不同宫颈病变组织中C-MYC基因与P16蛋白的表达

武海英，史惠蓉

1)郑州大学第一附属医院妇产科郑州450052 2)河南省人民医院妇产科郑州450003

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈癌发病密切相关，但最终只有极少部分发展为宫颈癌。找到宫颈癌发生发展的分子标志物是早期诊断宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的关键。目前认为，P16蛋白作为肿瘤标志物在CIN及宫颈癌中表达异常，可作为宫颈癌早期病变的标志物之一［1］。有文献［2］证实 CMYC基因及其产物在宫颈癌发生发展中的作用与HPV关系密切。作者分别检测了各级宫颈病变组织中C-MYC基因和P16蛋白的表达，探讨二者在宫颈癌发生发展中的作用及临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 选择2009年6月至2010年6月在郑州大学第一附属医院门诊及住院部收治的不同程度CIN及宫颈癌患者，年龄22～65(44.2±9.3)岁。所有标本均经病理诊断证实，其中慢性宫颈炎40例，CINⅠ级108例，CINⅡ级50例，CINⅢ级35例，浸润性宫颈鳞状细胞癌38例，腺癌14例。宫颈癌中高分化12例，中分化12例，低分化28例;FIGO分期:Ⅰ期18例，Ⅱ期23例，Ⅲ期以上11例;术后有淋巴结转移者10例。

1.2 宫颈各级病变组织中C-MYC基因和P16蛋白表达的检测 所有标本均经体积分数10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片备用。采用荧光原位杂交技术(FISH)检测C-MYC基因，C-MYC探针和检测试剂盒由北京金菩嘉生物有限公司提供，参照FISH检测试剂盒说明书步骤操作。结果判断参照文献［2］。

采用免疫组化SP方法检测P16蛋白在宫颈各级病变组织中的表达。鼠抗人P16单克隆抗体(使用时按1-50稀释)、SP试剂盒及DAB显色试剂购于福州迈新公司，具体操作按说明书进行。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性表达的宫颈癌切片作阳性对照。P16蛋白阳性表达为胞核和胞质着棕黄色。P16阳性判断参考Negri等［1］的标准。

1.3 统计学处理 采用SPSS 11.5分析数据。各组间C-MYC基因和P16蛋白阳性表达率的比较采用校正χ2检验或确切概率法，检验水准α=0.05。

2 结果

不同宫颈病变中C-MYC基因及P16蛋白的表达见图1和表1。两两比较结果显示，除CINⅢ级与宫颈鳞状细胞癌(P=0.198)、宫颈鳞状细胞癌与宫颈腺癌(P=1.000)之间C-MYC基因阳性表达率的差异无统计学意义外，其余任两者之间比较差异均有统计学意义;除CINⅢ级与宫颈鳞状细胞癌(P=0.389)、宫颈鳞状细胞癌与宫颈腺癌(P=0.870)之间P16蛋白阳性表达率的差异无统计学意义外，其余任两者之间比较差异均有统计学意义。C-MYC基因及P16蛋白的表达与宫颈癌各临床病理特征的关系见表2。

表1 不同宫颈病变中C-MYC基因与P16蛋白阳性表达率的比较 例(%)

表2 C-MYC基因和P16蛋白的表达与宫颈癌临床病理特征的关系

图1 不同宫颈病变中C-MYC基因和P16蛋白的表达

3 讨论

C-MYC基因定位于染色体8q24，编码蛋白由49个氨基酸残基组成，具有调节细胞增殖分化和促进细胞凋亡的作用。C-MYC基因及其产物在宫颈癌发生发展中的作用与HPV关系密切［2］。在正常生理条件下，pRb与E2F细胞因子结合，使游离E2F数量减少，而HPV病毒蛋白E7在细胞内结合pRb，使游离E2F增多，导致C-MYC活性增加，使大量G0细胞提前进入细胞周期，导致不典型增生、癌变的发生［3-4］。Wu［5］检测不同病理分型癌组织，发现 CMYC基因在分化差的癌组织较易扩增和过度表达，且较易复发。Riou等［6］提示C-MYC过度表达更多出现在恶性程度较高的宫颈癌中。Iwasaka等［7］研究证实，C-MYC过度表达的患者，24个月内复发率明显高于无过度表达的患者。该研究结果表明，随宫颈病变级别的升高，C-MYC基因的阳性表达率升高，且C-MYC基因与宫颈癌的分化程度有关，说明C-MYC在宫颈癌的发生发展中起着非常重要的作用，有可能作为判断预后的一个重要指标。

p16基因定位于9p21，又称多肿瘤抑制基因，是细胞周期依赖酶抑制因子，在多数肿瘤中呈低表达，但有研究［8-9］表明p16在CIN及宫颈癌中表现为过表达。对其过表达的机制目前主要解释为:①由于Rb基因的失活造成的。在正常宫颈组织中，p16与pRb之间通过负调节维持着两者的平衡。宫颈发生癌变时，可导致功能性pRb蛋白的缺失，其对p16的抑制作用解除而导致p16升高［10］。②p16表达增高可能与HPV感染有关。HPV感染机体并整合到宿主DNA后，引起E6、E7过表达，E7基因编码蛋白可与pRb结合并抑制其活性，从而使P16蛋白表达升高［11］。因此有学者［9］认为 p16可作为间接测定宫颈癌早期病变及HPV整合的指标。该研究结果表明，随宫颈病变级别的升高，P16阳性率呈逐渐升高的趋势，但P16的表达与宫颈癌的分化程度、病理分期及有无淋巴结转移无关，提示P16的高表达是宫颈正常组织-CIN-宫颈癌发生过程中的早期事件。

综上所述，P16可作为宫颈癌的早期预测指标，而C-MYC基因则与宫颈癌的发生发展关系密切。

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