箬叶多糖体内抑瘤及免疫调节作用的实验研究

靳 祎 王恩军 宋 洁 柴广军 王 哲 王 静

1．河北大学，河北 保定 71000;2．河北省保定市高阳县医院，河北 高阳 071500;3．河北省保定市第二医院，河北 保定 071000;4．河北省保定市一中分校，河北 保定 071000

箬叶中含有维生素、茶多酚、多糖、氨基酸等多种成分［1－4］，其中箬叶及箬竹根所含的多糖，对实验动物体内肿瘤具有抑制作用［5－6］。本试验采用小鼠移植性宫颈癌作为试验模型，研究箬叶多糖体内抗宫颈癌活性及免疫调节机制，为其临床应用提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料与药品 箬叶购自江西省九江市;环磷酰胺(CTX)为山西普德药业有限公司产品 (批号:20081023);刀豆素蛋白 (ConA)为sigma公司产品。

1.2 实验动物与细胞株 昆明种小鼠4－5周龄，体重18－24g，雌雄各半，河北农业大学动物科技学院提供;U14小鼠宫颈癌细胞株:购自军事医学科学院放射医学研究所。

1.3 实验方法

1.3.1 箬叶多糖的提取 采用热水浸提法，经苯酚－硫酸法测定多糖含量为49.08%。

1.3.2 建立小鼠宫颈癌U14实体瘤模型 取在昆明小鼠体内传代7d－10d的U14肿瘤细胞，每只小鼠右前肢腋下注射2×106个/0.2mL，建立小鼠宫颈癌实体瘤模型。

1.3.3 实验分组 取荷瘤小鼠50只及正常小鼠10只，荷瘤小鼠随机分为5组，每组10只:①阴性对照组:生理盐水;②阳性对照组:CTX(20 mg/kg);③箬叶多糖低剂量组 (100 mg/kg);④中剂量组 (200 mg/kg);⑤高剂量组(400 mg/kg)。所有小鼠均为灌胃给药，剂量均为0.l mL/10g，每天1次，连续14 d。

1.3.4 箬叶多糖体内抑瘤活性 停药的次日采用眼球摘除放血法处死小鼠，剖取肿瘤组织称重，计算肿瘤抑制率。抑制率 (%)=(1－给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%。

1.3.5 相关免疫学指标测定

1.3.5.1 脾指数 所有实验动物给药结束后称重，处死后取脾脏并称量脾脏重量，计算各组小鼠脾指数。脾脏指数(%)=脾脏重量 (mg)/小鼠体重 (g)。

1.3.5.2 淋巴细胞转化试验 (MTT法)［7］取脾脏用钢网研磨法制备脾细胞悬液，调整细胞浓度为5×105个/mL。将脾细胞悬液加入到96孔板中，100 μL/孔，每组4个平行孔，加入10 μg/mL的 ConA 溶液100 μL(终浓度5 μg/mL)，用不含ConA的培养液作为对照。置5%CO2培养箱37℃培养68 h后各孔加入5 mg/mL MTT液20 μL，培养4h，离心弃上清，各加入150 μL的DMSO，溶解后用酶标仪测定各孔A570值，计算T淋巴细胞的增殖刺激指数 (刺激指数 =刺激孔A均值/对照孔A均值)。

2 结果

2.1 箬叶多糖对荷瘤小鼠体内肿瘤的影响 箬叶多糖低、中、高剂量组对荷瘤小鼠的瘤重都有一定的抑制作用，瘤重均有减轻，高剂量组抑瘤作用更明显 (表1)。

2.2 箬叶多糖对荷瘤小鼠脾脏指数的影响 中、高剂量组的箬叶多糖能促进脾脏的增长，增加小鼠脾指数，增加趋势与剂量呈正相关 (表1)。

2.3 箬叶多糖对荷瘤小鼠脾淋巴细胞功能的影响 阴性对照组和CTX组荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖刺激指数明显降低，而实验组淋巴细胞增殖刺激指数则表现为上升，高、中剂量组与阴性对照组比较有显著性差异 (表1)。

表1 箬叶多糖对荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率、脾指数及刺激指数的影响

3 讨论

本试验表明箬叶多糖的抗癌活性与剂量相关，高剂量的箬叶多糖对小鼠宫颈癌的抑制作用较为明显。此外箬叶多糖对荷瘤小鼠的免疫器官有一定的保护作用，环磷酰胺组小鼠的脾指数降低，而箬叶多糖组小鼠的脾脏指数比环磷酰胺组明显提高;淋巴细胞转化实验结果表明箬叶多糖还可以提高荷瘤小鼠的淋巴细胞刺激指数，从而拮抗荷瘤小鼠的免疫抑制，增强其免疫功能。

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