复方氨溴索氯雷他定胶囊溶出度测定方法的研究*

毛秀梅，韩 蕊，杨金荣3,

(1.天津中医药大学第一附属医院，天津 300192； 2.天津市人民医院，天津 300121； 3．天津医科大学,天津 300070)

复方氨溴索氯雷他定胶囊用于呼吸道感染引起的咳嗽，同时具有稀释痰液、降低痰液黏稠性作用，可降低气道阻力，保持呼吸顺畅。复方氨溴索氯雷他定胶囊由盐酸氨溴索和氯雷他定组成，本实验采用HPLC法对该制剂中盐酸氨溴索和氯雷他定的溶出度进行测定，方法准确可靠。

1 仪器与试药

1.1仪器 高效液相色谱仪(SPD-10A PLUS，日本岛津)；色谱柱(Kromasil C18，150 mm×4.6 mm，5 μm，天津市色谱科学技术公司)；智能溶出试验仪(ZRS-8，天津大学无线电厂)。

1.2试药 复方氨溴索氯雷他定胶囊(自制，每粒胶囊含盐酸氨溴索30 mg和氯雷他定5 mg)；盐酸氨溴索对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号100599-200502)、氯雷他定对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号100615-200401)；乙腈色谱纯(中国医学科学院天津协和公司)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1溶出量测定方法的建立

2.1.1溶液的配制

2.1.1.1对照品溶液 精密称取约盐酸氨溴索对照品15 mg，置50 ml量瓶中，加盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液浓度为300 mg/L的盐酸氨溴索对照品储备液；精密量取上述溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为30 mg/L的盐酸氨溴索对照品溶液。

精密称取氯雷他定对照品10 mg，置200 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液浓度为50 mg/L的氯雷他定对照品储备液；精密量取上述储备液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为5 mg/L的氯雷他定对照品溶液。

精密量取氯雷他定对照品储备液和盐酸氨溴索对照品储备液各1 ml，置10 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成混合对照品溶液。

2.1.1.2供试品溶液 取30 min时的溶出液，微孔滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液。

2.1.1.3阴性对照 精密称取按处方配比的辅料(包括空胶囊)，置100 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液适量，超声10 min使充分溶解，冷却至室温以流动相定容，摇匀，滤过。取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为阴性对照溶液。

2.1.2色谱条件与系统适应性试验[1-3]色谱柱为Kromasil C18(50 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.3 g，加0.1 mol/L 氢氧化钠溶液 600 ml溶解，加水至1 000 ml)-乙腈(50∶50)，pH为7.3；波长247 nm，灵敏度为0.01，流速1 ml/min，进样量20 μl。

在上述色谱条件下分别取阴性对照溶液、混合对照品溶液和供试品溶液进行测定，见图1，辅料对测定无干扰，主成分与杂质应能完全分离，分离度大于2.0。在考察了流动相比例变化(±5%)、流动相pH值变化(±0.2)、流速相对值变化(±20%)时等色谱条件变化，主峰的拖尾因子不大于2.0，主峰与杂质峰皆达到基线分离，见图1。

2.1.3线性与范围 分别精密称取1、2、3、4、5和6 ml的盐酸氨溴索和氯雷他定的储备液，依次各置50 ml的量瓶中混合，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，配制成相当于对照品混合溶液浓度20%、40%、60%、80%、100%和120%的系列对照品溶液。依“2.1.2”项下方法分别进行测定，以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归分析。盐酸氨溴索回归方程：Y=1.4×106X-2.298×104(r=0.999 7)，表明盐酸氨溴索在6～36 mg/L浓度范围内线性关系均良好。氯雷他定回归方程：Y=2.2×106X-9 278.9(r=0.999 9)，表明氯雷他定在1～6 mg/L浓度范围内线性关系均良好。

2.1.4精密度 取“2.1.1”项下的混合对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，结果盐酸氨溴索RSD为0.32%，氯雷他定RSD为1.60%。

