母犬则在产前3～4 周免疫接种。

新购进犬要问清防疫情况，隔离观察，确保无病后再混群饲养。未经免疫的犬应先注射犬细小病毒单抗和犬瘟热单抗，3周后再去接种疫苗，能起到很好地预防作用。

平时要加强饲养管理，提高抗病能力。在饲养方面，饲喂富有营养的饲料，提高犬的抗病力，减少疾病的发生。在管理方面，犬舍要做好清洁卫生工作，减少病原体的存在与传播，控制疫病的发生和流行。

畜主要做好定期检疫工作，一旦发现本病，应立即采取紧急隔离措施，固定饲养人员及工具，注意进行犬舍、用具及环境的彻底消毒，对犬舍和饲养用具用2%～4%烧碱液、1%福尔马林、0.5 %过氧乙酸反复消毒。对无治愈希望的病犬，应尽早捕杀，焚烧深埋。

七、治疗

本病早发现、早诊治效果理想，治愈率可达90%以上。犬龄越大，治愈越快，心脏功能低下者、脱水严重者多预后不良。以提高动物机体免疫功能，调节机体渗透压，防止脱水和继发感染为原则。

（一）增强免疫

早期大剂量应用抗犬细小病毒高免血清、单克隆抗体或球蛋白等生物制品可以中和体内病毒。高免血清用量为0.5～1ml/kg 体重，连用3～5天。使用单抗等2～5ml/kg，每天1次，连用3天以上。同时配合转移因子3～6万或胸腺肽5～10mg，每日或隔日1次，连用3～5次。使用犬细小病毒性肠炎免疫球蛋白治疗病犬治愈率高，平均达90.05%，尤其是小于3 月龄的幼犬，治愈率高达93.88%。

（二）合理补液

病犬常因剧烈呕吐、腹泻、脱水，造成机体电解质平衡紊乱并发酸中毒，引起机体衰竭而短期死亡，因此补液是关键。应根据脱水程度与全身状况，确定补液量和所需添加的成分。一般静脉补液量轻度脱水时为40～50ml/kg ，中度 50～80ml/kg ，重度 80～120ml/kg。

发生脱水的性质以低渗和等渗为主。初期多属低渗性脱水，补盐为主，补糖为辅，临床上以2份复方生理盐水，1份5%的葡萄糖为宜。酌情加入ATP、辅酶A、VC、肌苷等。中后期发生等渗性脱水，甚至休克，应补充等渗液或混合液（2∶2∶1）（2份生理盐水、2份GS，1份1.5%NaCO3）。发生休克时，应先用6%的右旋糖酐或代血浆20ml/kg静注，然后滴注2∶2∶1混合液，也可肌注地塞米松5～15mg。同时应注重补钾，采取少量，多次、慢速、不宜过早的原则，一般每天静注10%氯化钾5～10毫升 2～3 天。病犬后期伴有震颤、抽搐时，应考虑及时补钙，用10%的CaGS 1～2ml/kg+5%GS 20～40ml/kg 缓慢静注或滴注。恢复期组织细胞处于饥饿状态，机体低血糖，宜以25%GS、10%KCL、VC、VB6、肌苷、氨基酸等帮助肝功能的恢复和组织细胞的生成与释放。

在整个输液过程中，须掌握以下原则：缺什么补什么，缺多少补多少；先盐后糖，先快后慢；见尿补钾，见酸补碱，见惊补钙。

亦可采取腹腔补液，避免因静脉输液引起心肺负担加重，出现输液反应。一般犬的腹腔补液量80m1/kg体重为宜，临床上常用糖盐水150ml～1500ml、VC 注射液1000mg～3000mg 、地塞米松注射液6mg～20mg腹腔注入。VK3 注射液5ml～10Mi，林可霉素注射液60万～300万单位或用头孢唑林钠0.5g～0.6g，肌注。体温下降用肌苷2ml～8ml、樟脑磺酸钠注射液1ml～3ml、阿托品注射液3mg～20mg，8小时肌注1次。

（三）对症治疗

1.止吐：可选用阿托品和维生素B6等。应注意：当病犬胃肠空虚且便血时，不宜选用动力性止吐药，如胃复安、吗丁啉会加重胃肠炎出血症状，可选用使胃肠活动静息的止吐药，如爱茂尔、阿托品和氯丙嗪等。

