“瘦肉精”检测卡（试纸条）质量验证试验

卢明艳 何雷堂 马瑞林 郑丽敏 刘海琴

“瘦肉精”检测卡（试纸条）（目前主要指盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三种试纸条）由于具有灵敏度高（3～5 μg/kg）、检测时间短（3～5 min）、准确度高、易贮存（保存温度4～30℃）、携带方便、可进行现场操作等特点，而成为猪尿中违禁药物筛查时的首选产品，广泛地应用于生猪产地检疫环节、运输环节、屠宰环节。使用“瘦肉精”检测卡（试纸条）对猪尿中违禁药物进行初步筛查，已成为法定检测程序。

当前，国内生产“瘦肉精”检测卡（试纸条）的厂家众多，试剂条的质量参差不齐，同一厂家不同批次的产品质量差异很大，致使现场检测过程中，要么假阳性样品数量太多，增加了监管部门确认经费的负担，要么出现假阴性样品，导致兽药残留超标的畜产品流入市场，造成畜产品质量安全隐患。

因此，“瘦肉精”检测卡（试纸条）在使用前进行质量验证是确保试纸条检测结果准确有效的重要手段，必不可少。笔者在实际工作中对6个厂家的12批次产品进行了质量验证，现将验证方法及体会写下来，供同行商榷。

1 验证参数及判定标准

1.1 检测阈值

即试剂条能检测出来的最低浓度值。当检测阈值等于试纸条标示的检测限时，该试纸条为合格。当其小于或大于检测限时，会导致高的假阳性率或高的假阴性率，此试纸条判为不合格。

1.2 假阴性率和假阳性率

国内外对于快速检测技术的一个基本原则是“绝不能有假阴性，但允许有假阳性”。按照农业部兽药残专家委员会评审快速检测卡（试纸条）备案时的有关要求，快速检测卡（试纸条）的假阳性率应＜10%。

2 材料

2.1 空白猪尿样品20头份，分别编号为A1、A2、A3、……、A20。从鹤壁市某养猪场采集，用液－质联用仪方法检测，未检出盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇。

2.2 盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准品，从中国计量科学研究院购买。

2.3 盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液（1 mg/ml）配制方法：准确称取盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准品约10.0 mg，分别置于10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。贮存于－18℃冰箱中，有效期为1年。

2.4 盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准中间工作液（10 μg/ml）配制方法：用微量移液器移取标准储备液100 μl，置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。贮存于－18℃冰箱中，有效期为1个月。

2.5 微量移液器:0～1000 μl。

2.6 瘦肉精试纸条：盐酸克伦特罗试纸条（检测限为3 ng/ml）、莱克多巴胺试纸条（检测限为2 ng/ml或5ng/ml）、沙丁胺醇试纸条（检测限为5ng/ml或3ng/ml）。

2.7 阴性猪尿样品一制备方法：取2.1节空白猪尿样品任一头份（例如：A1）5 ml，置于50 ml塑料瓶中。

2.8 阴性猪尿样品二制备方法：取2.1节空白猪尿样品任一头份（例如：A1）5 ml，置于50 ml塑料瓶中。再分别移取适量盐酸克伦特罗的标准中间工作液加入空白猪尿中，配制浓度为盐酸克伦特罗检测卡（试纸条）标示的检测限－1的阴性猪尿样品（即盐酸克伦特罗的浓度为2 ng/ml），混匀备用，现配现用。

用同样的方法分别制备莱克多巴胺、沙丁胺醇的阴性猪尿样品（莱克多巴胺的浓度为4 ng/ml或1 ng/ml，沙丁胺醇的浓度为2 ng/ml或4 ng/ml）。

2.9 阳性添加样品

2.9.1 阳性猪尿样品一制备方法：取2.1节空白猪尿样品任一头份（例如：A1）5 ml，置于 50 ml塑料瓶中。再移取适量盐酸克伦特罗标准中间工作液加入空白猪尿中，配制浓度为盐酸克伦特罗检测卡（试纸条）标示的检测限的阳性猪尿样品（即盐酸克伦特罗的浓度为3 ng/ml），混匀备用，现配现用。

用同样方法，制备莱克多巴胺、沙丁胺醇阳性猪尿样品一（莱克多巴胺的浓度为5 ng/ml或2 ng/ml，沙丁胺醇的浓度为3 ng/ml或5 ng/ml）。

2.9.2 阳性猪尿样品二制备方法：取2.1节空白猪尿样品任一头份（例如：A1）5 ml，置于 50 ml塑料瓶中。再移取适量盐酸克伦特罗标准中间工作液加入空白猪尿中，配制浓度分别为10 ng/ml的盐酸克伦特罗阳性猪尿样品混匀备用，现配现用。

