厄贝沙坦联合缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

毕艳颖 (长春中医药大学附属医院，吉林 长春 130021)

缺血后处理具有缩小心肌梗死面积、保护冠状动脉内皮功能及减轻缺血心肌炎症反应等与缺血预处理相似的心脏保护作用〔1〕。厄贝沙坦是近年临床广泛应用的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体(AT1)拮抗剂(ARB)，抑制AngⅠ与AT1受体结合的IC50分别为0.9 nmol/L与5.5 nmol/L，而且高达10 nmol/L时对AT2仍无抑制作用，对心率、醛固酮无影响〔2〕。本研究采用在体大鼠结扎冠状动脉前降支30 min，再灌注4 h制备实验性心肌缺血再灌注损伤模型，观察厄贝沙坦联合缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 40只Wistar大鼠，雌雄各半，体重240～260 g。

1.1.2 药品及试剂 厄贝沙坦，南京长澳制药有限公司，实验时以0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度;氯化硝基四氮唑蓝(NB-T)由上海前进试剂厂生产;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;6-酮-前列腺素 F1α(6-Keto-PGF1α)放免药盒及血栓素B2(TXB2)放免药盒由中国人民解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。

1.2 方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、厄贝沙坦组、厄贝沙坦与缺血后处理联合作用组(联合组)，每组10只。厄贝沙坦组于结扎后立即给药，联合组结扎后立即给药，阻断 30 min，再通 30 s，阻断 30 s，重复 3 次，再灌注 4 h;假手术组及模型组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠。大鼠冠脉结扎按文献〔3〕方法稍加改进，在乙醚麻醉下仰位固定于手术台，自左侧3～4肋间开胸，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房间找出冠脉左前降支，除假手术组仅穿线不结扎外，其余各组均以0号线立即结扎冠脉，结扎时用一细小乳胶管垫于血管与结扎线之间，将心脏送回胸腔，并挤出胸腔内血液和气体，迅速关闭胸腔，开胸时间不超过30 s。各组动物在结扎30 min后松解结扎线进行再灌注，再灌注4 h后，以戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉，每组动物腹主动脉插管取血，通过7150型生化自动分析仪(日本)检测血清天冬酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性;按试剂盒方法测血清MDA含量，SOD、GSH-Px活性;用放免法〔4〕测血浆前列环素(PGI2)和TXA2的代谢产物6-Keto-PG F1α和TXB2水平;腹主动脉取血 1.5 ml，以 109mmol/L枸橼酸钠抗凝。1 500 r/min离心 5 min，取上层富血小板血浆(PRP)，余血3 000 r/min离心10 min，取贫血小板血浆(PPP)，用PPP调PRP至血小板数6×1011/L～7×1011/L。取血后剖取大鼠心脏，用生理盐水洗净心腔内积血，去掉心房组织及脂肪，称重，将左心室心肌横切4～5片，然后浸入氯化硝基四氮唑蓝(NB-T)磷酸缓冲液中，置37℃恒温水浴，待染色完全后取出，正常组织染色，缺血组织不染色。切下缺血心肌称重，用缺血心肌与左心室湿重的百分比计算心肌梗死范围(MIS)。

1.3 统计学方法 应用SPSS 13.0统计软件进行分析，数据资料以s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 实验性心肌缺血再灌注损伤大鼠MIS及心肌酶学变化 与假手术组相比，模型组大鼠的MIS及AST、LDH、CK-MB均显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，厄贝沙坦组与联合组可见大鼠的MIS明显缩小(P＜0.01)，血清AST、LDH及CK-MB活性明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。与厄贝沙坦组比较，联合组大鼠的MIS及血清心肌酶学均无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

2.2 实验性心肌缺血再灌注损伤大鼠血清 MDA、SOD及GSH-Px变化 与假手术组相比，模型组血清 MDA含量、GSH-Px活性明显增加，而SOD明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。与模型组比较，厄贝沙坦组与联合组均可见血清MDA含量显著降低(P＜0.05)，SOD活性显著提高(P＜0.05，P＜0.01)。与厄贝沙坦组比较，联合组血清MDA含量及SOD及GSH-Px活性均无显著性差异(P＞0.05)。见表2。

表1 四组MIS及心肌酶活性变化(n=10s)

表1 四组MIS及心肌酶活性变化(n=10s)

与假手术组比较:1)P＜0.05，2)P＜0.01;与模型组比较:3)P＜0.05，4)P ＜0.01;下表同

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表2 四组氧化应激指标的变化(n=10±s)

表2 四组氧化应激指标的变化(n=10±s)

组别 MDA(CB/nmol/L)SOD(ρB/mg/L)GSH-Px(λB/U/ml)假手术组6.06±1.5 269.3±29.4 43.5±10.3模型组 8.6±2.32) 224.0±25.12) 56.1±14.91)厄贝沙坦组 6.2±1.93) 262.0±35.03) 44.4±8.83)联合组 6.2±1.73) 264.3±26.94) 39.1±14.93)

