血清DcR3水平与胃癌的关系

林尤恩 刘祖宏 陈尤佳 郑赵利 (揭阳市人民医院化疗介入科，广东 揭阳 5000)

诱捕受体3(decoyreceptor3，DcR3)是最近研究发现的一类肿瘤坏死因子受体 (TNFR)，某些蛋白配体与DcR3特异性结合后，导致配体不能够与死亡受体结合，促使肿瘤细胞不能诱导凋亡〔1〕。研究发现，人类多种恶性肿瘤与DcR3蛋白的表达有关。关于DcR3在胃癌的表达，国内外研究比较少，且多采用免疫组化法〔2〕。本研究采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测患者血清DcR3的水平，探讨DcR3与胃癌增殖、发生和转移关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2009年1月至2010年12月我院收治经病理组织学检测确诊的胃癌患者70例作为研究组，男性42例，女性28例，年龄24～76岁，平均(52.4±16.7)岁，＞60岁43例，＜60岁的27例。肿瘤＞5 cm 39例，＜5 cm 31例。胃癌诊断按照2000年WHO分类标准分为低分化腺癌28例、印戒细胞癌6例、黏液腺癌12例定义为低分化组;管状腺癌24例定义为高分化组。无淋巴结转移42例，有淋巴结局部转移28例。临床分期按照2002年美国肿瘤联合会(AJCC)制定的TNM分期法分为Ⅰ期13例，Ⅱ期26例，Ⅲ期21例，Ⅳ期10例。另选择正常健康体检人群65例，年龄25～75岁，平均(51.3±15.6)岁。

1.2 方法 对所有患者检测DcR3。检测的方法:所有患者入院后次日，空腹采外周静脉血5 ml，室温静置取上层血清，分装在－80℃冰箱冷冻备用。ELLSA法检测Human DcR3 ELISA试剂盒购自上海研鑫生物科技有限公司。实验步骤严格按照试剂盒说明书进行操作。按比例配制试剂稀释液、洗涤缓冲液等，倍比稀释标准蛋白，按顺序将已稀释的血清样本和各浓度标准蛋白分别加入对应孔中，滴入生物素-结合物，室温孵育120 min，洗板后滴入抗生物素蛋白链菌素-辣根过氧化物酶，室温孵育60 min，洗板，加入四甲基联苯胺，室温避光10～20 min，加入终止液，以630 nm和450 nm双波长用酶标仪测量吸光值，根据标准曲线，计算出各样本孔浓度值，乘以稀释倍数测出所有患者血清DcR3水平〔3〕。

1.3 统计学分析 采用SPSS 17.0统计学软件。计量资料以±s表示，采用t检验;计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1 研究组和对照组血清DcR3的比较 胃癌患者血清DcR3〔(183.43±78.45)pg/ml〕的水平显著高于正常人〔(116.65±97.43)pg/ml〕，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 胃癌患者血清DcR3与胃癌相关因素的关系 胃癌患者血清DcR3与肿瘤患者TNM分期、淋巴转移与分化程度密切相关(P＜0.05);与年龄、性别及肿瘤大小不相关(P＞0.05)。见表1。

表1 胃癌中DCR3的表达与病理因素的关系

3 讨论

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率比较高，目前公认的胃癌的治疗方法为手术治疗，但研究表明术后5年生存率仅为55%左右，胃癌患者治疗失败的主要原因是肿瘤的转移和浸润〔4，5〕。胃癌组织结构、细胞形态和生物学行为比较复杂，组织学分型也比较多〔6〕。目前临床上术前依靠腹部超声、CT、X线钡餐等影像学以及纤维胃镜检查诊断淋巴结和临近脏器转移及肿瘤浸润深度，但是准确率并不高，大多数患者仅仅在术后通过病理学检查证实。组织病理学检查作为肿瘤诊断的重要手段，但是其存在有一定的主观性〔7，8〕。对于胃癌早期诊断，目前缺少有效的检测方法。

DcR3为肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族新成员，与TNFR基因超家族成员有同源性的表达序列标签，能和肿瘤坏死因子超家族成员Fas配体、TLlA以及LIGHT相结合，抑制其与受体LTβR和HVEM/TR2的特异性结合，对它们介导的细胞凋亡起负调控的功能。DcR3由271个氨基酸组成。由于缺乏跨膜序列，因此属于分泌性蛋白分子〔9～11〕。一方面DcR3可以与凋亡因子FasL特异性结合，使恶性肿瘤细胞避免FasL依赖的细胞毒作用，从而阻断肿瘤细胞凋亡。已有研究表明，DcR3基因无论在基因水平还是在蛋白水平，在许多恶性肿瘤均出现过度表达，而在正常组织 DcR3的表达较少〔12，13〕。也有研究证实以DcR3为靶点，制作DcR3反义RNA、DcR3中和抗体、DcR3疫苗等方法，通过降低血清DcR3的表达来阻止肿瘤细胞的增殖，也从另一个方面表明了DcR3可能在肿瘤的发生发展过程中起重要作用〔14〕。

本组研究可见，胃癌患者血清DcR3的水平显著高于正常人，可见血清DcR3对于胃癌诊断存在比较重要的意义。

本组研究证实，TNM分期高、淋巴转移和低分化癌患者具有较高的血清DcR3水平，而年龄大小、性别及肿瘤大小血清DcR3水平表达差异不大。反映了当胃癌病情加重的情况下，血清DcR3是增高的。提示DcR3表达水平可能与肿瘤的恶性程度有关。对胃癌患者检测血清DcR3水平，可以作为肿瘤切除是否复发、是否转移、是否彻底的有效理论依据，进而判断胃癌的恶性程度、病情进展。通过检测血清DcR3水平，可以对患者更准确地进行TNM分期提供理论依据。

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