用同样方法，制备莱克多巴胺、沙丁胺醇阳性猪尿样品二（莱克多巴胺的浓度为10 ng/ml，沙丁胺醇的浓度为 10 ng/ml）。

3 方法

3.1 试纸条的使用步骤及结果判读

将未开封的试纸条恢复至室温。将试纸条水平放置，用滴管向试纸卡孔缓慢逐渐加入3滴不含气泡的检测液（约 80 μl）。反应 3～5 min后判读结果。结果判定：用肉眼观察，依照说明书进行结果判定。

3.2 检测阈值的测定

用盐酸克伦特罗试纸条分别对阴性猪尿样品一、阴性猪尿样品二、阳性猪尿样品一、阳性猪尿样品二进行检测，每个样品两个重复，记录下来呈现阳性的最低浓度值。如果阳性猪尿样品二也不呈现阳性，则配制浓度更高的阳性猪尿样品进行检测，直至出现阳性结果为止。然后，在出现阳性的最低浓度值和该值前一个浓度值之间配制数量差为1 ng/ml的系列浓度的阳性猪尿样品，每个浓度各用2条试纸条进行检测，出现阳性的最低浓度值即为该试纸条的检测阈值。

3.3 假阳性率的测定

取空白的猪尿样品 A1、A2、A3、……、A20各一份，每份量为10 ml，然后，按照阴性猪尿样品二的制备方法，制备 A1′、A2′、A3′、……、A20′等 20 份阴性猪尿样品。对 A1、A2、A3、……、A20，A1′、A2′、A3′、……、A20′等40份猪尿样品用检测卡检测，每个样品做两个重复，在常温（20～30℃）条件下，按照说明书，进行结果判定，统计假阳性数，按照下面的公式计算假阳性率。

假阳性率(%)=假阳性数/80×100

3.4 假阴性率的测定

按照阳性猪尿样品一的制备方法，制备A1″、A2″、A3″、……、A20″等20个阳性猪尿样品，用检测卡进行检测，每个样品做两个重复，在常温（20～30℃）条件下，按照说明书，进行结果判定，统计假阴性数，按照下面的公式计算假阴性率。

假阴性率(%)=假阴性数/40×100

4 结果与讨论

笔者在工作中，对6个厂家12批次的试纸条进行了验证，现将结果简要整理如下。

4.1 验证参数

试纸条在使用前，应对三个参数进行验证，分别是：检测阈值、假阴性率、假阳性率(见表1)。

但是，从表1中发现，检测阈值高于检测限的情况较为常见，有的产品检测阈值甚至达到30 ng/ml，是检测限的6倍。另外，根据国家相关规定，试纸条用于筛选方法时，假阴性率必须为零。因此笔者认为，如果没有条件对三个参数都进行验证时，应至少对“检测阈值”、“假阴性率”这两个参数进行验证。

4.2 每批产品是否都要验证

表1 不同厂家试纸条测定结果

从表1中可以看出，试纸条产品质量参差不齐，差别极大。即使有备案文号的试纸条每批产品的质量也有差异，如杭州B公司生产的两批莱克多巴胺试纸条。因此建议，每批产品使用前，均须进行验证。

4.3 检测阈值的问题

笔者认为“检测阈值”这个参数应先验证，根据它的结果，再考虑其它参数是否需要验证。笔者认为当其高于或低于检测限时，由于出现高的假阴性率或假阳性率，导致问题畜产品流入市场或增加了监管部门确认经费的负担，因此均应判为不合格。只有二者相等时，才进行另外两个参数的验证。

4.4 假阳性率的问题

由于尿液中样本成分复杂，特别是在含有盐酸克伦特罗结构相近的代谢物时，都将导致出现假阳性，因此，试纸条出现假阳性是不可避免的。但由于检测卡主要用于筛选方法，可以允许一定的假阳性率。根据相关规定，假阳性率允许10%以下。

[1]农业部农医发[2005]17号文件“关于发布《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案审查技术资料要求》和《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准》的通知”.

[2]GB/T22147—2008.饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定.

[3]农业部1025号公告-16-2008动物尿液中盐酸克伦特罗残留检测气相色谱-质谱法.

[4]谭美英.盐酸克伦特罗快速检测卡的检测效果评价[J].湖南饲料，2006(6):38.