益肾活血中药对精索静脉曲张大鼠附睾内精子活力与密度的影响

曲晓伟，张培海，单中杰，韩前河，胡建庭，张蜀武

(1郑州人民医院，郑州450003;2成都中医药大学附属医院)

精索静脉曲张(VC)是引起男性不育的主要原因之一，占19% ～41%［1］。关于VC的治疗目前还存在许多争议，手术疗效并不确切［2］。在临床工作中我们发现，益肾活血中药强精胶囊对VC不育患者有较好疗效，但尚缺乏实验数据支持。精子密度与活力是反映生育力的最直接指标［3］。基于此，2008～2009年我们通过观察益肾活血中药强精胶囊对VC大鼠附睾精子活力与密度的影响，探讨其提高生育力的可能作用机理。

1 材料与方法

1.1 药物及主要设备 益肾活血方强精胶囊由四川省中西医结合医院中药房提供(0.4 g/粒)，益肾方五子衍宗胶囊由河北紫薇山制药有限责任公司生产(0.4 g/粒)，活血方少腹逐瘀胶囊由东阿澳东药业有限公司生产(0.45 g/粒)。WLJY-9000北京伟力彩色精子质量检测系统、中兴202型电热恒温干燥箱、YP1201N电子天平、DK-600A型电热恒温水箱。

1.2 动物模型建立及分组 选择青春期(2月龄)SD雄性大鼠100只(成都中医药大学动物实验中心提供)，体质量(200±20)g。常规饲养，整个实验过程中动物自由摄食饮水，室温控制在20～25℃，相对湿度为40%～60%。随机抽取10只为假手术组(仅显露左肾静脉，但不结扎)，余90只参照文献［4］以缩窄左肾静脉法建立VC大鼠模型。于造模后4周，麻醉大鼠，剖腹观察，用带测微器的目镜测量精索静脉直径，观察其曲张程度。若大鼠左侧精索内静脉直径比假手术组扩张约3倍及双肾大小无明显差异，则表明造模成功。造模成功者(72只)随机分为益活组(36只)和益肾组、活血组、模型组，后三组各12只。益活组又分为高、中、低浓度组(各12只)。

1.3 药物混悬液制备及用法 ①制备:按照人与大鼠体表面积比换算等效剂量，均在临用前用生理盐水配制。强精胶囊配制成浓度为 0.216、0.108、0.054 g/ml的强精胶囊混悬液，五子衍宗胶囊配制成0.130 g/ml的混悬液，少腹逐瘀胶囊配制成0.146 g/ml的混悬液。②用法:益活组的高、中、低浓度组分别给予浓度为 0.216、0.108、0.054 g/ml的强精胶囊混悬液，按10 ml/kg灌胃、1次/d、共4周;益肾组给予五子衍宗胶囊混悬液、活血组给予少腹逐瘀胶囊混悬液、模型组及假手术组给予生理盐水灌胃，剂量、用药时间均同益活组。

1.4 精子密度与活力检测方法 于末次给药后24 h，大鼠称重，断颈处死，无菌条件下摘除左侧附睾组织，拭干，在附睾尾部剪一小口，收集精液。采用WLJY-9000北京伟力彩色精子质量检测系统分析精子密度与活力。

1.5 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。数据以表示，组间比较采用单因素方差分析，其中方差齐者用LSD法，方差不齐者用Dunnett's T3检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况观察 造模后各组大鼠出现不同程度的摄食减少、精神萎靡、毛发枯黄、缺乏光泽，逐渐出现恶寒倦卧、反应迟钝、少动、体毛干枯脱落、消瘦等表现，中药灌胃后1周开始逐渐改善。实验中动物死亡10只，其中模型组3只，益活组的低、中浓度组和益肾组各1只，高浓度组、活血组各2只。死亡原因为术后感染、灌胃操作不当及大鼠相互咬斗致死。

2.2 各组附睾精子活力及密度比较 见表1。

表1 各组附睾精子活力及密度比较(±s)

表1 各组附睾精子活力及密度比较(±s)

注:与假手术组比较，*P ＜0.01;与模型组比较，△P ＜0.01;与高浓度组比较，★P ＜0.01

组别 n 精子活力(%) 精子密度(×106/ml)10 53.89±4.57 37.14±3.77模型组 9 26.26±5.89* 15.42±3.48*益活组高浓度组 10 47.64±4.60＊△ 32.73±4.33＊△中浓度组 11 35.51±4.30＊△★ 25.97±3.56＊△★低浓度组 11 27.62±4.71＊★ 18.92±3.03＊★益肾组 11 35.26±4.67＊△★ 24.50±3.41＊△★活血组 10 26.02±5.29＊★ 18.01±3.40假手术组＊★

