子宫内膜癌组织中YKL-40、NF-κ B的表达及临床意义

陈丽平,卢 丹,孔 祥

(1.川北医学院附属医院妇产科,四川南充,637000;2.扬州大学临床医学院妇产科 ,江苏扬州,225001)

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的上皮恶性肿瘤,子宫内膜样腺癌占80%～90%[1-2],子宫内膜癌的病因目前不是完全清楚,其发生、发展是一个多因素和多个基因变异的复杂过程[3]。YKL-40(甲壳质酶蛋白40)又名人类软骨糖蛋白,属于哺乳动物18糖基水解酶家庭成员之一,近来研究发现YKL-40在肿瘤细胞的生长、侵袭和转移起重要作用[4-8]。核转录因子NF-κ B是一种多向性、多功能的核转录因子,可调控细胞凋亡、增殖的相关基因,在细胞癌变过程中发挥重要作用[10-13]。作者采用免疫组化的方法检测子宫内膜癌组织中YKL-40和NF-KB的表达情况,并比较其与临床病理特征的关系,探讨YKL-40和NF-κ B在子宫内膜癌发生、发展中的作用及相关性。

1 材料和方法

1.1 材料

收集2002年1月～2007年12月间临床病理子宫内膜样腺癌患者石蜡包埋标本65例,患者在术前均未接受化疗、放疗或其他抗肿瘤治疗,标本均来源于江苏省苏北人民医院,由妇产科病理专家复审病理诊断。患者年龄42～70岁,平均53岁。正常子宫内膜标本40例,收集同期因子宫良性肿瘤而行子宫全切(或子宫次全切)的患者或行诊断性刮宫的患者的标本。患者年龄36～54岁,平均43岁。兔抗人YKL-40单克隆抗体购自美国Quidel公司,鼠抗人 NF-κ B-P65均购自北京中山生物技术有限公司。

1.2 方法

上述标本经10%福尔马林固定,通过常规石蜡包埋,4 μ m连续切片,采用免疫组织化学二步法检测YKL-40、NF-κ B-P65。以PBS代替一抗做阴性对照,用已知 YKL-40和NF-κ BP65染色阳性的胶质母细胞瘤组织为阳性对照。

1.3 结果判定

YKL-40:YKL-40蛋白定位于细胞浆,以细胞浆出现黄色颗粒染色为阳性细胞。NF-κ B/P65:NF-κ B/P65蛋白定位于细胞浆和(或)细胞核,以细胞浆和(或)细胞核出现黄色颗粒为阳性细胞。YKL-40和NF-κ B/P65采用统一的染色积分评价标准:根据染色细胞百分率及染色强度进行分析评定。①染色强度:棕褐色为3分,棕黄色为 2分,浅黄色为 1分,基本不着色为0分。②阳性细胞细胞占计数细胞的百分率:>75%计4分,50%～75%计3分,26%～50%计2分,6%～25%计1分,≤5%计0分。

2 结 果

2.1 YKL-40和NF-κ B-P65在正常子宫内膜和子宫内膜癌中的表达

在正常子宫内膜中YKL-40的阳性率为32.5%(13/40),在子宫内膜癌中YKL-40的阳性率76.9%(50/65),2组比较差异有显著意义(P<0.01),NF-κ B/P65在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中的阳性表达率分别30%(12/40)和73.8%(48/65),2组比较差异存在显著性意义(P<0.01)。

2.2 YKL-40、NF-κ B-P6的表达与子宫内膜癌临床病理特征

YKL-40、NF-κ B-P65阳性表达率与组织学分级程度有关(P<0.05),而与子宫内膜癌患者的临床分期、肌层浸润、淋巴结转移、年龄均无明显相关性,见表1。

表1 YKL-40、NF-κ B-P65与子宫内膜癌临床病理特征的关系

3 讨 论

YKL-40属于哺乳动物甲壳质酶样蛋白成员,最早是在非泌乳期牛的乳汁分泌物中发现[14-15]。最初对YKL-40的研究主要集中在骨关节炎、类风湿性关节炎等炎症性关节疾病上。近年来研究发现其与恶性肿瘤联系密切。YKL-40可以由多种人体肿瘤细胞分泌和表达,其中包括骨肿瘤、乳腺癌、大肠癌、脑肿瘤、肺癌、前列腺癌、恶性胶质细胞瘤、卵巢癌、子宫恶性肿瘤和胰腺癌等[14]。通过对健康妇女、妇科良性疾病患者及子宫内膜癌患者血清YKL-40的测定得出结论,血YKL-40可作为诊断早期子宫内膜癌及高风险人群患者预后不良判定的新的肿瘤指标,而且其独立于CA125、CA153等常用的肿瘤标专物,国此作者认为YKL-40在恶性肿瘤的诊断、预后、复发、病情监测等方面有重要作用[15]。

NF-κ B是介导细胞内信号传递最重要的核转录因子,最常见的二聚体是P50/RelA(p65)异源二聚体,几乎存在于所有的真核细胞中[16]。作为信号传导途径中的枢纽,能与炎症反应、细胞分化和生长、调控免疫应答、细胞粘附和凋亡所必需的许多细胞因子、粘附分子等基因启动子或增强子部位的κ B位点发生特异性结合,启动和调节这些基因的转录、表达。近来发现其活性在不同的肿瘤细胞类型、不同化疗药物作用等因素显示不同,可能在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用。在人类肝癌[17]、膀胱癌[18]、肾癌[19]等多种肿瘤中发现有持续NF-κ B激活的现象,提示NF-κ B在细胞恶变过程中起着重要作用。

