乙酰唑胺促卵巢癌细胞的凋亡作用

王艳丽 朱继红 从云凤 张小猛 王霁雪 刘 姝 (吉林大学第一医院妇产科，吉林 长春 3002)

卵巢癌常伴有腹水的发生，卵巢癌的发生、发展、转移可能与水通道蛋白(AQP)有关，其中AQP-1与多种疾病的发生和发展密切相关〔1〕。AQP-1与卵巢肿瘤的关系国内外至今报道很少。本实验主要观察AQP抑制剂乙酰唑胺是否对卵巢癌细胞有抑制作用。

1 资料与方法

1.1 主要试剂 IMDM培养液，Hanks液，乙酰唑胺，磷酸盐缓冲液(PBS)，青霉素钠，硫酸链霉素，胎牛血清均购自Sigma公司;人卵巢癌细胞株由大连医科大学馈赠。

1.2 方法 将培养好的卵巢癌细胞调整浓度到1×105/ml，分成实验组3瓶和对照组1瓶，每3 d换液一次，待细胞生长到对数期，实验组3瓶更换成乙酰唑胺浓度分别为1×10－8mol/L、5×10－8mol/L、10×10－8mol/L 的培养液，对照组培养液不变，分别收集24、48、72 h的细胞，用预冷的70%乙醇固定，调整细胞浓度1×106/ml，碘化丙啶(PI)染色，进行流式细胞仪检测。每组重复3次。

1.3 统计学分析 应用SPSS10.0统计软件进行分析，结果数据以表示，采用单因素方差分析进行比较。

2 结果

对照组和3个不同浓度乙酰唑胺实验组分别于24、48、72 h检测细胞凋亡率，重复3次。①与对照组比较，不同浓度实验组细胞凋亡率均增加，且随着药物浓度增加，细胞凋亡率也在增加，差异有显著性(P＜0.05)。②各实验组间比较，差异均有显著性(P＜0.05)。③随着时间增加，对照组和实验组所有的细胞凋亡率增加，24 h与48 h之间，24 h与72 h之间，48 h与72 h之间，差异均有显著性(P＜0.05)。见表1。

表1 对照组和各实验组的细胞凋亡率(，%)

表1 对照组和各实验组的细胞凋亡率(，%)

与对照组比较:1)P＜0.05;与1×10－8/L组比较:2)P＜0.05，与5×10－8/L组比较:3)P＜0.05;与24 h比较:4)P＜0.05;与48 h比较:5)P＜0.05

2.86±0.19 3.72±0.23 5.28±0.89 1×10－8/L组 12.82±1.211) 21.52±1.551)4) 30.63±2.141)4)5)5×10－8/L组 17.88±1.171)2) 39.89±3.151)2)4)51.66±3.821)2)4)5)10×10－8/L组__21.93±4.011)2)3)52.02±2.491)2)3)4)73.05±2.641)2)3)4)5)24 h 48 h 72 h对照组_____组别

3 讨论

1988年Agre等首次发现AQP-1，1997年正式命名。多种肿瘤组织亦表达AQP-1，其可能与肿瘤细胞的起源、生长、转移等密切相关〔1～3〕。在微血管内皮细胞也发现AQP-1高度表达，推测AQP-1高表达也可能与肿瘤血管新生有关〔4，5〕。

在目前发现的AQP中AQP-1是唯一表达于肾脏近曲小管上皮细胞的AQP，对尿液浓缩和稀释过程起重要作用〔6〕。至今仍未发现AQP-1特异的调节剂。碳酸酐酶抑制剂是唯一的一类作用于肾脏近曲小管的利尿剂，乙酰唑胺是其中应用最广泛的一种。由于其作用位点与AQP-1的组织分布一致，考虑乙酰唑胺抑制肿瘤转移的作用系下调AQP-1表达所致。

乙酰唑胺通过下调AQP-1表达可以抑制肿瘤细胞侵袭能力和转移。有研究将不同浓度乙酰唑胺应用于荷瘤肺癌模型小鼠，观察乙酰唑胺对肿瘤转移的影响，测定转移瘤与小鼠体重和肺重比率及转移瘤的数量，并利用肽质量指纹谱分析证实荷瘤小鼠肺组织中AQP-1蛋白水平显著高于正常组织;采用乙酰唑胺治疗后，AQP-1表达明显降低，显著抑制肿瘤转移，肺转移抑制率为83.9%。免疫组织化学定位也证实AQP-1在小鼠肿瘤毛细血管和小静脉内皮细胞上表达，用乙酰唑胺治疗后毛细血管和小静脉内皮细胞上AQP-1表达明显减少〔7〕。

细胞凋亡是在细胞内外各种信号刺激下，激活细胞自身自杀程序而引起的。有学者发现细胞死亡是最早使细胞内水经水通道外溢的事件，推测AQPs的功能与细胞凋亡有密切关系〔8〕。本实验采用流式细胞分析仪检测卵巢癌细胞的凋亡率，对细胞凋亡进行定量观察。本实验结果显示，应用乙酰唑胺的各实验组，细胞凋亡率均明显增加，且随着乙酰唑胺药物浓度增加，细胞凋亡率也在增加;随着时间增加，细胞凋亡率也增加。证明乙酰唑胺对体外培养的卵巢癌细胞的AQP-1有抑制作用，且与时间、浓度有关〔9〕。本实验与此研究结果相同。

本实验运用流式细胞仪方法证实乙酰唑胺可以抑制体外培养的卵巢癌细胞的增殖，推测应用AQP抑制剂可以抑制肿瘤生长、侵袭和转移，至少可能部分抑制肿瘤的生长、侵袭和转移，希望为卵巢癌的临床治疗提供新的思路和方法。

1 Moon C，Soria JC，Jang SJ，et al.Involvement of aquaporins in colorectal carcinogenesis〔J〕.Oncolgene，2003;22(43):6699-703.

2 Mobasheri A，Airley R，Hewitt SM，et al.Heterogeneous expression of the aquaporin 1(AQP1)water channel in tumors of the prostate，breast，ovary，colon and lung:a study using high density multiple human tumor tissue microarrays〔J〕.Int J Oncol，2005;26(5):1149-58.

3 Yang JH，Shi YF，Cheng Q，et al.Expression and localization of aquaporin-5 in the epithelial ovarian tumors〔J〕.Gynecol Oncol，2006;100(2):294-9.

4 Verkman AS.Aquaporin water channels and endothelial cell function〔J〕.J Anat，2002;200(6):617-27.

5 Polverini PJ.Angiogenesis in health and disease:insights into basic mechanisms and therapeutic opportunites〔J〕.J Dent Educ，2002;66(8):962-75.

6 Zhang R，Skach W，Hasegawa H，et al.Cloning functional analysis and cell localization of a kidney proximal tubule water transpoter homologous to CHIP 28〔J〕.J Cell Biol，1993;120(2):359-69.

7 Xiang Y，Ma B，Li T，et al.Acetazolamide suppresses tumor metastasis and related protein expression in mice bearing Lewis lung carcinoma〔J〕.Acta Pharmacol Sin，2002;23(8):745-51.

8 Jablonski EM，Webb AN，McCaonnell NA，et al.Plasma membrane aquaporin activity can affect the rate of apoptosis but is inhibited after apoptotic volume decrease〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol，2004;286(4):975-85.

9 母生梅，暨荀鹤，马 兵，等.乙酰唑胺对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞作用的差异蛋白分析及其与AQP1抑制的关系〔J〕.药学学报，2003;38(3):169-72.