2.止泻：主要着重于消炎。临床用于治疗的抗生素有氨基糖甙类、四环素类、喹诺酮类，共同特点是对最易引起肠炎的革兰氏阴性菌有抑制或杀灭作用。但当腹泻为出血性时，不宜选用氯霉素；伴有频繁呕吐时，不应选用对胃肠黏膜强刺激，易引起呕吐的土霉素和四环素；喹诺酮类的吡哌酸和氟哌酸疗效显著，但常因口服给药引起呕吐。因此，选用氨基糖甙类抗生素，肌肉或静脉注射较合理。对严重的肠道感染，可联合应用广谱半合成青霉素，及短期应用糖皮质激素。同时适时用药减缓肠蠕动，如与氨基糖甙类抗生素混合肌注阿托品或口服普鲁本辛、颠茄或复方苯乙哌啶等抗胆碱药。

3.止血：止胃肠出血常用止血药有：安络血、止血敏、维生素K3 、止血芳酸等。发病初期用安络血或止血敏，可降低毛细血管通透性、促使血小板释放凝血因子；中期可用VK3 ，促使血浆凝血因子的生成；后期用止血芳酸或氨甲苯酸，抑制纤维蛋白溶解。同时补充适量CaGS和维生素，可降低消化道黏膜通透性，提高疗效，促进损伤愈合。

（四）抑制病原与预防继发感染

以选用抗病毒药为主，如病毒灵、病毒唑等。同时，使用抗菌药如氨苄西林、庆大霉素等防止继发细菌感染。但不要长时间使用，以防肠道正常菌群失调，反而延缓肠道消化功能的恢复。

（五）辅助疗法

1.灌肠：因病犬的呕吐中枢反应灵敏, 口服用药一般不宜采用，可将药物灌肠吸收，对于应用肠道止血药效果更佳。可先用0.1%高锰酸钾溶液不保留灌肠,清洗肠内粪便和瘀血。然后用诺氟沙星、小儿泻痢停、鞣酸苦参碱胶囊、甲硝唑片、云南白药胶囊、安络血片碾成粉末混合加入止血敏注射液，口服补液盐水(ORS)中，应保留灌肠20分钟以上，使药液达到整个小肠。也可用白头翁汤合郁金散加减，水煎灌肠。每天1次，连用2～3次，具有良好的止泻、止血、消炎的效果。

2.输血疗法：采用相合血试验选择供血犬，取抗凝血10～15ml加入5%葡萄糖生理盐水和1支地塞米松一次静注，再作一般抗病毒治疗1～2天便可治愈不复发。因为输血可补充受血病犬的凝血因子，迅速刺激机体的造血机能，提高机体的免疫抗病力，所以起到了加快战胜病毒的效果。

（六）中医治疗

综合临床症状及病理变化，可将其病理病机概括为：湿热之毒内郁脾腑，侵入营血，伤脾耗血。第一病位是小肠，第二病位是心。小肠属脾，治疗当以调理脾腑运化水湿为基础，宣化清解湿毒为主，凉血益阴解血毒为辅。

1.药物治疗：发病初期为湿毒内郁，脾气受损。治疗以化湿解毒为主，辅以健脾理气、清热凉血。药用石菖蒲、木通、连翘、茵陈、生白术、白头翁、苦参、茜草、虎杖等。发病中期为湿毒拥盛，气机逆乱，毒入心营、耗血伤气。治疗宜化湿解毒清热、止呕、凉血、补阴益气。药用川连、苦参、飞滑石、玄参、双花、藿香、蛇舌草、穿心莲、生地、党参、虎杖、茜草、地榆、郁金、朱砂、紫草等。发病后期为阴竭阳脱、气阴两败。治疗用益阴回阳之法，宜重阴重阳兼以益气。用洋参附子汤一般可使危重病情得到缓解。在病犬精神、体力恢复后，再配以化湿解毒、益阴凉血之药调理，可参照黄连解毒汤、藿香正气散与炙甘草汤的组方适当加减，将三方化为一方用，可得良效。

2.针灸疗法：针灸脾俞、胃俞、三焦俞、大肠俞、关元俞、小肠俞、后海穴。