微阵列酶联免疫法检测多项肿瘤标志物诊断结直肠癌的临床价值

高 纯，顾国浩，戴建青，公艳蕾，蒋 敏

(1苏州大学附属第一医院，江苏苏州215006;2南京医科大学附属苏州医院)

结直肠癌(CRC)是常见恶性肿瘤，因早期CRC多无特异性临床表现，至出现症状时多失去手术治疗的最佳时机，故早诊断、早治疗是提高CRC患者生存率的关键。研究显示，单项肿瘤标志物检测诊断CRC的敏感性或特异性较局限，多项肿瘤标志物联合检测有助于诊断CRC、判断其复发及转移、评价其术后疗效。微阵列酶联免疫法(Array-ELISA)是近年开展的新技术，可通过一次类似ELISA操作过程完成对多项肿瘤标志物的检测。为探讨Array-ELISA检测多种肿瘤标志物诊断CRC的临床价值，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选择2008年7月～2010年6月在苏州大学附属第一医院行结直肠手术患者68例，男37例、女31例，年龄33～64(43±5)岁;其中CRC 49例(CRC组)，结直肠良性疾病19例(良性疾病组，其中结肠息肉10例、慢性结肠炎6例、溃疡性结肠炎3例)。另选体检健康者71例作为对照组，其性别、年龄与患者组有可比性。

1．2 检测方法 抽取患者组术前(对照组查体时)清晨空腹静脉血2 ml，2 000～2 500 g/min离心8 min后分离血清，置4℃保存;采用Array-ELISA北京华大吉比爱生物公司产AE-1000生物芯片阅读仪及肿瘤标志物试剂盒，检测其血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗体(PSA)、CA125、CA199、CA153。

1．3 结果判定 AFP、CEA、PSA、CA125、CA199、CA153 的临界值分别为 20 ng/ml、5 ng/ml、4 ng/ml、35 U/L、37 U/L、28 U/L，超过临界值判定为阳性。应用敏感性［a/(a+c)］、特异性［d/(b+d)］、准确度［a+d/(a+b+c+d)］、阳性预测值［a/(a+b)］及阴性预测值［d/(c+d)］评价上述指标单项及联合检测诊断CRC的临床价值。a为真阳性数，b为假阳性数，c为假阴性数，d为真阴性数。联合检测的判定标准:联合指标中有一项超过临界值判定为阳性，各项指标均低于临界值判定为阴性。

1．4 统计学方法 采用SPSS17．0统计软件，计量资料为偏态分布时，其测定值以中位数和四分位数表示，采用Mann-Whitney检验;组间计数资料比较用χ2检验。P≤0．05为差异有统计学意义。采用Logistic回归法计算CRC诊断模型，用受试者工作曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC)分析各检测指标单项及联合检测诊断CRC的价值。AUC＜0．7示诊断价值较低，0．7～0．9示诊断价值中等，＞0．9示诊断价值较高［1］。

2 结果

2．1 三组各检测指标比较 见表1。

表1 三组各检测指标比较［M(P25，P75)］

2．2 CA199、CA125、CEA 单项及联合检测诊断CRC的临床价值 见表2。

表2CA199、CA125、CEA单项及联合检测诊断CRC的临床价值(%)

2．3 CA199、CA125、CEA单项及联合检测诊断CRC的AUC 以CA199、CA125与CEA三项指标作为变量，计算CRC的Logistic回归诊断模型为:PLog=ex/(1+ex);x= －3．269 0+0．026 3 CA199+0．139 6 CA125+0．085 8 CEA(PLog表示根据CA199、CA125与CEA联合推测CRC发生的概率)。CA199、CA125、CEA 检测的 AUC 分别为 0．767、0．667、0．814，三项指标联合检测的 AUC 为 0．867;三项指标联合检测诊断CRC的价值明显优于其单项检测(P均 ＜0．05)。

3 讨论

Array-ELISA技术是集ELISA、Array技术于一体的新检测技术，基于化学发光酶联免疫反应原理，经过酶和发光两级放大，具有很高的检测灵敏度、精密度、准确性和抗干扰能力，其与电化学发光法检测肿瘤标志物的总符合率高于90%［2］。

肿瘤标志物是指肿瘤细胞分泌或脱落到组织中的物质，或是宿主对寄生物反应产生并进入体液或组织的物质。一种肿瘤可有一种或多种肿瘤标志物产生。因此，合理选择多种肿瘤标志物联合检测某种肿瘤，既可保证其高特异性，又可增加其敏感性。在消化道肿瘤中，CA199诊断胰腺癌的特异性最高，其次为CRC。CA199与肿瘤大小、浸润程度及淋巴结转移相关，其与CEA均为诊断CRC敏感性较高的肿瘤标志物［3］。本研究显示，CRC组血清CEA敏感性最高，可能与其表达随肿瘤增长、病理类型发生改变，且与CRC的Duke分期有关;提示检测CRC患者的血清 CEA，对判断其病情变化有重要意义［4］。CA125是卵巢癌相关抗原，其对恶性卵巢癌的诊断及疗效评定有重要价值;在肺癌、肝癌和消化道肿瘤中表达较高，但敏感性较差，可作为肿瘤筛查的广谱指标［5］。本研究表明，CRC 组 CA199、CA125、CEA均明显高于正常对照组与良性疾病组，其中CA199、CA125、CEA联合检测诊断CRC的敏感性为73．47%、准确度为85．61%，均高于其单项指标;提示三项指标联合检测可提高诊断CRC的敏感性和准确度。另外，采用 Array-ELISA技术将CA199、CA125、CEA 点阵于一个微孔中，一次、2 h内即可检出该三项指标，可明显节省操作时间。

Logistic回归是一种多因素回归模型，通过拟合最佳回归曲线，可分析多种肿瘤标志物联合检测诊断CRC的作用。建立回归曲线方程，可避免将肿瘤标志物简单叠加导致其特异性降低，提高肿瘤诊断的正确率。本研究中，CRC组CA199、CA125、CEA明显高于正常对照组及良性疾病组，故将该三项指标作为变量，建立CRC的Logistic回归诊断模型。

理想的肿瘤标志物要求既灵敏，又特异，灵敏度高有利于筛选，减少漏诊;特异性高有助于鉴别诊断，避免误诊。因单项肿瘤标志物在提高灵敏度的同时，可降低其特异性，而提高其特异性的同时也会降低其灵敏度;因此，评价肿瘤标志物诊断CRC的临床价值时，不宜单纯地检测其灵敏度或特异性，而应采用ROC曲线将二者结合起来进行综合分析，并依据AUC判定各肿瘤标志物诊断CRC的准确性［6］。本研究 AUC分析发现，CA199、CEA 对 CRC的诊断价值中等，CA125对CRC的诊断价值较低，CA199、CA125、CEA联合检测诊断CRC的价值优于其单项检测，可较准确地诊断CRC。

总之，本研究显示 CA199、CA125、CEA是CRC的肿瘤相关标志物，采用Array-ELISA技术联合检测三项指标，可提高诊断CRC的准确性。

［1］赵耐清．临床医学研究设计和数据分析［M］．上海:复旦大学出版社，2005:241-252．

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［5］张利新，周建平，王春梅，等．多种肿瘤标志物蛋白芯片检测糖链抗原CA125的临床价值分析［J］．现代肿瘤医学，2007，15(3):415-416．

［6］张克坚，杨振华．应用ROC曲线图评价检验项目的临床准确性［J］．江西医学检验，1999，17(3):189-191．