本实验应用免疫组化检测YKL-40和NF-κ B蛋白在正常子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达情况。通过实验证实,YKL-40在正常组织中低表达,而在子宫内膜癌组织中高表达,NF-κ B-P65在内膜癌组织中阳性表达率明显高于正常内膜。在正常子宫内膜YKL-40蛋白与NF-KB-P65表达无相关关系,但在子宫内膜癌中NF-κ B-P65与YKL-40表达呈正相关,表明NF-κ B在子宫内膜癌YKL-40的表达中可能起着重要的作用,NF-κ B可能调控YKL-40的过表达,至少部分是由NF-κ B调控的。在各种致癌因素作用下,激活的NF-κ B由胞浆进入核内,结合 YKL-40启动子上的NF-κ B结合位点,与其他DNA结合蛋白一起上调YKL-40的表达,引起凋亡失衡、细胞增殖等系列变化。但最近在恶性胶质瘤中的研究发现,NF-κ B是YKL-40的负性调节剂,其与NF-κ B具有显著的负相关系,在软骨肉瘤中两者具有显著的正相关关系,这都说明了YKL-40的调节的复杂性,是多种因子相互调节的结果[10,20-21]。

对于子宫内膜癌发生、发展中YKL-40及NF-κ B的作用,对于YKL-40及NF-κ B在子宫内膜癌高表达的机制、相关的信号传导途径的研究将有助于揭开子宫内膜癌发生机制,并可以发现更多的治疗靶点,从而有利于为子宫内膜癌者选择个体治疗方案。

[1] 乐 杰.妇产科学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2008:298.

[2] 连利娟.林巧稚妇科肿瘤学[M].第三版.北京:人民卫生出版社,2001:356.

[3] Zelmenowicz A,Hildesheim A,Sherman M E,et al.Evidence for a common etiology for endometrial carcinomas and malignant mixed mullerian tumors[J].Gynecol Oncol,1998,69(3):253.

[4] Qin W,Zhu W,Schlatter L,et al.Increased expression of inflammatory protein YKL-40 in precancels of breast[J].Int J Cancer.2007,121(7):1536.

[5] Nanna Junkera Julia S,JohansenbClaus B,Andersenc Paul E.G.Kristjansena.Expression of YKL-40 by peritumoral macrophages in human small cell lung cancer[J].Science Lung Cancer,2005,48(2):223.

[6] Mine Kucur,Ferruh KIsman,Can Balc,et al.Serum YKL-40 levels and chitotriosidase activity as potential biomarkers in primary prostate cancer and benign prostatic hyperplasia[J].Urologic Oncology:Seminars and Original Investigations,2008,26(1):47.

[7] Diefenbach C S,Shah Z,Iasonos A,et al.Preoperative serum YKL-40 is a marker for detection and prognosisof and prognosis of endometrial cancer[J].Gynecologic Oncology,2007,104(2):435.

[8] Estrid,Hgdall,Merete Ringsholt,et al.YKL-40 tissue expression and plasma levels in patients with ovarian cancer[J].BMC Cancer,2009,9:8.

[9] Recklies A D,Ling H,white C.Inflammatory Cytokines Induce Production of CHI3L1 by Articular Chondrocytes[J].Biol chem,2005,280(50):41213.

[10] Krishna P Bhat,Christopher E Pelloski,Yujian Zhang,et al.Selective repression of YKL-40 by NF-κ B in glioma cell lines involves recruitment of histone deacetylase-1 and-2[J].FEBS Letters,2008,582(21-22):3193.

[11] Hagemann T,Wilson J,Kulbe H,et al.Macrophages induce in ivasiveness of epithelial cancer cells via NF-kappa Band JNK[J].J Immunol,2005,175(2):1197.

[12] Bernal-Mizrachi L,Lovly C M,Ratner L.The role of NF-kappa B-1 and NF-[kappa]B-2-mediated resistance to apoptosis in lymphomas[J].Proc Natl Acad SciUSA,2006,103(24):9220.

[13] Rayet B,Gelinas C.Aberrant rel/nfkb genes and activity in human cancer[J].Oncogene,1999,18(49):6938.

[14] Johansen J S,Jensen B V,Roslind A,et al.Serum YKL-40,A New Prognostic Biomarker in Cancer Patients[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(2):194.

[15] 范江涛.血清甲壳质酶蛋白40诊治妇科恶性肿瘤研究[J].国际妇产科学杂志,2008,4:35.

[16] Baeuerle P A,Henkel T.Function and activation of NF-kappaB in the immune system[J].Annu Rev Immunol,1994,12:141.

[17] 郭双平,翟宇强,王文亮,等.NF-κ B在人肝细胞肝癌的表达及与HBVX蛋白的关系[J].临床与实验病理学杂志,2002,8(2):146.

[18] 谢东华,唐孝达,夏术阶,等.核转录因子κ B在膀胱癌的表达及临床意义[J].癌症,2002,21(6):663.

[19] 郭双平,翟宇强,王文亮,等.核转录因子κ B在肾细胞癌组织中的表达及意义[J].诊断病理学杂志,2002,9(2):96.

[20] Loercher A,Lee T L,Ricker J L,et al.Nuclear factorkappaB isan important modulator of the altered gene expression profile and malignant phenotype in squamous cell carcinoma[J].Cancer Res,2004,64(18):6511.

[21] Budunova I V,Perez P,Vaden V R,Spiegelman V S,et al.Increased expression of p50-NF-kappaB andconstitutive activation of NF-kappaB transcription factorsduring mouse skin carcinogenesis[J].Oncogene,1999,18(52):7423.