3 讨论

VC是男性不育症的主要病因之一。虽然医学家对VC性不育症的病理机制作了大量的研究，如睾丸温度增高、毒物反流、自由基损害等学说，但迄今为止，仍未能清楚解释VC致生育力低下的确切病理机制。目前多采用精索静脉高位结扎术治疗VC。手术仅仅解决了精索静脉血液反流的问题，未能解决睾丸生精功能障碍和附睾功能障碍，所以诸多学者对手术治疗不育的疗效提出了质疑。另外，西医目前尚无特效治疗药物，在临床用药多为经验及非特异性药物，如乙烯雌酚、左卡尼汀、维生素族等。因此，探讨VC性不育症的发病机制，探索更为确切有效的治疗药物，势在必行，而中医药在此方面优势明显。

祖国传统医学中，VC性不育属筋瘤、筋疝、无子等范畴，其病因病机复杂，概括起来不外虚实二端，以肾虚为本，血瘀为标，肾虚导致血瘀，血瘀加重肾虚，互为因果，相互影响，造成生殖之精化生障碍，从而导致不育。

精子密度与活力是反映生育力的最直接指标。精子的运动能力是在附睾成熟过程中获得并得到发展的，该能力包括超激活运动和前向运动(精子在附睾中是不活动的，此处是指精子在体外稀释介质中的运动);精子活力(运动速度)的发展是不平行的。大鼠附睾头部和体部精子运动情况基本相似，但在附睾尾部，精子运动速度和运动的直线性均有明显增加。在人类，精子运动速度和直线性在附睾体尾部明显增加［5］。

本研究结果显示，模型组附睾精子活力与密度明显低于其他各组，与假手术组比较，除益活组的高浓度组外，余组大鼠附睾精子活力与密度均降低(P均＜0.01);益活组与益肾组均能明显提高精子活力与密度，益活组的高浓度组提高最明显(P＜0.01)，活血组改善不明显。结果表明益肾活血方强精胶囊能一定程度提高VC大鼠附睾内精子活力与密度。益肾活血中药强精胶囊方剂由仙灵脾、仙茅、菟丝子、枸杞子、熟地、当归、川芎、红花、丹参、鸡血藤、生黄芪、川牛膝等组成。仙灵脾、仙茅、菟丝子、枸杞子、熟地补肾以生精，当归、川芎、红花、丹参、鸡血藤等活血以化瘀，标本兼顾，使肾气得以充，瘀血得以去，生精功能得以恢复，达到治疗VC性不育的目的。

综上，益肾活血中药灌胃能够提高VC性大鼠附睾内精子活力与密度，促进附睾精子成熟，其功效优于单纯益肾和单纯活血中药。此外，精浆约占精液的95%以上，含大量营养精子、激发精子活力的重要物质，影响精子的成熟及运动［6］。益肾活血类中药是否通过改善附睾精子能量系统、提高前向运动蛋白等附睾精子成熟相关蛋白表达，以改善精子密度与活力，促进附睾精子成熟，从而提高生育力，有待进一步研究。

［1］Daughton CK，Nangia AK，Agarwal A.Pathophysiology of varicoceles in male infertility［J］.Hum Reprod Update，2001，7(5):473-481.

［2］张永康.精索静脉曲张的几个相关问题［J］.中国男科学杂志，2004，18(3):3-4.

［3］Elzanaty S，Malm J.Effects of ejaculation to analysis delay on levels of markers of epididymal and accessory sex gland functions and sperm motility［J］.J Androl，2007，28(6):847-852.

［4］刘建军，董强，杨宇如.实验性精索静脉曲张大鼠血清及睾内睾酮的变化［J］.中华男科学杂志，2007，13(4):335-337.

［5］陈文成，康熙雄，潘云，等.75例少精不育患者精细胞GSTM1基因检测结果分析［J］.山东医药，2010，50(19):28-29.

［6］郑贤红，高元奇，钱聪，等.不育男性精浆中性α-糖苷酶活性与精子参数关系探讨［J］.山东医药，2009，49(4):70-72.