结肠癌患者淋巴细胞亚群改变与疗效关系的探讨

2011-07-27王建伟王万林叶永梅

中国医药导报 2011年35期

王建伟，王万林，陶锋，叶永梅

湖北省枣阳市第一人民医院检验科，湖北枣阳 441200

结肠癌是发生于结肠部位的常见的消化道恶性肿瘤，在消化道肿瘤中排第三位。随着饮食习惯的改变，结肠癌的发病率呈上升趋势。目前已成为严重威胁人们健康和生命安全的疾病之一。临床上常采取手术治疗联合化疗等方法治疗结肠癌并取得了一定的疗效[1]。

大量研究表明，在恶性肿瘤患者体内免疫系统的功能存在不同程度的改变，机体免疫调节的异常与肿瘤的发生与发展密切相关[2]。临床化疗除了可有效减少患者的肿瘤负荷、杀伤肿瘤细胞外，也可对患者的免疫系统产生一定的作用。淋巴细胞亚群是反映机体免疫功能状态的重要指标之一，检测结肠癌患者化疗前后外周血淋巴细胞亚群的变化并分析其规律对了解患者免疫功能状态、指导临床治疗有重要的意义[3]。因此，笔者选取我院2007年10月～2010年10月收治的结肠结癌术后化疗的85例患者，检测其化疗前后淋巴细胞亚群的变化并进行分析，现总结报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2007年10月～2010年10月收治的结肠癌术后行化疗的患者85例（结肠癌组）。其中，男49例，女36例；年龄32～69岁，平均（52.7±3.4）岁；所有患者均经手术后病理证实为结肠癌；按Duke分期：Duke A期4例，Duke B期15例，Duke C期43例，Duke D期23例；按照组织分化程度分为高分化11例，中分化28例，低分化40例，未分化6例。选取同期我院体检的无消化道疾病和其他肿瘤的健康者50例作为正常对照（正常对照组），其中，男28例，女22例，年龄31～68岁，平均（51.9±3.6）岁。所有实验者均无免疫性疾病，两组患者在性别、年龄等一般情况方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

表1 两组外周血淋巴细胞亚群的比较（）

注：与正常对照组比较，*P<0.05

表2 结肠癌患者外周血淋巴细胞亚群与临床病理特征的关系（）

注：按临床各分期，各组织类型分别进行单指标比较，*P<0.05

表3 化疗后结肠癌患者外周血淋巴细胞亚群的变化比较（）

注：与无效组比较，*P<0.05

分组例数 CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+ CD4+CD25+（%）有效组无效组562960.18±10.71*54.13±7.5437.52±6.19*32.25±5.8329.85±5.0630.19±4.321.22±0.31*1.06±0.184.83±1.15*8.91±2.24

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂 PE标记或 FITC标记的鼠抗人 CD3、CD4、CD8、CD25荧光抗体及同型对照抗体均购自美国BD公司；红细胞裂解液、淋巴细胞分离液、磷酸盐缓冲液（PBS）、1%多聚甲醛等均购自晶美生物试剂有限公司。

1.2.2 仪器低速离心机、37℃恒温水浴箱、微量加样器以及流式细胞仪等。

1.3 方法

所有结肠癌患者术后均根据病情需要采用不同的化疗方案，化疗6个周期以上。在化疗前及化疗6个周期后分别进行检测。

检测方法：所有试验者采取清晨空腹外周静脉血约3 ml，给予肝素抗凝。使用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞后送上级医院进行流式细胞检测。检测 CD3+、CD4+、CD8+和 CD25+等指标，分析各淋巴细胞亚群比例情况。所有操作严格按照试剂及仪器说明书进行。

1.4 疗效判定标准

化疗6个周期后，监测患者早期复发和远处转移的情况。治疗有效为无局部复发、CEA持续阴性、内窥镜检查未见病灶、CT或MR检查未发现占位病变、临床症状与体征无阳性表现、无远处转移。其他为无效。

1.5 统计学方法

采用SPSS 12.0统计学软件进行统计学处理，数据以均数±标准差（）表示，采用t检验，以 P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血淋巴细胞亚群的比较

在结肠癌患者外周血中，CD3+和CD4+细胞的比例分别为（55.36±11.19）%和（32.03±8.57）%，均较正常对照组显著下降，CD4+/CD8+的比值（1.05±0.28）也显著降低，而 CD4+CD25+细胞的比例（9.87±4.21）%较对照组显著上升，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。这些结果说明在结肠癌患者中淋巴细胞亚群发生改变，患者免疫调节功能异常，机体处于免疫抑制状态。

2.2 结肠癌患者外周血淋巴细胞亚群与临床病理特征的关系

通过比较不同临床分期与不同组织类型结肠癌患者外周血淋巴细胞亚群的比例，笔者发现，患者临床分期越晚、组织分化程度越差，其外周血中CD3+和CD4+细胞的比例越低、CD4+/CD8+的比值越低，而CD4+CD25+细胞的比例越高，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。这一结果说明结肠癌患者外周血各淋巴细胞亚群的比例与肿瘤的恶性程度密切相关。肿瘤恶性程度越高，患者免疫抑制状态越强。

