西洋参中人参皂苷Rg1人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量测定

刘莉，程龙琼，周世玉

(成都市食品药品检测中心，610045)

西洋参为五加科植物西洋参(Panax quinque folium L.)的干燥根，均系栽培品，秋季采挖，洗净，晒干或低温干燥即得，具补气养阴、清热生津等功用。西洋参中的皂苷为重要的活性成分，现代对西洋参皂苷的含量测定有许多方法，主要采用高效液相色谱法、薄层扫描色谱法等，《中华人民共和国药典》2005年版一部采用高效液相色谱法对西洋参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1含量进行测定［1］，但分析时间较长，并且人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1较难达到完全分离。笔者在本实验中采用快速分离液相色谱法［2］，分析时间仅为原来的1/3，并且可将西洋参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re完全分离，方法的可操作强，结果准确可靠，重复性好，能有效地控制药材质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高分离度快速液相色谱仪;G1312B Bin Pump SL泵;G1314C VWD SL检测器;HP ChemStation色谱工作站。

1.2 试药 甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水。人参皂苷Rg1(批号:110703-200726)、人参皂苷Re(批号:110754-200421)和人参皂苷 Rb1(批号:110704-200420)均购自中国药品生物制品检定所。西洋参药材来自成都市荷花池中药材专业市场，经本所中药室鉴定为五加科植物西洋参(Panax quinque folium L.)的干燥根。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备 取本品粉末(过孔径0.355mm药筛)约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50mL，称定质量，置水浴中加热回流提取1.5h，放冷，再称定质量，用水饱和正丁醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1适量，加50%甲醇制成每毫升分别含 0.062 20，0.303 8，0.712 0 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.3 色谱条件 色谱柱:ZOBAX SB-C18柱(4.6mm×50mm，1.8 μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸(B)，梯度洗脱(0～25min，5%A→20%A;～35min，20%A→38%A);流速:2.0mL·min-1;测定波长:203 nm;柱温:35℃，进样量10 μL。人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的分离度＞1.5，理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于20000。色谱结果见图1。

图1 对照品(A)与样品(B)HPLC色谱图1.人参皂苷Rg1;2.人参皂苷Re;3.人参皂苷Rb1Fig.1 HPLC chromatograms of chemical reference substances(A)and samples(B)1.ginsenoside Rg1;2.ginsenoside Re;3.ginsenoside Rb1

2.4 线性关系的考察 精密吸取“2.2”项下对照品溶液 2.0，5.0，10.0，15.0，20.0，40 μL 注入液相色谱仪，以峰面积积分值(Y)为纵坐标，以对照品进样量(X，μg)为横坐标进行回归处理，得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的回归方程分别为:Y=173.537 3X+1.486 7(r=0.999 8);Y=150.809 1X+0.954 4(r=0.999 6);Y=113.484 8X+0.527 0(r=0.999 9)。结果表明:人参皂苷 Rg1进样量在0.12～2.49 μg 、人参皂苷 Re进样量在0.61 ～12.15 μg 和人参皂苷 Rb1进样量在1.42 ～28.48 μg 的范围呈良好线性关系。

2.5 精密度实验 分别吸取“2.2”项下对照品溶液10 μL连续进样5次，测定峰面积。人参皂苷Rg1、人参皂苷 Re和人参皂苷 Rb1峰面积的 RSD分别为0.9%，0.3%，0.2%。

2.6 重复性实验 取同一批号样品6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的平均含量分别为 0.12%，1.52%，1.62%;RSD 分别为1.1%，0.3%，0.3%

2.7 加样回收率实验 取上述已测定含量的样品粉末6份，各约0.5 g，精密称定，精密加入混合对照品溶液10mL，挥去甲醇后，按“2.1”项下方法制备所需溶液，进行测定，求得回收率平均值(n=6)分别为97.8%，98.1%，98.3%;RSD 分别为 1.0%，0.8%，0.4%。

2.8 样品含量测定 分别精密吸取按“2.1”项下制备的供试品溶液和对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，结果5批西洋参样品中人参皂苷 Rg1含量分别为 0.12%，0.11%，0.09%，0.15%，0.12%;人参皂苷 Re 含量分别为1.52%，1.78%，1.04%，1.60%，1.45%;人参皂苷Rb1含量分别为 1.62%，1.92%，1.35%，1.82%，1.71%。

3 讨论

用常规HPLC测定西洋参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量，分析时间较长，而且人参皂苷Rg1和人参皂苷Re分离度常常达不到1.5，而使用快速分离液相色谱法可使一次分析时间缩短至原来的1/3，人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Re分离度＞1.5，适用多批量检验，节约时间及消耗的总溶剂量，大大提高了检测的效率。

柱温对人参皂苷Rg1和人参皂苷Re分离度影响较大，通过比较发现柱温越低越有利于人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的分离。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京:化学工业出版社，2005:87.

［2］杨先启，卓开华，陈军.RRLC法分离分析人参中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1［J］.药物分析杂志，2008，28(7):1144－1145.