2.1.5回收率 精密量取氯雷他定和盐酸氨溴索的储备液3、4和5 ml各3份，置50 ml量瓶中，加入精密量取的5 ml全辅料溶液混合，再加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。结果盐酸氨溴索平均回收率为100.34%，RSD为0.39%；氯雷他定平均回收率为100.53%，RSD为1.51%。表明该方法用于复方氨溴氯雷片中盐酸氨溴索和氯雷他定的定量，准确可靠，见表1。

表1 盐酸氨溴索和氯雷他定回收率测定结果

2.1.6溶液的稳定性 将混合对照品溶液配制后依次放置0、1、2、4、6、8、10和24 h取样，测定峰面积。结果盐酸氨溴索RSD为0.59%，氯雷他定RSD为1.62%，表明供试品溶液在常温下放置24 h比较稳定。

2.2溶出度方法的建立[4，5]

2.2.1溶出介质的选择 分别以水、0.1 mol/L盐酸、磷酸盐缓冲液(pH 6.8)作为溶出介质，取胶囊置沉降篮中，采用桨法，转速为50 r/min，介质体积为900 ml，进行测定。分别在5、10、15、20、30和45 min取样，取样量为10 ml，滤过，取续滤液作为供试液。以氯雷他定浓度为5 μg/ml和盐酸氨溴索浓度为30 μg/ml的混合作为对照品溶液，依法测定，计算累积溶出百分率(Q)。结果盐酸氨溴索在三种溶剂中溶出速度均较快，而氯雷他定在水中溶出不完全，其余两种介质中均能完全溶出，见图2和图3。

图2 盐酸氨溴索在不同介质中的溶出曲线

图3 氯雷他定在不同介质中的溶出曲线

2.2.2篮法和桨法的比较 以0.1 mol/L盐酸为溶出介质，分别采用篮法(转速为100 r/min)和桨法(转速为50 r/min)进行试验。其溶出曲线基本相似，但篮法溶出量的RSD较大，均一性不好，故选择桨法，见表2和表3。

表2 不同溶出方法和转速氯雷他定累积溶出百分率

表3 不同溶出方法和转速

2.2.3均一性试验 取胶囊6粒，置沉降篮中，以0.1 mol/L盐酸为溶出介质，照“2.2.1”项下的方法进行试验。结果表明溶出均一性良好， RSD均<5%，见表4。

表4 同一批样品累积溶出百分率均一性试验结果

3 样品溶出度测定结果

取本品6粒，置沉降篮中，采用桨法，以0.1 mol/L的盐酸溶液900 ml为溶出介质，转速为50 r/min，在20 min取样，取样量为10 ml，滤过，取续滤液进样测定峰面积。计算样品的溶出度。结果三批样品中氨溴索和氯雷他定的溶出度均>80%，符合规定，且RSD均<5%，见表5。

4 讨论

4.1测定波长的选择 紫外扫描图显示，全辅料在197 nm处有最大吸收峰；盐酸氨溴索在200～400 nm有3个吸收峰，209 nm处吸光度最高，但与辅料的最大吸收波长相近，对含量测定有影响，308 nm处吸收峰较平坦，吸光度小，灵敏度低，亦不适合含量测定；氯雷他定的最大吸收波长处辅料也有吸收。氨溴索和氯雷他定分别在246.5 nm和247 nm有吸收峰，且无辅料的干扰，故选择247 nm作为检测波长。

4.2溶出方法的选择 通过溶出介质的选择，由于氯雷他定在0.1 mil/L盐酸中溶出速度适中，可控性较好，且溶出完全，因此确定以0.1 mil/L盐酸为溶出介质；由于篮法测定时胶囊壳容易黏附在转篮的网壁上而使溶出的结果差异性较大，故选择桨法测定。由于桨法的常用转速为50 r/min，本实验的溶出曲线显示溶出速度适中，故未增加转速的试验。

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2 赵亚萍．HPLC法检查氯雷他定及其制剂的有关物质．中国药品标准，2003，4(3):56

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5 王亚敏．浅谈溶出度检查方法的研究．药物分析杂志， 2007，27(10)：1667