七才汤对小鼠肠道菌群影响的研究

李巧巧，王 莉，胡永红

1.中山大学肿瘤防治中心放疗科(广东 广州 510060) 2.中山大学肿瘤防治中心研究所(广东 广州 510060)

七才汤是由党参、白术、茯苓、甘草、猴头菇、白芍、陈皮等7味中药组成的经验方。为探讨七才汤对肠道菌群的影响，我们比较了灌胃前后小鼠体内肠道菌群数的变化，以期为七才汤的临床应用提供实验依据。

1 材料和方法

1.1动物清洁级雄性BALB/c小鼠48只，体重(20.0±2.0)g，中山大学实验动物中心提供(合格证号：SCXK(粤)2009-0011)。小鼠于代谢笼内单独饲养，温度(22±2)℃，湿度58%～60%。

1.2药物和试剂七才汤(党参、白术、茯苓、甘草、猴头菇、白芍、陈皮)，常规煎制，浓缩至0.5 g/mL生药量，4℃保存，给药前复温至25～30℃。

1.3细菌和培养基双歧杆菌、乳杆菌、拟杆菌、肠杆菌和肠球菌、产气荚膜梭菌均由卫生部食品卫生检验所提供。BBL、LBs、EMB、Ec、NN、改良GAM培养基均为自制。稀释液(0.05%灭菌酵母粉水溶液)自制。

1.4主要仪器MLS-3780高压蒸汽灭菌器(日本三洋)；SW-CJ-2F洁净工作台(苏州净化)；R-210/215旋转蒸发仪(瑞士Buchi)；AX204电子天平(瑞士梅特勒)；BX51荧光显微镜(日本 OLYMPUS)；YQX-II型厌氧培养箱(上海予腾)。

1.5 方法

1.5.1 动物分组与给药 BALB/c小鼠48只，随机分为对照组、七才汤低、中、高剂量组，每组12只。按七才汤成人日服剂量0.15 g/kg的10倍剂量设定中剂量组(1.5 g/kg)、低剂量组(0.75 g/kg)、高剂量组(3.0 g/kg)。实验组以相应剂量的七才汤灌胃，对照组灌胃给予等量蒸馏水，灌胃量0.2 mL/10 g体重，每日1次，连续14 d。最后一次灌胃后24 h测定肠道菌群的变化。

1.5.2 观察动物形态及体重 每天观察和记录各组小鼠外形、活动、饮食、排便情况，于实验第1 d、第7 d、第14 d记录小鼠体重。

1.5.3 肠道菌群检测 小鼠在给药前及末次给药后24 h，分别用无菌棉签挑取新鲜粪便0.1 g，置于干燥灭菌小试管中，立即加入1.0 mL无菌水，置于振荡器上充分振荡5 min制成均匀悬液。再依次10倍稀释至10-10，选择合适的2个稀释度样品0.1 mL接种于不同的选择性培养基上，每个稀释度做三个平行板，用玻璃涂棒涂抹均匀。平板培养基接种后，对肠道主要菌群进行培养[1](培养方法见表1)。

菌落长出后，以其形态鉴定计数6种肠道细菌菌落。计算同一稀释度平均菌落数、每克粪便中菌落形成单位(CFU/g)。每克粪便的菌数(CFU/g)=菌落数×菌落数的稀释度，最后的实验数值以每克粪便中的细菌菌落数的对数值(lgCFU/g)表示。

表1 小鼠肠道主要菌群的培养条件

2 结果

2.1小鼠表征观察各组小鼠饮食正常，行动活跃，皮毛整齐光滑，粪便无异常。

2.2小鼠体重变化各组小鼠随时间增加体重增长明显，体重变化见表2。实验组小鼠与对照组相比，体重无统计学差异(P>0.05)。实验结束解剖小鼠，未见异常。

2.3对肠道菌群的影响实验前后，各组小鼠肠道内菌群数量的变化如表3。实验前七才汤组小鼠各种菌群数量与对照组无差异(P>0.05)。灌胃前后，对照组小鼠肠道的各种菌群数量无差异(P>0.05)。与给药前相比，七才汤低剂量组小鼠肠道内菌群数无差异(P>0.05)；而七才汤中剂量和高剂量组小鼠双歧杆菌、乳杆菌和拟杆菌群数量增加(P<0.01或P<0.05)，有肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌群数量减少(P<0.05)。