2.3 实验性心肌缺血再灌注损伤大鼠血浆PGI2及TXA2变化 与假手术组相比，模型组血浆TXA2水平明显升高，PGI2水平及PGI2/TXA2比值明显降低(P＜0.05，P＜0.001)。与模型组比较，厄贝沙坦组与联合组均可见血浆TXA2水平显著降低(P＜0.05，P＜0.01)，血浆 PGI2水平及 PGI2/TXA2比值显著提高(P＜0.05，P＜0.01)。与厄贝沙坦组比较，联合组血浆TXA2和 PGI2水平及 PGI2/TXA2比值均无明显变化(P＞0.05)。见表3。

表3 各组血浆PGI2及TXA2变化(n=10±s)

表3 各组血浆PGI2及TXA2变化(n=10±s)

组别 PGI2(ρB/ng/L) TXA2(ρB/ng/L) PGI2/TXA2假手术组458.1±86.20 185.7±20.7 2.5±0.6模型组 344.5±52.42) 267.8±36.11) 1.3±0.32)厄贝沙坦组 400.6±57.73) 223.0±51.53) 1.9±0.63)联合组 403.4±58.73) 207.2±27.24) 2.0±0.44)

3 讨论

急性心肌梗死日益威胁着人类的生命，其主要的治疗方法为梗死相关动脉的再灌注即急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)，但有时缺血心肌的再灌注损伤可能会抵消PCI所达到的效果。有研究表明，心肌缺血再灌注损伤会进一步加大MIS，其心功能障碍程度比急性心肌梗死还严重，病死率更高〔5〕。心肌酶存在于细胞质中，当心肌缺血再灌注损伤时细胞坏死，造成心肌细胞各种酶释放入血。因此，血清CK-MB、LDH及AST的活性测定可用来判断心肌缺血再灌注损伤程度及药物抗心肌缺血再灌注损伤疗效和预后的指标之一。本实验表明，厄贝沙坦及联合组能明显缩小心肌缺血再灌注损伤大鼠的MIS，降低血清CK-MB、LDH及AST活性，证实其对缺血再灌注心肌具有明显保护作用。但是厄贝沙坦组和联合组的作用无统计学差异。

氧化应激是心肌缺血再灌注损伤的主要机制之一〔6〕。MDA是氧自由基引发脂类过氧化反应的产物，其含量反映氧自由基水平和脂质过氧化的强度和速度，是了解氧自由基致机体组织细胞损伤的重要指标之一。机体存在抗氧化防护系统，SOD及GSH-Px是主要的内源性抗氧化酶，可减少氧自由基的生成。因此可以通过MDA含量及SOD、GSH-Px活性变化评定心肌缺血再灌注损伤的程度及药物作用的机制〔7〕。本实验表明，厄贝沙坦及联合组能明显降低血清MDA含量，升高SOD活性，提示其可通过某种机制使脂质过氧化过程受到抑制，同时又能提高内源性抗氧化酶活性而减轻氧自由基对心肌的损伤，但是厄贝沙坦组和联合组的作用无显著差异。

心肌缺血再灌注损伤时，动脉内皮受损，循环血液中的血小板黏附在损伤部位，致使PGI2合成受干扰，进一步释放以TXA2为主的缩血管物质，从而导致平衡失调。PGI2和TXA2的平衡是维持正常血小板功能、血管张力以及保护内皮细胞免受损伤的重要环节。因此，TXA2与PGI2的平衡失调可能是心肌缺血或心肌坏死的主要原因之一〔8，9〕。本实验表明，厄贝沙坦组和厄贝沙坦与缺血后处理联合应用可明显降低血浆TXA2水平，增高PGI2水平及PGI2/TXA2比值，提示其可能通过纠正PGI2/TXA2失衡发挥抗心肌缺血再灌注损伤，但是厄贝沙坦组和厄贝沙坦与缺血后处理联合应用的作用无统计学差异。

1 Zhao ZQ，Corvera JS，Halkos ME，et al.Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion:comparison with ischemic preconditioning〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2003;285(2):579-88.

2 赵学忠.福辛普利与厄贝沙坦对大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤及心室重构的对比研究〔D〕.吉林大学博士论文，2000.

3 睢大员，曲绍春，于小风，等.刺五加叶皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用〔J〕.中国中药杂志，2004;29(1):71-4.

4 赵艳威，于小风，徐华丽，等.人参果皂苷注射液对高脂血症大鼠血脂代谢的影响〔J〕.吉林大学学报:医学版，2005;31(3):407-10.

5 王 天，徐华丽，曲绍春，等.碟脉灵注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用〔J〕.吉林大学学报:医学版，2006;32(1):78-81.

6 Valko M，Leibfritz D，Moncol J，et al.Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease〔J〕.Int J Biochem Cell Biol，2007;39(1):44-84.

7 王 丽，赵学忠，于晓凤，等.重组人脑利钠肽对大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤的保护作用〔J〕.中国老年学杂志，2010;30(6):813-5.

8 黄漫翔，婓 红，林万莲.葛根素对心血管系统作用的研究进展〔J〕.广东药学，2000;10(2):9-12.

9 罗 伟，李保东，杨瑞华，等.葛根素对高血压患者血浆内皮素及血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α含量的影响〔J〕.中国中西医结合杂志，2000;20(1):68-9.