血清抵抗素及其基因299G/A多态性与腹型肥胖的相关性研究①

杨德玉 李希圣

(1.安徽中医学院第一附属医院急诊科 合肥 230031;2.福建医科大学第二附属医院内分泌科 泉州 100088)

Resistin是由Steppan等[1]于2001年首先报道并命名的一种脂肪来源的新激素,被认为可能作为肥胖与IR联系的纽带,参与IR的发生。Ma等[2]发现抵抗素基因299G/A多态与肥胖间可能存在相互作用。本研究拟通过检测福建泉州地区人群血清抵抗素水平、抵抗素基因299G/A位点多态性、胰岛素抵抗指数等指标以探讨抵抗素、抵抗素基因299G/A位点多态性在腹型肥胖胰岛素抵抗中的作用。

1 对象与方法

1.1 对象

腹型肥胖组:依据国际糖尿病联盟公布的代谢综合症工作定义(2005年)及中心性肥胖诊断标准入选的我院体检对象125例,其中男65例,女60例,年龄22～70岁,平均(45.6±9.8)岁。排除:(1)恶性肿瘤;(2)糖尿病及中间型高血糖;(3)感染性疾病;(4)近期创伤手术(6个月内);(5)心衰;(6)近期口服调脂药物。对照组:体检健康者85例,男45例,女40例,年龄15～61岁,平均(35.8±10.7)岁。

1.2 方法

1.2.1 检测指标 所有受试对象测定空腹血糖(FPG)、胆固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白a(ApoA)、载脂蛋白b(ApoB)、抵抗素(Resistin)、胰岛素(FINS)。

1.2.2 基因多态性检测 (1)聚合酶链反应:由基因组纯化试剂盒提取DNA,以软件DNAStar设计PCR引物:上游5′GGAAGAAGCCATCAATGAGAGG3′,下 游 5′CCTGTTGGTTTGGAGCTA G GTC3′,扩增片段352bp。在25uL反应体系中扩增基因组DNA。PCR循环参数为:初期94℃变性5min,继之35个循环,每个循环中94℃变性1min,62℃退火1min,72℃延伸2min,最后于72℃延伸15min。(2)酶切:取限制性内切酶AluI 0.5uL(5U)、10×NEB缓冲液2uL、PCR产物14uL、灭菌双蒸水3.5uL混匀,37℃水浴酶切16h。最后将PCR剩余11uL和20uL酶切液上样于3.0%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,凝胶成像分析仪下观察结果,分析基因型。G/G基因型产生71bp、243bp、23bp和15bp片段;G/A基因型产生71bp、243bp、158bp、85bp、23bp和15bp片段;A/A基因型产生71bp、158bp、85bp、23bp和15bp。

表1 检测结果(±s)

表1 检测结果(±s)

注:与对照组比较,﹡P＜0.05

组别 TG TC Resistin FPG FINS Homa-IR对照组 0.81±0.26 4.38±0.68 3.048±1.233 5.120±0.375 6.574±4.181 3.048±1.233腹型肥胖组 1.35±0.82 4.79±0.73 (3.761±1.608)﹡ 5.327±0.374 (9.827±4.431)﹡ (3.761±1.608)﹡

表2 腹型肥胖组与对照组抵抗素基因299G/A等位基因频率及基因型分布的比较

1.3 统计学处理

采用SPSS 13.0软件包进行统计学处理。所有数据均以(±s)表示,由于胰岛素、胰岛素抵抗指数均不是正态分布,故先经自然对数转换后再进行统计分析,在列表中以原值表示;对性别构成的比较采用χ2检验;以Hardy-Weinberg平衡检验确认研究标本的群体代表性。

2 结果

2.1 检测结果(表1)

2.2 2组抵抗素基因299G/A等位基因频率及基因型分布的比较(表2)

2.3 抵抗素与各种影响因素的多元逐步回归分析

为了解抵抗素与胰岛素抵抗、空腹胰岛素等因素的具体相关情况,以抵抗素(Y)为应变量,FINS(X1)、Homa-IR(X2)、WC(X3)、性别(X4)、年龄(X5)、身高(X6)、体重(X7)、收缩压(X8)、舒张压(X9)、空腹血糖(X10)、总胆固醇(X11)、甘油三酯(X12)、高密度脂蛋白胆固醇(X13)为自变量,按照入选变量的显著性水准为0.05、剔除变量的显著性水准为0.01,进行多元逐步回归分析,得出回归方程:Y=-2.541+0.302X1+0.196X2+0.026X3(P值分别为0.009、0.005、0.007)。

3 讨论

在抵抗素与胰岛素抵抗的关系方面,目前的各种研究存在较大的争议,其核心问题在于抵抗素是否参与了胰岛素抵抗的发生。肥胖患者往往有腹部脂肪堆积,随着体脂的增加,脂肪细胞数量增多,尤其是脂肪细胞肥大,肥大的脂肪细胞可分泌大量脂肪因子,从而激活交感神经系统、肾素血管紧张素系统[3],导致肥胖相关的代谢紊乱。抵抗素可能作为一种重要的细胞因子参与体内胰岛素代谢的调节并可能引起IR等多种代谢紊乱,抵抗素在这种网络中的作用和地位及抵抗素与糖代谢及脂代谢等的关系,已成为肥胖及代谢紊乱一个新的研究热点[4]。

本研究中,2组之间Resistin存在明显差异,这提示人血清中的抵抗素可能来源于脂肪组织,其浓度与体脂含量密切相关,多元逐步回归结果表明,腹型肥胖患者血清抵抗素水平与胰岛素抵抗指数呈显著正相关,说明抵抗素参与腹型肥胖胰岛素抵抗的发生。虽然在入选研究对象时排除了糖尿病及中间型高血糖患者,但2组之间FINS和HOMA-IR仍存在明显差异,这与肥胖患者常伴胰岛素抵抗,并以此为中心环节,引起一系列糖、脂代谢紊乱的特征相符。

随着抵抗素的发现,对人类抵抗素的基因位点与肥胖之间关系的研究也逐渐深入,发现了多个抵抗素的单核苷酸多态性位点。Ma等[2]发现抵抗素基因299G/A多态与肥胖间可能存在相互作用。本研究针对泉州地区人群抵抗素基因299G／A多态性与腹型肥胖的相关性进行探讨,结果显示,抵抗素基因299位点A等位基因频率在腹型肥胖组与健康对照人群中差异有显著意义,提示抵抗素基因299G／A多态性与泉州地区人群腹型肥胖发病有相关性,

综上所述,抵抗素可能与腹型肥胖的胰岛素抵抗密切相关,其基因299G/A多态性位点A等位基因可能参与腹型肥胖和IR的发生。

[1]Steppan CM,Bailey ST,Bhat S,et a1.The hormone resistin links obesity to diabetes[J].Nature,2001,409(6818):307～312.

[2]Ma XW,Warram JH,Trischitta V,et a1.Genetic variants at the resistin locus and risk of type 2 diabetes in Caucasians[J].Clin Endocrinol Metab,2002,87(9):4407～44l0.

[3]Segura J,Ruilope LM.Obesity essential hypertension and renninangiotensin system[J].Public Health Nutr,2007,10(10A):1151～1155.

[4]Fonseca-Alaniz MH,Takada J,Alonso-Vale MI,et a1.Adipose tissue as an endocrine organ:from theory to practice[J].J Pediatr,2007,83(5Suppl):192～203.