表2 小鼠体重变化的情况

3 讨论

人和动物肠道中存在着数量庞大、结构复杂的正常菌群，根据肠道菌群在宿主体内的生化反应及对宿主的作用效果，可分为有益菌和有害菌两大类。一般情况下，肠道中有益菌占绝对优势，与致病菌保持一个平衡状态。这种平衡在被打破的情况下,形成肠道菌群失调，引发疾病或加重病情。

表3 实验前后小鼠肠道内有害致病菌群的数量

双歧杆菌和乳杆菌是肠道内主要的有益菌,对于维护机体的健康具有重要的意义[2]。双歧杆菌可通过抑菌、增强免疫和抗肿瘤、营养等发挥对机体的保护作用。乳杆菌可以通过抗氧化、抗过敏免疫调节，对机体和肠道的健康有积极的作用。它在肠道菌群中的含量能反映肠道菌群的健康状态。肠杆菌和产气荚膜梭菌是肠道最常见的病原菌，通过感染、腹泻和腐败等发挥作用[2]。

我们的研究证实七才汤中、高剂量组小鼠肠道内双歧杆菌、乳杆菌和拟杆菌的菌群数增多，肠球菌、肠杆菌和产气荚膜梭菌的数目减少，这表明七才汤对肠道菌群有调节作用,可以促进小鼠肠道中益生菌(双歧杆菌、乳杆菌和拟杆菌)的生长增殖,同时可抑制有害致病菌(肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌)的生长。

七才汤可以调节肠道菌群，但其作用的可能机制目前尚不清楚。七才汤由党参、白术、茯苓、甘草、猴头菇、白芍、陈皮等7味中药组成。相关研究证实党参、白术、茯苓、甘草能够升高肠道双歧杆菌和乳杆菌的数目，促进衰老小鼠肠道菌群恢复至正常水平[3]，其作用可能与增加正常菌群代谢产物乙酸含量、扶植正常菌群生长、增强肠道局部免疫功能有关[4]。猴头菇有较强的抑菌、抗肿瘤、提高免疫力[5]、抗氧化和调节肠道菌群[6]等作用，其发挥菌群调节主要成分可能是其含有的单糖、多糖。白芍提取的主要单体成分芍药苷具有抗血凝、免疫调节、止痛、抗高血糖等作用，可以为肠道菌群提供碳源[7]，从而调节肠道菌群数量。

总上,七才汤具有调节肠道菌群的作用，但其发挥调节作用的主要成分、各成分间的相互作用以及确切的作用机制有待于进一步的研究。

[参考文献]

[1] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范(2003年版)[S].809.

[2] 王卓，彭颖，李晓波.四君子汤对两种脾虚模型大鼠肠道菌群紊乱的影响[J].中国中西医结合杂志,2009,2(9):825-829.

[3] 刘君星,王琳,薛艳华,等.四君子汤对衰老小鼠肠道菌群的影响[J].中国老年学杂志,2006,26(12):1 683-1 684.

[4] 鞠宝玲,唐小云,张红军,等.四君子汤对脱污染小鼠肠道菌群及肠粘膜免疫功能影响的研究[J].中药药理与临床,2008,24(5):1-3.

[5] 聂继盛,祝寿芬.猴头多糖抗肿瘤及对免疫功能的影响[J].山西医药杂志,2003,32(2):1 072-1 091.

[6] 李好,于世军,王伟,等.富硒猴头菇对小鼠肠道菌群的调节作用[J].中国微生态学杂志,2010,22(8):697-700.

[7] 胡渝慧,陈文倩,张彦青,等.肠道菌群对冠心Ⅱ号方中芍药苷降解作用的研究[J].中国药学杂志,2007,42(23):1 813-1 817.