Survivin和PTEN在宫颈癌中的表达及相关性

于 娟，王德华

（天津医科大学总医院妇产科，天津300052）

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，目前研究认为，宫颈癌的发生、发展与凋亡相关基因关系密切，Survivin是迄今为止发现的最强的凋亡抑制基因，它可能通过干扰肿瘤细胞凋亡和增殖平衡，促进宫颈癌的发生和进展。抑癌基因的丢失、突变或失去功能，使激活的癌基因发挥作用而致癌，抑癌基因PTEN可能通过去磷酸化参与细胞调控从而促进宫颈癌的发生和发展。检测宫颈组织中Survivin基因及PTEN基因的表达对早期诊断宫颈癌及初步估计肿瘤的恶性潜能和预后有一定的应用价值。本研究探讨Survivin和PTEN与宫颈癌发生、发展之间的关系以及两者之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集天津医科大学总医院2007年7月至2009年7月门诊活检或住院手术病例宫颈标本共100例，其中宫颈癌组织48例、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织37例，CINⅠ12例，CINⅡ12例，CINⅢ13例，以及正常宫颈组织15例。宫颈癌包括鳞状细胞癌40例、腺癌8例，按FIGO分期（2000年）：Ⅰ期20例，Ⅱ期及以上28例；其中手术28例：Ⅰ期20例，Ⅱa期5例，Ⅱb期3例（新辅助化疗），手术病理示发现淋巴结转移者8例，未发现淋巴结转移者20例；病理分化程度：高分化11例，中分化16例，低分化21例。所有100例病人取宫颈组织标本前均未经化疗和放疗。所有HE切片经病理专家复核。3组病例的平均年龄（中位数）分别为宫颈癌组47.5岁，CIN组48岁，正常组织组49岁，3组病例年龄经检验无统计学差异。

1.2 方法 兔抗人Survivin多克隆抗体，兔抗人PTEN多克隆抗体及S-P法免疫组化试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化SP法，实验步骤按试剂盒说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照，采用生物公司提供的阳性切片为阳性对照。

1.3 判断标准 染色强度：未着色或与背景一致浅棕色为0分，着色浅为1分，中度着色为2分，着色深为3分。阳性细胞百分数：高倍镜（×400）下随机选取10个视野，每个视野计数10个细胞。取平均值作为阳性细胞百分数。阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。根据这两项指标的积分数分为4级，即阴性 (-)为0分，弱阳性(+)为 1～2 分，阳性 (++)为 3～4 分，强阳性(+++)为 5～6 分。

1.4 统计方法 采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学处理，实验数据采用χ2检验，Fisher’s精确概率法及Spearman相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Survivin、PTEN 在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中的表达 由表1可知，Survivin在3组间的表达差异有显著性 (χ2=29.420，P<0.05)；宫颈癌组Survivin表达高于正常宫颈组及CIN组。PTEN免疫组化阳性产物呈棕黄色细颗粒状,定位于细胞核内。3 组间差异有显著性(χ2=19.337，P<0.05)；宫颈癌组PTEN表达低于正常宫颈组及CIN组。

表1 Survivin、PTEN在正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中的表达Tab 1 Expression of Survivin,PTEN in normal cervix,CIN and cervical carcinoma

2.2 宫颈癌组织中Survivin、PTEN的表达与临床病理指标之间的关系 由表2可以发现Survivin蛋白表达阳性率在Ⅱb～Ⅳ期组高于Ⅰ～Ⅱa期组 (χ2=8.817，P<0.05)，在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(χ2=4.000，P<0.05)；宫颈癌中 Survivin 的表达与年龄、分化程度及组织类型均无关(P>0.05)。PTEN的表达与宫颈癌的临床分期及淋巴结转移显著相关（P<0.05），但在不同年龄PTEN的表达却无统计学意义（P>0.05），Survivin、PTEN 的表达异常均可以作为预后不良的标志。

2.3 宫颈癌组织中Survivin与PTEN蛋白表达的相关性分析 采用Spearman秩相关对48例宫颈癌组织Survivin与PTEN进行相关性分析，经统计学处理，Survivin与PTEN的相关系数rs=-0.753(P<0.05)，说明宫颈癌组织中Survivin与PTEN的表达成负相关。