2.3 化疗后结肠癌患者外周血淋巴细胞亚群的变化

结肠癌患者治疗后有效56例，无效29例。通过比较有效与无效组患者外周血淋巴细胞亚群，笔者发现，在有效组患者中外周血CD3+和CD4+细胞的比例、CD4+/CD8+的比值均显著高于无效组，而CD4+CD25+细胞的比例显著低于无效组，差异均有统计学意义（均P<0.05），见表3。说明治疗有效的患者机体的免疫抑制状态得到显著改善。

3 讨论

随着肿瘤免疫学研究的不断深入，人们的研究发现，肿瘤患者机体的免疫系统功能在肿瘤微环境的作用下产生了一定的改变，肿瘤细胞可通过释放大量免疫抑制因子进而导致机体免疫细胞的数量和比例发生异常，最终导致免疫系统功能的抑制[4]。由于机体免疫功能受到抑制，机体无法识别并清除肿瘤细胞，从而导致了肿瘤的发生与发展[5]。

大量研究表明，T淋巴细胞亚群在机体免疫系统中发挥了重要作用。CD4+和CD8+T细胞在免疫调节过程中极为重要，其比例和比值的多少反应了机体免疫功能的免疫状态与水平。CD4+/CD8+的比值越低，则机体的免疫应答反应能力越低。CD4+CD25+T细胞可通过分泌多种抑制性的细胞因子在机体免疫过程中起到抑制免疫的作用。这些淋巴细胞亚群维持一定的比例和功能是维持机体正常免疫调节能力的基础，它们共同参与了机体免疫应答的过程[6]。

已有报道显示，在肿瘤患者体内淋巴细胞亚群发生了改变，进而产生免疫抑制状态，促进了肿瘤的发生与发展[7]。笔者在本实验中通过检测结肠癌患者外周血淋巴细胞亚群发现，在结肠癌患者体内，CD3+与CD4+细胞的比例较正常对照组均显著下降，而CD4+/CD8+的比值也较对照组显著降低，CD4+CD25+细胞的比例较对照组显著上升，差异有统计学意义（P<0.05）。这些结果说明，在结肠癌患者体内淋巴细胞亚群发生了改变，其比例失衡，机体免疫功能受到抑制，进而促进了肿瘤的发展。

进一步笔者分析了结肠癌患者淋巴细胞亚群与结肠癌临床病理特征的关系，结果显示，患者临床分期越晚、组织分化程度越差，其外周血中CD3+和CD4+细胞的比例越低、CD4+/CD8+的比值越低，而CD4+CD25+细胞的比例越高。这一结果说明，肿瘤恶性程度越高，患者免疫抑制状态越强。通过比较治疗有效与无效的结肠癌患者淋巴细胞亚群的变化发现，在治疗有效的患者中外周血CD3+和CD4+细胞的比例、CD4+/CD8+的比值均显著高于无效组，而CD4+CD25+细胞的比例显著低于无效组，差异有统计学意义（P<0.05）。说明治疗有效的患者可能由于机体的免疫抑制得到改善进而提高了疗效。

总之，检测结肠癌患者淋巴细胞亚群有助于了解机体的免疫功能，通过比较治疗前后患者淋巴细胞亚群的变化，可对患者的治疗效果进行判断，对临床治疗有一定的指导意义。

[1]Yee YK,Tan VP,Chan P,et al.Epidemiology of colorectal cancer in A-sia[J].J gastroenterol Hepatol,2009,24(2):1810-1816.

[2]Greifenberg V,Ribechini E,Rssner S,et al.Myeloid-derived suppressor cell activation by combined LPS and IFN-gamma treatment impairs DC development[J].Eur J Immunol,2009,39(10):2865-2876.

[3]周申康,徐云峰,毕铁男,等.结肠癌患者围手术期监测T细胞亚群的意义探讨[J].现代中西医结合杂志,2008,17(5):677-678.

[4]莫军扬,朱其一,庄亚强,等.新辅助化疗对晚期乳腺癌患者T淋巴细胞亚群免疫功能的影响[J].实用癌症杂志,2007,22(5):454-456,

[5]Zhang Y,Liu Q,Zhang M,et al.Fas signal promotes lung cancer growth by recruiting myeloid-derived suppressor cells via cancer cell-derived[J].J Immunol,2009,182(6):3801-3808.

[6]王倩,马晓燕,郭琛,等.恶性卵巢肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的检测分析[J].中国妇幼保健,2009,24(3):251-253.

[7]立彦,傅雷,林艳丽,等.肿瘤病人细胞免疫功能状态及其临床意义[J].放射免疫学杂志,2010,23(3):330-332.