高效液相色谱法测定桃红四物口服液中芍药苷的含量

安 晔，赵明宏，何 静

桃红四物口服液由熟地、川芎、当归、白芍、桃仁、红花组成，具有活血祛瘀、养血调经的功效，主治病症为妇女血行瘀滞，月经不调，经前腹痛拒按或经行不畅，经色紫暗有块，或月经过多，或延久淋漓不尽，舌紫暗或有瘀斑紫点，脉弦涩或细涩。白芍为方中主药之一，其主要活性成分为芍药苷。为有效控制该制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定了桃红四物口服液中芍药苷的含量。

1 仪器、试剂与试药

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Agilent-1100系列四元泵，Agilent Chemstation色谱工作站;VWD检测器;TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。芍药苷(批号:110753-200413，中国药品生物制品检定所)，乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm);流动相:甲醇-0.1% 磷酸水(14∶86)［1］;流速 1.0mL/min;柱温为室温;检测波长:230 nm;进样量:10μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇溶解，制成每1mL含0.11 mg的溶液作为对照品溶液。色谱图见图1。

图1 对照品色谱图

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取桃红四物口服液5mL，置25mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀。用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。色谱图见图2。药苷在0.044～0.179μg范围内线性关系良好。

图2 供试品色谱图

2.6 精密度试验 取样品溶液，精密进样10μL，连续进样6次，记录峰面积，计算得其 RSD=0.4%(n=6)，仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取桃红四物口服液样品溶液，室温放置，于 0、2、4、6、8 h 分别精密进样 10μL，测定芍药苷峰面积，计算得其RSD=0.5%，结果表明，样品溶液在8 h内稳定。

2.8 重复性试验 取同一批号(080622)桃红四物口服液，按“2.3”项下方法，分别平行制备6份样品溶液，测得芍药苷的平均含量为0.475 mg/mL，RSD=1.6%(n=6)。

2.9 加样回收率试验 精密吸取已知芍药苷含量(0.462 mg/mL)的桃红四物口服液1mL，精密加入芍药苷对照品溶液(0.11 mg/mL)4.0mL，按照“2.3”项制备样品供试液6份，按“2.1”项色谱条件分析，计算回收率。结果平均回收率99.5%，RSD=1.2%。

样品测定:取3批样品，依法制备，精密吸取供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，进行含量测定，见表1。

表1 样品含量测定结果(mg/mL)

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工艺制备不含白芍的阴性样品，按样品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。结果芍药苷保留时间内无干扰峰影响。见图3。

图3 阴性液色谱图

2.5 线性关系考察 精密称定芍药苷对照品11.23 mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取1mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含芍药苷11.23μg的对照品溶液，摇匀。吸取上述对照品溶液 4、6、8、10、12、14、16μL注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标、芍药苷进样量为横坐标，做标准曲线，得线性回归方程:Y=20540 X+232890，r=0.9998。结果表明，芍

3 讨论

3.1 测定波长的选择 芍药苷对照品溶液经紫外分光光度计在200～400 nm下扫描，选择最大吸收波长230 nm作为测定波长。

3.2 流动相的选择 笔者对甲醇-0.1%磷酸水(14∶86)、甲醇-水(25∶75)、乙腈-水(12∶88)进行优化试验，结果甲醇-水(25∶75)、乙腈-水(12∶88)两个系统拖尾现象严重，分离效果不好，以甲醇-0.1%磷酸水(14∶86)为流动相时，分离效果好，保留时间适度，故确定甲醇-0.1%磷酸水(14∶86)为本方法的流动相［2］。

3.3 本文采用HPLC法对桃红四物口服液中的芍药苷进行含量测定，灵敏度高，分离度好，干扰少，重现性好，可以作为桃红四物口服液的质量控制方法。

［1］国家药典委员会.中国药典(一部)［S］.北京化学工业出版社，2010:96-97.

［2］顾海霞.高效液相色谱法测定孕康口服液中芍药苷含量［J］.安徽医药，2008，12(11):1051.