表2 宫颈癌患者Survivin、PTEN的表达与临床病理指标的关系Tab 2 The relationship between clinicopathological parameters and expression of survivin,PTEN in cervical carcinoma

3 讨论

3.1 Survivin与宫颈癌 细胞增生和凋亡的平衡一旦被打破，细胞凋亡被抑制，将导致细胞过度增生，变异细胞不能自主凋亡，从而导致肿瘤的发生。Survivin基因是一种结构独特的凋亡抑制蛋白（IAP）家族成员，通过直接或间接抑制凋亡基因及化疗药物等引起的细胞凋亡效应蛋白酶caspase-3、caspase-7的活化来阻断其引起的细胞凋亡过程[1]。Survivin基因在正常组织中不表达或低表达，而在几乎所有被研究的肿瘤组织中呈高表达[2]。Survivin蛋白主要定位于肿瘤细胞质或细胞核上，为粗细不一的棕黄色颗粒，本资料显示从正常组织→CIN→宫颈癌，其阳性表达逐渐增高，且临床分期越晚其Survivin阳性表达率越高。此外其表达与宫颈癌淋巴转移也有关系，这与张保华等[3]的研究结果基本一致；也与Survivin在其他肿瘤中的研究结果一致。Survivin基因表达预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后，在一定程度上反映了宫颈癌的恶性程度[4]。其原因主要可能是因为Survivin阳性的子宫颈癌细胞对于放射治疗和化疗有较高的耐受性，从而导致子宫颈癌患者对放射治疗及化疗抵抗。以上特点使Survivin可能成为判断肿瘤患者预后及辅助肿瘤诊断的一项重要指标，也为肿瘤治疗提供了新的靶点。

3.2 PTEN与宫颈癌 PTEN基因亦称MMAC1基因，是继p53基因之后发现的一种肿瘤抑制基因，也是第一个具有双特异性磷酸酶活性产物的抑癌基因,在细胞生长、凋亡、黏附、迁移、浸润等方面具有重要作用，该基因的突变失活与人类多数恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关而一直被人们所关注。最近的研究表明PTEN对维持染色体稳定性起到重要作用，泛素化调节则赋予PTEN通过核膜的能力[5]。研究表明宫颈癌组织中PTEN阳性表达率明显低于癌旁宫颈组织和正常宫颈组织，提示PTEN等位基因缺失和突变可能参与宫颈癌的发生。这与本研究的结果PTEN的表达随着宫颈癌的发展而降低相一致。PTEN的表达异常可以作为预后不良的标志。

3.3 宫颈癌中Survivin与PTEN的相关性 在Survivin与PTEN的关系研究中文献较少，张培荣等[6]的研究提示：Survivin与PTEN在宫颈鳞状细胞癌的早期发生、发展中起重要作用。抑癌基因PTEN的失活可能通过P13K/Akt途径上调Survivin的表达，使之发挥抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞凋亡的作用，促进肿瘤细胞的增殖、血管生长和稳定，更有利于肿瘤生长和侵袭。PTEN的失活和Survivin的过表达是宫颈癌进展和转移的重要环节，其联合可以作为宫颈癌诊断及判断预后的标志物。

［1］Zaffarni N,Costa A,Pennati M,et al.Survivin is highly expressed and promotes cell survival in malignant peritoneal mesothelioma[J].Cell Oncol,2007,29(6):453

［2］StauberRH,MannW,KnauerSK.Nuclearandcytoplasmicsurvivin:molecular mechanism,prognostic,and therapeutic potential[J].Cancer Res,2007,67(13):5999

［3］张保华，卢实，王泽华.子宫颈癌组织中survivin基因的表达及其临床意义[J].实用医学杂志，2004，20(4):384

［4］李素文，朱宝申，孙丽娟，等.Survivin在宫颈癌组织中表达规律及临床意义[J].河北医药，2009，31（14）：1743

［5］Baker SJ.PTEN enters the nuclear age[J].Mol Cell,2007,128(1):25

［6］张培荣，郑锦花，王艳萍，等，Survivin与PTEN蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及临床意义[J].临床肿瘤学杂志，2007，12（4），271