生殖器疱疹患者超氧化物歧化酶活力及自然杀伤细胞表达的检测

邹明华 李楚潮 刘腊凤 刘琼芬

生殖器疱疹(genital herpes，GH)是常见的性传播疾病之一，由I型单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus type 1，HSV-1)或Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)引起的一种性传播疾病，临床主要由HSV-2感染引起［1］。GH发病率逐年增高，易反复发作，给患者和社会带来沉重的心理和经济负担［1，2］。GH的发病机制尚未完全清楚，有研究显示HSV病毒感染机体后，引发机体的细胞免疫紊乱及氧化应激状态失衡，主要是T细胞水平表达低下、Th细胞及Tc细胞分化偏态［2，3］。本研究探讨GH患者氧化应激状态与细胞免疫水平，以探讨GH的发病机制，可用于指导GH的治疗、判断预后。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集24例GH患者，所有患者来自我院2010年8月至2011年1月性病科门诊，诊断符合2000年我国卫生部疾病控制司和全国性病麻风病控制中心联合颁布的GH诊断标准。24例GH患者中男16例，女8例，年龄18～40岁(平均23.6岁)，病程2 d～2年，平均病程10.1个月。患者就诊前3个月内均未系统性应用免疫抑制剂、免疫调节剂、皮质类固醇制剂。收集24例健康体检者作为正常对照，其中男14例，女10例，年龄18～36岁(平均22.9岁)，患者与健康对照者年龄、性别差异无统计学意义。

1.2 实验方法

1.2.1 SOD的检测 早晨空腹肘静脉取血2 ml，分离血清待测。采用透射比浊法，SOD标准试剂合由南京建成生物研究所提供，检测方法参照试剂说明书和文献进行［3］。

1.2.2 NK细胞表达的流式细胞术分析 取GH患者肝素抗凝血100 ul，加入淋巴细胞检测试剂25 ul，混匀，室温避光染色20 min;加入2 ml红细胞裂解液，室温避光放置10 min;1500 r/min离心5 min弃上清液，加磷酸盐缓冲液(PBS)2 ml，混匀;1500 r/min离心5 min弃上清液，加2%多聚甲醛PBS 500 ml固定，放置4℃ ～8℃冰箱待检测。每管加细胞液100 μl，加入 10 μl抗 CD4 mAb-PerCP，温室避光放置 15 min;红细胞溶解液0.5 μl溶解红细胞15 min;破膜剂I、II固定和破膜;加PBS3 ml，1200 r/min离心5 min，弃上清;加细胞因子抗体，每份标本分别加同型对照IgG1-FITC;温室避光放置15 min;加 PBS 4 ml，1200r/min;离心 10 min，弃上清;适量 PBS重悬细胞上流式细胞仪检测;每份标本检测1万个细胞结果经Cell Quest功能软件进行参数获取和数据分析。

1.3 统计学方法 采用SAS 8.01统计软件进行统计学分析，组间比较方差分析后采用t检验，以P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

GH患者SOD活力明显低于健康对照组(t=-4.14，P=0.0001);NK细胞的水平明显低于健康对照组(t=-2.67，P=0.0133)(见表1);SOD活力与NK细胞表达无显著相关性(r=-0.02566，P=0.9170)。

表1 GH患者SOD活力与NK细胞表达

3 讨论

SOD是组织细胞中清除自由基的主要预防系统，活力反映了机体清除氧自由基的能力，对有害的超氧阴离子自由基产生特异的歧化反应，阻止自由基攻击核酸、蛋白质、不饱和脂肪酸等生物大分子，使之发生交联或断裂，保护细胞免于损伤［4，5］。SOD与产生的自由基发生歧化反应，保护组织细胞免受损伤;而信息蛋白迅速传递信息，反馈到控制SOD表达的基因快速作出应答，产生足量的SOD，以满足组织细胞代谢的需要，当这种异常的应答一旦长时间的存在下去，必然要导致组织细胞内代谢失去平衡，导致细胞发生异变。NK细胞是机体免疫系统的重要免疫细胞，是抗病毒感染的第一道防线［4，5］。在免疫过程中，NK细胞的存在决定着细胞毒性T淋巴细胞体细胞向成熟细胞毒性T淋巴细胞的分化并且控制着记忆T细胞的形成。MHC-I类分子将感染HSV的细胞首先呈递给NK细胞，NK细胞直接而迅速地杀灭病毒［2］。最近的研究显示GH患者外周血NK细胞数量减少;此外，患者皮损内HSV-2病毒载量与NK细胞水平呈显著的负相关［6］，提示NK细胞活性减低，抗病毒作用减弱，抑制T淋巴细胞的增殖。癌症患者NK细胞活性降低，SOD与过氧化氢酶协同能够恢复患者的NK细胞活性［7］。

本研究旨在探讨GH患者SOD与过氧化氢酶协同能否恢复患者的NK细胞活性，提高患者的免疫水平。研究结果显示，GH患者外周血中SOD活力明显减低，可能与HSV感染消耗了抗氧化物SOD，造成了机体的氧化应激失衡。GH患者NK细胞数量明显低于正常人群，但SOD活力与NK细胞数无显著相关性，可能与HSV病毒感染属于局限性，未引起全身性炎症反应有关，本研究结果与易勤等人［7］报道的结果基本一致。提示GH患者存在氧化应激状态失衡、细胞免疫抑制，抗病毒作用减弱现象;在治疗上除了给予抗病毒治疗，同时给予免疫增强剂和抗氧化剂能有效地降低GH的复发率。

［1］周文泉，桑红.生殖器疱疹的流行病学和诊治进展.中华男科学，2003，9(8):611-618.

［2］林路洋，李常兴，曹开源，等.单纯疱疹-II型病毒感染的皮损部位病毒载量与外周血Th及Tc的相关性研究.中国热带医学杂志，2009，9(9):994-997.

［3］季健平，吴再彬，刘歧山，等.超氧化物歧化酶超微量测定法.南京铁路医学院学报，1991，10(1):27.

［4］马玉玲，张培菊，李士玉.肝病患者血清LPO SOD检测结果分析.济宁医学院学报，1998，21(2):43-44.

［5］史天良，刘维兰，韩小友，等.焦化工人癌症高发与超氧化物歧化酶异常的研究.肿瘤研究与临床，2000，12(2):101-102.

［6］林路洋，李常兴，武明昌，等.生殖器疱疹患者皮损HSV-2病毒载量与外周血细胞免疫功能的关系.岭南皮肤性病科杂志，2008，15(6):327-331.

［7］易勤，张谊芝，张敏.生殖器疱疹患者氧化应激与细胞免疫状态的研究.四川大学学报(医学版)，2006，37(1):150-151.